消痰通腑方对肥胖小鼠体重及脂代谢的影响
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[摘要] 目的 观察消痰通腑方对肥胖小鼠体重及脂代谢的影响，探讨其作用机制。 方法 将34只小鼠随机分成正常对照组（n=12）和肥胖造模组（n=22）。用高脂饲料建肥胖模型，11周后，两组各处死6只小鼠，检测体重、体脂、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、白细胞介素-6（IL-6）及脂联素（ADP）水平。将剩余的肥胖造模组小鼠（n=16）剔除体重最轻的4只小鼠后，随机分为肥胖模型组（n=6）及消痰通腑方组（n=6），消痰通腑方小鼠组予消痰通腑方灌胃，正常对照组及肥胖模型组均灌胃等体积蒸馏水，每日1次，时间为4周。实验结束后分别检测小鼠体重、体脂、TG、TC、IL-6及ADP水平。 结果 肥胖造模组小鼠第11周体重、体脂及TC、IL-6水平均显著高于正常对照组，血清ADP水平显著低于正常对照组（P < 0.01）。消痰通腑方组小鼠体重、体脂显著低于肥胖模型组（P < 0.05），TC及IL-6水平低于肥胖模型组（P < 0.05），血清ADP水平高于肥胖模型组（P < 0.05）。 结论 消痰通腑方能降低肥胖模型小鼠的体重、体脂、TC及IL-6水平，其机制可能与增加血清ADP水平有关。
[关键词] 消痰通腑方；总胆固醇；三酰甘油；白细胞介素-6；脂联素
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）06（a）-0015-04
[Abstract] Objective To observe the effect of Xiaotan Tongfu Prescription on weight and lipid metabolism in obese mice， and to explore its mechanism. Methods 34 mice were randomly divided into the normal control group （n=12） and the obese model group （n=22）. High-fat diet was given to establish obese modeling. After 11 weeks， 6 mice of each group were sacrificed， to test body weight， body fat， triglyceride （TG）， total cholesterol （TC）， interleukin-6（IL-6） and adiponectin （ADP）. The remaining obese model group mice （n=16） to eliminate the lightest weight of 4 mice were randomly divided into the obese model group （n=6） and Xiaotan Tongfu Prescription treatment group （n=6）. Drugs were given to the mice in Xiaotan Tongfu Prescription treatment group once a day for 4 weeks， the mice in other groups were given the same volume of distilled water. In the ending， the mice were killed and body weight， body fat， TG， TC， IL-6 and ADP were all detected and analyzed. Results IN 11 weeks， the body weight， body fat and TC， IL-6 of the obese model group were significantly higher than those of the normal control group， serum ADP level was significantly lower than that of the normal control group （P < 0.01）. The body weight， body fat of the Xiaotan Tongfu Prescription treatment group were significantly lower than those of the obese model group （P < 0.05）， TC and IL-6 levels were lower than those of the obese model group （P < 0.05）， serum ADP level was significantly higher than that of the obese model group （P < 0.05）. Conclusion Xiaotan Tongfu Prescription can reduce the body weight， body fat， TC and IL-6 levels of the obese model mice， the mechanism may be associated with the increased ADP level.
[Key words] Xiaotan Tongfu Prescription； Total cholesterol； Triglyceride； Interleukin-6； Adiponectin
随着经济的发展，高脂饮食增多，体力劳动减少，肥胖人口逐年增加。肥胖症人群的高血压、冠心病、糖尿病及恶性肿瘤的发生率都高于普通人群[1]。肥胖的危险性越来越受重视，已成为威胁人类健康的难题[2-3]。寻找一种安全有效的治疗方案有重要意义，临床发现，消痰通腑方有一定减肥、降脂的作用。本研究采用消痰通腑方干预高脂饮食诱导的肥胖模型小鼠，观察其体重及脂代谢的改变，为进一步探讨消痰通腑方减肥降脂作用机制提供客观依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康清洁级C57BL/6小鼠，34只，雄性，体重（20±2）g，4周龄，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，实验动物使用许可证：SYXK（沪）2012-0003。自由进食、饮水，环境温度为（22±3）℃，相对湿度为40%～55%，每天光照12 h。小鼠饲料及40%高脂饲料由上海普路腾生物科技有限公司提供，许可证号码：沪饲证：（2014）04001。小鼠饲料配方：基础饲料为47%，水分为10%，粗蛋白质为20.5%，粗脂肪为4%，粗纤维为5%，粗灰分为8%，钙为1.8%，总磷为1.2%，赖氨酸为1.32%，蛋氨酸+胱氨酸为0.78%，氯化钠为0.4%。高脂饲料配方：基础饲料为41.79%，猪油为40%，胆固醇为1%，蛋黄粉为12%，胆盐为0.2%，蔗糖为5%，甲基硫氧嘧啶为0.01%。
1.2 药物
消痰通腑方，主要由制半夏、制大黄、白芍、细辛等组成，由第二军医大学长征医院监制、江阴天江药业有限公司生产，批号：1011370。
1.3 试剂与仪器
试剂：总胆固醇（TC）试剂盒及三酰甘油（TG）试剂盒均购自北京北化康泰临床试剂有限公司，生产批号：20130119；白介素（IL）-6 ELISA试剂盒购自美国Rapidbio公司，批号：DRE30044；脂联素（ADP）试剂盒购自美国RB公司，生产批号：201412。仪器：离心机由上海安亭科学仪器厂制造，型号：TDL80-2C；电子分析天平由上海精天电子仪器有限公司制造，型号：JA2003A；移液器、离心管由Eppendorf公司提供。
1.4 分组造模及给药
34只小鼠采用随机数字表法，选取12只作为正常对照组，以基础饲料喂养；另外22只作为肥胖造模组，以高脂饲料喂养，每周测体重1次并记录。当肥胖造模组小鼠平均体重超过正常对照组小鼠平均体重的20%定义为肥胖模型建成[4]，剔除体重最轻的4只小鼠。正常对照组及肥胖造模组各随机处死6只小鼠，检测相关指标。将剩余的12只肥胖小鼠随机分为肥胖模型组及消痰通腑方组，各6只；剩余的6只正常对照组小鼠仍为正常对照组。正常对照组小鼠以基础饲料喂养，肥胖模型组小鼠及消痰通腑方组小鼠以高脂饲料喂养。消痰通腑方组小鼠予消痰通腑方0.4 mL/只灌胃，每日1次，时间为4周，正常对照组及肥胖模型组均灌胃等体积蒸馏水。每周测体重1次并记录。
1.5 标本处理及检测指标
肥胖模型建成时，正常对照组及肥胖造模组各随机选取6只小鼠，空腹6 h，测体重，眼眶取血，处死。血标本静置20 min后，3000 r/min离心20 min，分离血清，-80℃保存。ELISA法检测血清IL-6和ADP水平，酶法检测TC和TG水平。小鼠打开腹腔，提取生殖器附近脂肪组织，称取湿重，计算体重净增量（体重净增量=动物死亡时体重-实验初始体重）、体重增长率（体重增长率=体重净增量/实验初始体重×100%）、体脂率（体脂率=体脂总重/动物死亡时体重×100%）。
1.6 统计学方法
应用 SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐时，组间两两比较采用LSD-t检验，方差不齐时，组间两两比较采用Dunnett's T3检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 正常对照组与肥胖造模组小鼠体重及体脂水平比较
正常对照组与肥胖造模组小鼠初始体重差异无统计学意义（P > 0.05），至第11周时喂养高脂饲料的肥胖造模组小鼠体重超过正常对照组20%，肥胖模型建成。肥胖造模组在第11周时体重、体重净增量、体重增长率、体脂总量及体脂率均显著高于正常对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表1。
2.2 正常对照组与肥胖造模组小鼠血脂及脂联素水平比较
在11周时，肥胖造模组小鼠TC及IL-6水平显著高于正常对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；两组TG水平差异无统计学意义（P > 0.05）；肥胖造模组小鼠血清ADP水平显著低于正常对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表2。
2.3 消痰通腑方对肥胖小鼠体重及体脂的影响
在15周时，肥胖模型组小鼠体重、体脂总量及体脂率较正常对照组显著升高（P < 0.01），两组体重净增量及体重增长率差异无统计学意义（P > 0.05），但从肥胖模型组小鼠体重净增量数据看仍可见增长趋势。经消痰通腑方干预4周后，消痰通腑方组小鼠体重及体脂总量均显著低于肥胖模型组（P < 0.01），体重净增量、体重增长率及体脂率均低于肥胖模型组（P < 0.05）。见表3。
2.4 消痰通腑方对肥胖小鼠血脂及脂联素的影响
在15周时，肥胖模型组小鼠TC及IL-6水平均显著高于正常对照组（P < 0.01），TG水平高于正常对照组（P < 0.05），血清ADP水平显著低于正常对照组（P < 0.01）。经消痰通腑方干预后，消痰通腑方组小鼠TC及IL-6水平低于肥胖模型组（P < 0.05），血清ADP水平高于肥胖模型组（P < 0.05）。见表4。
3 讨论
消痰通腑方是以魏品康教授消痰散结八法中消痰散结导滞法为指导，以二陈汤和小承气汤化裁而来。笔者前期临床及实验研究发现，消痰通腑方可以降低患者体内IL-6及C反应蛋白（CRP）水平[5]，减轻危重患者的炎性反应；降低肠道内炎症因子IL-6及活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶（AICD）的表达，防治结直肠癌前病变[6]；下调结肠癌肝转移组织中胰岛素样生长因子-Ⅰ及其受体蛋白、基因的表达，抑制小鼠结肠癌CT26原位移植瘤的生长，抑制肝脏转移[7-8]。
魏品康教授认为“痰”是消化道肿瘤的主要致病因素。这种“痰”是广义的“痰”，包括“痰”和“饮”，指脏腑功能失调或疾病状态下津液水湿代谢障碍产生的病理产物，痰生成后，蓄积于体内，日久可致局部微环境发生变化，此即“痰浊”。在某些因素如“气”和“火”的作用下，痰聚成结，化生痰核，萌生痰络，生为“恶痰”即消化道肿瘤[9]。而肥胖及高脂血症在中医亦属于“痰”的范畴，根据中医“异病同治”的原则，消痰通腑方可能也具有减肥降脂的作用。为扩大消痰通腑方的应用范围，本研究采用消痰通腑方干预高脂饮食诱导的肥胖模型小鼠，通过观察消痰通腑方对小鼠体重及脂代谢的改变，说明其对肥胖及高脂血症的可能作用，为进一步探讨消痰通腑方减肥降脂作用机制提供客观依据。
高脂饮食与肥胖的发生密切相关，高脂饲料喂养小鼠造成的肥胖模型是目前最常用的方法，并与《素问・奇病论》中“此肥美之所发也，此人必数食甘美而多肥也”相符，故本文采用高脂饮食诱导肥胖模型。很多肥胖小鼠模型都显示出血脂水平升高[10-11]，本实验亦发现，肥胖造模组TC水平显著高于正常对照组，说明高脂饮食诱导的肥胖模型与高胆固醇血症相关。而经消痰通腑方干预后肥胖模型组小鼠的体重、体脂比及血脂水平均有所下降，说明消痰通腑方确实具有一定的减肥降脂作用。
肥胖的实质是体内脂肪的过量积累，导致脂肪组织超过了维持正常生理功能所需的比例。脂肪组织不仅是能量储存组织，还具有强大的内分泌功能，能分泌多种脂肪细胞因子，如瘦素、脂联素、抵抗素、肿瘤坏死因子-α等。脂肪细胞可通过其分泌的多种信号物质，分别与内分泌神经中枢、肾上腺、胰岛、肌、肝、心肌及血管内皮等细胞进行相互作用，形成复杂的神经-内分泌-免疫调节网络[12]。超重或肥胖状态下，脂肪组织分泌的多种脂肪因子可以引发、介导或参与炎性反应，而脂肪组织被巨噬细胞浸润，产生并释放多种炎症因子，如白介素、肿瘤坏死因子等，故有学者提出肥胖是一种慢性低度炎症状态，这种状态是高脂血症、冠心病、2型糖尿病及肿瘤等多种疾病的重要危险因素[13-15]。
IL-6是一种多功能炎症细胞因子，具有致炎和抗炎的双向功能，它的作用与组织中的含量有关，正常水平对机体有利，产生过多会引起一系列炎性损害[16]。肥胖患者血清IL-6浓度增加[17]，高脂血症亦与IL-6关系密切，特别是TC和低密度脂蛋白胆固醇与IL-6呈正相关[18]。IL-6能刺激肝脏产生急性期蛋白，参与动脉粥样硬化的过程[19]。
ADP具有胰岛素增敏、抗炎和抗动脉粥样硬等作用[20]。血清ADP水平降低是代谢综合征的一个独立于肥胖、胰岛素抵抗及炎症标志物的危险因素[21]。ADP具有强烈的调节脂质代谢的作用，能够通过激活AMPK途径及抑制TNF-α促脂解作用等方面发挥调节血脂代谢的作用[22-23]。另外，ADP也可以结合脂联素受体2激活PPARα和PPARγ，使脂肪进行β-氧化，降低血清TG和TC水平，改善肥胖[24]。基于以上理论及研究结果，本研究假设ADP处于痰浊环境的对立面，提出消痰通腑方通过提高ADP水平对抗痰浊环境的影响，清除痰浊环境，达到减肥降脂的目的。本研究显示，肥胖小鼠的血清ADP水平显著低于正常对照组，消痰通腑方干预后，ADP水平明显升高。提示消痰通腑方减肥降脂的作用机制可能与ADP水平的改变相关。
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（收稿日期：2016-03-01 本文编辑：程 铭）