红龙鱼鳃部肿瘤的初步研究
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摘要：对红龙鱼（Scleropages formosus）鳃部肿瘤进行了病理切片研究。结果表明，该肿瘤是由外界不良因素长期刺激导致的腺体大量分泌，纤维素、蛋白、炎症细胞大量分泌纤维化而成的疏松结蹄组织囊肿性肿瘤。
关键词：红龙鱼（Scleropages formosus）；肿瘤；鳃部
中图分类号：S943 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）12-3147-03
DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2016.12.035
Abstract： In this study， the pathological section were adopted to analyze the gill tumor of Scleropages formosus. The results showed that the tumor belonged to cystic tumor of loose connective tissue which induced by too much secretion of cellulose， proteins and inflammatory cells from glands and secretion fibrosis. The root reason was long-term stimulation from adverse external factors.
Key words：Red arrowana（Scleropages formosus）； tumor； gill
红龙鱼（Scleropages formosus）属古代鱼类，骨舌鱼科，繁殖能力弱，雌鱼产卵，雄鱼含在口中进行孵化和养育，行为非常奇特。因其嘴上的两条胡须加上闪光发亮的大鳞片及其远古的身世，使人们自然而然地将它与神秘的龙联系起来，称为“龙鱼”。在东南亚、港澳台地区和国外华人集中的地方，龙鱼被视为神鱼，被认为可以旺家、镇宅、避邪，作风水鱼来养，尤其是红龙鱼，由于濒临绝种，在1980年华盛顿野生动物保护条约列为甲级保护动物而身价高涨。在港澳台，一条红龙鱼的价格有的超过百万元，被视作家财和身份地位的象征。日前，有媒体报道称，湖北省武汉市汉口球场路花鸟市场里，一条身长50 cm，质量3～4 kg的红龙鱼，标价268万元。
红龙鱼体格强健，一般不容易生病。常见的疾病主要有翻鳃、水霉、白点、肠炎等[1]。对于红龙鱼鳃部肿瘤国内外文献尚未见报道。本文主要对其鳃部肿瘤进行了病理研究，以期为龙鱼鳃部肿瘤疾病的防治提供理论和技术支撑。
1 材料与方法
1.1 材料
试验病鱼为新加坡仟湖渔场1龄左右的辣椒红龙鱼，未见明显症状，在喂鱼过程中偶然通过腮盖和身体的缝隙看到有一个肿块。鱼体经过专用麻醉剂麻醉后，快速用手术剪刀切除（图1），肿瘤呈灰白色，约3～4 cm。
1.2 方法
1.2.1 修切与洗涤 将肿瘤组织分段切成2～3 cm的横断面，用70%乙醇或流水进行冲洗。
1.2.2 脱水与透明 将肿瘤组织块50%乙醇―70%乙醇―85%乙醇―95%乙醇―无水乙醇梯度脱水，每个梯度时间为1 h。脱水后将组织放入二甲苯∶无水乙醇（1∶1，V/V）和二甲苯中各透明30 min，直到组织透明为止。具体时间视组织块的大小确定[2]。
1.2.3 浸蜡与包埋 将蜡熔化，使温箱温度保持约55～60 ℃，将已透明的组织放入熔点为54～56 ℃的二甲苯-石蜡混合液蜡杯中约40 min；再浸入第二个熔点为56～58 ℃的二甲苯-石蜡混合液蜡杯40 min；再浸入第三个熔点为58～60 ℃的二甲苯-石蜡混合液蜡杯约40 min。然后60 ℃脱蜡包埋。将熔化备用的石蜡注入纸盒内，用预热的镊子夹取组织放入盒中的适当位置，将切面朝向盒子的底部。以两手持纸盒两端轻轻放置冷水中，使纸盒一半浸入冷水中，用口吹气，使石蜡表面凝成一较厚层后，将纸盒急速全部浸入冷水中，待石蜡完全凝结变硬即可取出（约浸30 min左右）[3]。
1.2.4 切片 将包埋好的蜡块修切成方块形，让组织四周留有少许石蜡，蜡块两边切成平行的直线[4]。将蜡块底面熔化，迅速黏于小木块上，冷却后装在切片机上夹紧。用旋转切片机连续切片5张，厚度为5 μm。
1.2.5 贴片 把玻片放在展片台上，向玻片上滴几滴蒸馏水然后加热到40 ℃左右，将预先割开的蜡片摊于水面上，用拨针展平，拨正位置，倒去多余水滴，把玻片放入37～48 ℃温箱中烤24 h左右（粘片剂用一个鸡蛋的蛋清、500 mL蒸馏水和1 mL氨水混匀过滤而得）[5]。
1.3 染色
采用HE染色[6]。取已干燥的切片放入二甲苯缸中各脱蜡10 min，放入二甲苯与100%乙醇溶液（1∶1，V/V）混合5 min，100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5 min，依次放入95%至70%乙醇溶液各4 min，入蒸馏水冲洗，再放入苏木精中染色约15 min，用蒸馏水洗去多余染料后，入0.5%盐酸乙醇溶液分色，以镜检为准，用自来水蓝化15 min，使之恢复蓝色。再用蒸馏水过洗一次。放入70%的伊红乙醇溶液染30 s。乙醇溶液浓度梯度上行至95%（各1～2 min），入0.5%的伊红乙醇溶液染30 s至1 min，再依次入95%乙醇溶液和无水乙醇溶液脱水（各1～3 min），经二甲苯∶无水乙醇（1∶1，V/V）和二甲苯透明，最后取出玻片擦去多余的二甲苯，迅速滴树胶封固[7]。OLYMPUS显微镜观察。
2 结果与分析
由图2可见，囊肿内部有疏松结蹄组织相互交织形成囊泡状结构；由图3可见，囊泡边界清晰，囊壁较厚，分布不规则，浸润大量的淋巴细胞；囊泡附近有腺管、无血管、无柱状细胞、无有核细胞。未成熟囊泡呈现透明状结构，有不断扩张增大填充大囊泡趋势；囊壁无钙化灶。
切片时，病理组织柔软，大量白色液体从组织内排出，从图2看囊泡内液体排空后成空泡状，内有少量散落淋巴细胞。
3 小结与讨论
红龙鱼的肿瘤本身就不多见，鳃部的肿瘤就更罕见了，该病例是偶然获得，实属珍贵。对一些高等动物肿瘤性疾病的治疗一般采用手术切除的方法[8]，对水生动物来讲，由于生活在水环境里面，其疾病很难及时发现，更别提肿瘤性的疾病。红龙鱼等具有较高经济价值的鱼类主张采用手术方法对其肿瘤进行切除。本试验中该红龙鱼手术切除肿瘤后，恢复良好。
从病理切片来看，该鱼肿瘤内有疏松结蹄组织相互交织形成囊泡状结构，而且有大量的淋巴细胞，可能是红龙鱼鱼鳃受寄生虫、细菌、药物或者其水体里不良因素长期刺激后，鱼鳃腺体大量分泌，纤维素、蛋白、炎症细胞大量分泌纤维化而成的疏松结蹄组织囊肿性肿瘤[9]。随着囊肿不断增大，从而影响鱼在水中二氧化碳和氧气的交流，使龙鱼窒息而亡。
水生生物的健康与水体质量的优劣息息相关。红龙鱼的生存需要弱酸性至中性的水质，硬度要求软水。pH 6.5～7.5，DH值3～12，水温28～30 ℃较适宜，亚硝酸盐含量以及氯含量最好为零[10]。中国自来水大部分都偏硬，达不到养龙鱼的要求，需要进行软水处理，但很多养殖者忽略这些问题，由于硬水中的某些钙镁离子不能被龙鱼的鳃代谢掉，很可能在鱼的腮部聚集，形成鳃部疾病的发生甚至肿瘤的发生。
参考文献：
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