兔脊髓缺血再灌注损伤后能量代谢与NF―κBp65表达变化
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇兔脊髓缺血再灌注损伤后能量代谢与NF―κBp65表达变化范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
【摘要】 目的：探讨脊髓缺血再灌注损伤（SCIRI）中能量代谢与nf-κbp65的变化规律。方法：40只新西兰大白兔采用肾下腹主动脉阻断45 min，建立脊髓缺血再灌注损伤模型。分别于缺血前、缺血45 min及再灌注30、60、120 min时取脊髓测定腺苷酸（ADP、AMP、ATP）、活性氧（ROS）、核转录因子-κBp65（NF-κBp65）、抑制蛋白-κBα（I-κBα）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白表达变化。结果：与缺血前比较，缺血45 min及再灌注30、60、120 min时脊髓腺苷酸及I-κBα均降低（P
【关键词】 脊髓缺血再灌注损伤； 能量代谢； NF-κBp65
【Abstract】 Objective：To assess the changes of energy metabolism and NF-κBp65 during spinal cord ischemia and reperfusion injury（SCIRI）. Method：The SCIRI model was made by clamping the infrarenal aortic for 45 minutes in 40 rabbits.Reactive oxygen species（ROS），the expression of nuclear factor-kappa Bp65（NF-κBp65），inhibitor-Kappa Bα（I-κBα）， intercellular adhesion molecule（ICAM-1） and the content of adenine nucleotide（ADP，AMP and ATP） in spinal cord tissue were determined before ischemia，45 minutes after ischemia，30，60 minutes and 120 minutes after reperfusion. Result： The spinal cord content of adenine nucleotide and I-κBα decreased while ROS，the expressions of NF-κBp65and ICAM-1 increased at 45 minutes after ischemia，30，60 minutes and 120 minutes after reperfusion as compared to the value before ischemia （P
【Key words】 Spinal cord ischemia-reperfusion injury； Energy metabolism； NF-κBp65
First-author’s address：Guizhou Provincial People’s Hospital， Guiyang 550002，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.09.008
脊髓缺血再灌注损伤（spinal cord ischemia-reperfusion injury， SCIRI）中脊髓神经细胞能量代谢异常将影响术后脊髓功能恢复[1-3]。研究证实，炎性反应是引起SCIRI的主要机制之一[4-5]。本研究通过观察SCIRI中脊髓腺苷酸代谢的变化来探讨抑制蛋白-κBα（inhibitor-kappa Bα，I-κBα）、核转录因子-κBp65 （nuclear factor-kappa Bp65，NF-κBp65）和细胞间粘附分子（intercellular adhesion molecule，ICAM-1）调控炎性信号转导在脊髓能量代谢障碍中的作用机制。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 鼠抗兔ICAM-1、I-κBα及NF-κBp65多克隆抗体（均为Sigma公司）；单磷酸腺苷（adenosine monophosphate，AMP）、二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）和三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）标准品（美国Sigma公司）；链霉亲和素-生物素复合物（strept avidin-biotin complex，SABC）试剂盒及活性氧（reactive oxygen species，ROS）试剂盒（均为中国上海研吉生物科技有限公司）。
1.2 动物模型的建立 40只健康新西兰大白兔 （贵阳医学院实验动物中心提供），雌雄不限，体重2～2.5 kg。采用左肾动脉下方腹主动脉夹闭法建立SCIRI模型。阻断45 min后松钳开放腹主动脉，恢复脊髓血液灌注，以造成腰段脊髓再灌注损伤。术中以生理盐水浸润的温纱垫覆盖腹腔脏器，直肠温度维持于36～37 ℃。
1.3 评价方法 分别于缺血前、缺血45 min及再灌注30、60、120 min时间点取脊髓L3～L4节段脊髓组织，其中一部分脊髓组织加入4 ℃生理盐水超声匀浆及3500 r/min离心5 min后取上清液置于-80 ℃冰箱冻存，备测脊髓组织ROS活力变化。另一部分脊髓组织固定于10%福尔马林中，作为脊髓组织免疫组织化学检测。按照试剂盒说明书催化L-Arg氧反应法测定ROS活力以及SABC免疫组织化学法测定ICAM-1表达、I-κBα和NF-κBp65的表达及核移位，使用Olympus BX51图像采集分析系统等距随机抽样摄片并定量分析各时间点ICAM-1、I-κBα和NF-κBp65细胞核阳性表达率和胞核平均灰度值，计算阳性细胞平均百分率，作为此片的阳性细胞计数。
[8] Kubota K，Saiwai H，Kumamaru H，et al.Neurological recovery is impaired by concurrent but not by asymptomatic pre-existing spinal cord compression after traumatic spinal cord injury[J].Spine， 2012， 37（17）：1448-1455.
[9] Ye B，Kroboth S L，Pu J L，et al.Molecular identification and functional characterization of a mitochondrial sulfonylurea receptor 2 splice variant generated by intraexonic splicing[J].Circ Res， 2009，105（11）：1083-1093.
[10] Cui Y，Zhang H，Ji M，et al.Hydrogen-rich saline attenuates neuronal ischemia-reperfusion injury by protecting mitochondrial function in rats[J].J Surg Res，2014， S0022-4804（14）：00 529.
[11] Koriyama Y，Nakayama Y，Matsugo S，et al.Anti-inflammatory effects of lipoic acid through inhibition of GSK-3β in lipopolysaccharide-induced BV-2 microglial cells[J].Neurosci Res， 2013 ，77（1-2）：87-96.
[12]王义生，张振，张鑫，等. 乙醇对兔骨髓间充质干细胞6种神经递质mRNA表达的影响[J].郑州大学学报：医学版， 2011，46（3）：357-360.
[13] Xu Y Q，Jin S J，Liu N L，et al.Aloperine attenuated neuropathic pain induced by chronic constriction injury via anti-oxidation activity and suppression of the nuclear factor kappa B pathway[J].Biochem Biophys Res Commun， 2014 ，451（4）：568-573.
[14]张鹏，宋来君，杨波，等. 人脐血间质干细胞移植对脑创伤大鼠行为学和学习、记忆评分的影响[J].郑州大学学报：医学版，2006，41（2）：233-235.
（收稿日期：2014-09-29） （本文编辑：蔡元元）