糖化血清白蛋白酶法快速检测初步评价与临床价值

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【摘 要】目的：验证酶法检测糖化血清白蛋白（GA）性能，评价其临床应用价值。 方法：检测269例2型糖尿病（T2DM）患者及96例健康对照着的空腹血糖（FPG），餐后2h血糖（2hBG），糖化血红蛋白（HbA1c）等指标；同时应用液态酶法测定糖化血清白蛋白及其他临床相关指标，分析糖化血清白蛋白（GA）与各检测指标的相关性。 结果：糖化血清白蛋白（GA）与糖化血红蛋白（HbA1c）具有良好的相关性，与空腹血糖（FPG），餐后2h血糖（2hBG）也具有良好的相关性。糖化血清白蛋白（GA）与长期血糖控制状况的相关性大于其与空腹血糖与餐后2小时血糖的相关性。糖化血清白蛋白是一个可反映血糖近期变化的优良且检测方便的指标，采用酶法测定的糖化血清白蛋白与各项血糖指标及糖化血红蛋白有较好的相关性。

【关键词】2型糖尿病；糖化血清白蛋白

【文章编号】1004-7484（2014）07-4164-02

【Abstract】Objective：To evaluate the clinical significance of fast enzymatic measuremeng of glycated albumin（GA） Methods：269 cases of patients with type 2 diabetes mellitus （DM）and 96cases of healthy controls were enrolled， forwhom the fasting plasma glucose（FPG）， postprandical 2 hours blood glucose（2hBG） and glucated hemoglobin （HbA1c） were measured. At the same time， the precision and linear rage of the detection kits were analyzed by the detection of samples and the correlation between GA and other indexes was evaluated.Results：GA is well correlated with HbA1c ，FPG，2Hbg. Lucica GA is significantly highly correlated with HbA1c，FPG，2Hbg. Lucica GA is a convenient and excellent index to reflect recent blood glucose fluctuation.

【Key words】Type 2 diabetes； Serum glycated albumin

糖尿病（DM）是一种病因和发病机理尚未完全明了的内分泌代谢性疾病，目前发病率仅次于心脑血管疾病和肿瘤。中国糖尿病发病率为2%-3%，并以每年千分之一的速度增长。血糖监测是糖尿病日常诊治工作中一个非常重要的环节，良好的血糖控制能有效缓解糖尿病急・慢性并发症的发生和发展。糖化血红蛋白（hemoglobinA1c， HbA1c）测定作为糖尿病长期血糖控制的金标准已广泛应用于临床[1]，其检测值可反映DM患者既往2-3月的平均血糖水平，可用于评估DM临床控制效果。科学的血糖监测是糖尿病综合管理的重要组成部分，贯穿糖尿病治疗与疗效评估全过程。目前，我国监测血糖的主要指标为：空腹血糖（FPG）口服葡萄糖耐量试验 （OGTT），餐后2h血糖（2hBG），糖化血红蛋白（HbA1c）及近几年发展起来的糖化血清白蛋白（GA）。

1空腹血糖（FPG）

正常参考值：3.6―6.1mmol/L

临床意义：①生理性高血糖：常见于餐后1―2小时，摄入高糖食物或情绪紧张肾上腺素分泌增加时。②病理性高血糖：内分泌腺功能障碍引起高血糖，颅内压增高，由于脱水引起的高血糖，麻醉，感染性疾病，毒血症情况下可出现高血糖。③生理性低血糖：可见于饥饿和剧烈运动。④病理性低血糖：对抗胰岛素激素分泌不足、严重肝病患者。

注意事项：取血后尽快离心分离出血清并检测。

2 口服葡萄糖耐量试验 （OGTT）

正常参考值：空腹血糖：3.89―6.1mmol/L

餐后一小时血糖：

餐后二小时血糖：

餐后三小时血糖：3.89―7.8 mmol/L

临床意义：①正常曲线：不论空腹血糖高于或低于6.1 mmol/L，口服葡萄糖后0.5―1小时达高峰值，峰值不超过10 mmol/L2小时恢复到空腹水平。②糖尿病型曲线：空腹血糖比正常人高，上升峰值 〉10` mmol/L，下降缓慢且峰值后移，出现尿糖。重要的判断指标为口服葡萄糖两小时后血糖仍高于7.8 mmol/L。空腹血糖正常而OGTT2小时血糖〉11.1 mmol/L可诊断为糖尿病。若空腹血糖〉7.8 mmol/L，而OGTT血糖水平在8.0―10.9 mmol/L，也可诊断为糖尿病。

注意事项：试验前三天，每日摄入碳水化合物不低于150 g，维持正常活动，停用各种影响糖代谢的药物，试验前至少禁食10小时以上。试验期间禁止饮茶、吸烟或进食。

3 糖化血红蛋白A1c （HBA1c）

正常参考值：3.8―6.5%

临床意义：糖化血红蛋白参考值单位（%）是指占总血红蛋白的百分率。GHb是代表HBA1a、b、c之总和，而HBA1c约占70%结构稳定，故HBA1c可作为糖尿病控制的监测指标。糖化血红蛋白的浓度，反映测定前1―2个月平均血糖水平。尤其是Ⅰ型糖尿病，每月测定1―2次，以便更好的了解病情控制的程度。

空腹血糖（FPG），餐后2h血糖（2hBG）为及时监测血糖指标，易受饮食，药物，情绪等诸多因素影响，缺点是有时不能客观反映人体血糖真实水平，经常不稳定。

糖化血红蛋白（HbA1c）是血红蛋白Hb与葡萄糖之间经过缓慢的，不可逆的，非酶促反应而结合形成的产物，其浓度与红细胞寿命（平均120天）和该时期内血糖平均浓度有关，不受每天血糖波动的影响，可反映患者抽血前2-3个月的平均血糖水平，但Hb半衰期长，糖化血红蛋白（HbA1c）不能及时地反映患者近期的控制情况，故糖化血红蛋白（HbA1c）不是诊断DM的敏感指标。由于果糖胺水平不受血红蛋白异常代谢的影响，因此，也曾用于评价血糖控制水平。果糖胺水平与血清中已转化为酮胺类的糖化蛋白质的水平有关。果糖胺的检测通常采用还原显色反应，即果糖胺在碱性溶液中具有还原性，能够还原硝基四氮唑蓝而产生色彩变化。果糖胺水平不受贫血或血红蛋白变异的影响。而且，在血液蛋白质中所占比例最大的清蛋白具有比血红蛋白更快的代谢速度。因此，较HbA1c而言，果糖胺水平收血液蛋白质和相对分子质量较小的其他物质的水平影响较大（如胆红素、尿酸等）。

由于糖化血红蛋白在血液中半衰期较长，对于因并发红血病，贫血，妊娠糖尿病或慢性失血等疾病而导致红细胞更新率增加的糖尿病患者，和处于治疗方案调整期的患者或糖尿病初发患者，HbA1c不能准确反映近期的BG控制情况或及时反映短期内BG水平的变化，在区别轻度血糖偏高和血糖正常人群的测定中有时也不够敏感。而糖化血清白蛋白（GA）可反映2周和1个月内的总体血糖平均水平，在上述情况下可能更优于HbA1c的测定。

GA糖化血清白蛋白是血清白蛋白与葡萄糖的结合产物，因白蛋白在体内的半衰期较短（17-20天），故糖化血清白蛋白对短期内血糖变化敏感，能反映患者近二到三周内的平均血糖水平。本研究旨在通过对患者糖化血清白蛋白与各项常用血糖监测指标的相关性分析初步评价糖化血清白蛋白在糖尿病人群中的临床应用意义。

1对象与方法

1.1对象

269例于2013年1月-12月莱芜市人民医院门诊及住院的二型糖尿病患者，其中145例男性，124例女性，平均年龄（56+-11岁）；均符合1999年世界卫生组织（WHO）DM诊断标准，纳入DM组。正常对照者为在我院查体血糖正常者126名，平均年龄（37+-8.6）岁，肝肾功能无异常，空腹血糖（FPG

1.2仪器与试剂

采用日立7600-110全自动生化分析仪，BG试剂（己糖激酶法）由广州科方试剂公司提供，GA液态酶法试剂由日本旭化成公司提供。

1.3检测原理

1.3.1先用糖化氨基酸氧化酶消除样品中存在的内因性糖化氨基酸，再利用特性蛋白酶将GA水解为糖化氨基酸，氨基酮氧化酶作用于产生的糖化氨基酸，生成葡萄糖醛酮、氨基酸和过氧化氢，生成的过氧化氢在氧化物酶的作用下，与定量的色素和4-氨基安替比林生成蓝紫素，测定该色素的吸光度值，计算GA浓度。

1.3.2用前处理液修饰血清蛋白的SH基，然后与溴甲酚紫（BCP）作用生成蓝紫色结合体，测定其吸光度值，计算清蛋白浓度。

1.3.3按下列公式计算GA值

GA值=GA浓度/清蛋白浓度/1.14*100+2.9 [2]

1.3.4采用己糖激酶测定FPG，2hBG，采用乳胶凝集抑制法监测HbA1c。

1.4方法

参照试剂盒提供的操作步骤，分别在全自动化生化分析仪上设置相应的检测程序，由仪器自动完成检测。每次测定同时用质控品予以监测。分别选择GA高值血清和低值血清评估酶法试剂精密度、线性等试剂性能。

1.5统计学处理

采用SPSS11.5软件进行统计学分析，采用方差分析、相关分析和线性回归等统计方法。

2 结果

2.1 精密度检测 按照美国临床实验标准委员会（NCCLS）EPS-T评价要求，分别选择GA含量为8.5%，14.6%，29.5%血清3份，一份连续测定20次，另2份平行测定，每日分上下午各测一次，连续20天，将测定结果记录备案。结果CV值批内分别为：1.29%，1.33%，1.02%，平均1.21%；批间CV分别为：3.28% ，3.15%，2.69%，平均3.04%。

2.2 线性测定 按照NCCL-S EPS-P的评价方案，选择29.5%和8.5的高低混合血清各2份，然后把其中一份等量混合产生中间值19.0%；中间值再与高低值等量混合，产生24.3%、13.8%等5各不同梯度值，在仪器上以低值到高值和高值到低值分别测定，计算再次算术平均值，以X作为理论值，Y作为测定值进行回归分析，其回归方程为Y=0.981 0X+0.118 0，r=0.998 7。

2.3回收试验 把GA含量为14.6%的血清，分成3份，分别加入含量为8.5%、14.9%、29.5%的血清，用本方法双份平行测定，计算回收率分别为101.8%，98.5%、103.1%，平均为101.1%。

2.4 干扰试验 取1份血清（GA含量为14.6%）分成5份，分别加入三酰甘油（TG），Hb，胆红素（TBH），尿酸（UA），抗坏血酸，其终浓度分别为TG8.8mmol/l，Hb195g/l，TBIL 560umol/l，UA2995umol/l，抗坏血酸498umol/l，用本方法测定，结果各干扰物在上述浓度下对GA测定均无影响。

2.5 参考范围 检查126例健康对照者血清GA水平，计算获得GA参考范围为（14.19+-2.13）%。

2.6 健康对照组、临界者组和DM组HbA1c、GA、FPG、2hBG检测结果方差分析，健康对照者组与临界者组、DM组间GA差异有统计学意义（P

3 讨论

糖尿病DM诊断及病情的监测主要依靠血糖BG浓度的测定。大量研究表明，长期监测，有效控制BG水平有助于减少DM相关并发症的发生。目前国内应用于临床的BG监测指标包括随机血糖 （GLU），口服葡萄糖耐量试验 （OGTT）空腹血糖（FPG），餐后2h血糖（2hBG），糖化血红蛋白（HbA1c）及近几年发展起来的糖化血清白蛋白（GA）

空腹血糖（FPG），餐后2h血糖（2hBG），口服葡萄糖耐量试验 （OGTT）为及时监测血糖指标，易受饮食，药物，情绪等诸多因素影响，缺点是有时不能客观反映人体血糖真实水平，经常不稳定，并不能作为评价疾病控制程度的指标。

糖化血红蛋白（HbA1c）是血红蛋白Hb与葡萄糖之间经过缓慢的，不可逆的，非酶促反应而结合形成的产物，其浓度与红细胞寿命（平均120天）和该时期内血糖平均浓度有关，不受每天血糖波动的影响，可反映患者抽血前2-3个月的平均血糖水平，但Hb半衰期长，糖化血红蛋白（HbA1c）不能及时地反映患者近期的控制情况，故糖化血红蛋白（HbA1c）不是诊断DM的敏感指标。由于果糖胺水平不受血红蛋白异常代谢的影响，因此，也曾用于评价血糖控制水平。果糖胺水平与血清中已转化为酮胺类的糖化蛋白质的水平有关。果糖胺的检测通常采用还原显色反应，即果糖胺在碱性溶液中具有还原性，能够还原硝基四氮唑蓝而产生色彩变化。果糖胺水平不受贫血或血红蛋白变异的影响。而且，在血液蛋白质中所占比例最大的清蛋白具有比血红蛋白更快的代谢速度。因此，较HbA1c而言，果糖胺水平收血液蛋白质和相对分子质量较小的其他物质的水平影响较大（如胆红素、尿酸等）。由于糖化血红蛋白在血液中半衰期较长，对于因并发红血病，贫血，妊娠糖尿病或慢性失血等疾病而导致红细胞更新率增加的糖尿病患者，和处于治疗方案调整期的患者或糖尿病初发患者，HbA1c不能准确反映近期的BG控制情况或及时反映短期内BG水平的变化，在区别轻度血糖偏高和血糖正常人群的测定中有时也不够敏感。

GA作为DM患者近期BG控制指标，在临床上可作为BG及代谢情况的监测手段，对早期发现DM，指导DM治疗有较大意义。GA糖化血清白蛋白是血清白蛋白与葡萄糖的结合产物，因白蛋白在体内的半衰期较短（17-20天），故糖化血清白蛋白对短期内血糖变化敏感，能反映患者近二到三周内的平均血糖水平。[3]

糖化白蛋白含量与白蛋白和葡萄糖接触的量及时间成正比，主要反映患者过去2～3周的平均血糖水平，用于监测糖尿病治疗的近期效果。GA作为反映血糖控制情况的一项新指标，主要有以下特点：

3.1可反映血糖控制的近期变化

白蛋白半衰期短，仅17～20d，一旦血糖控制状态出现急剧变化，GA可以根据其变化迅速变动。若将GA值作为血糖控制效果的监测指标，在采用饮食或运动疗法控制血糖1～2个月后就能判断是否需要用药。

3.2不受贫血的影响

糖化血红蛋白（HbA1c）是目前监测血糖控制状态的“金标准”，但其容易受到贫血的影响。溶血性贫血、伴有慢性肾衰的贫血、肝硬化伴脾功能亢进等引起红细胞寿命缩短的疾病，HbA1c偏低；而当发生缺铁性贫血时，HbA1c偏高。因此，贫血的糖尿病患者难以通过HbA1c来判断血糖控制状态，此时需要使用GA进行监测。

3.3不受变异血红蛋白的影响 若体内出现变异血红蛋白，会表现出易受糖化或难被糖化两种情况，此时利用检测HbA1c来判断血糖控制情况就会有误判的危险。GA则不会受到变异血红蛋白的影响。因此，有必要根据GA来判定血糖控制状态。

3.4受白蛋白代谢的影响

在肾病综合征、甲状腺功能亢进等引起白蛋白代谢亢进的患者，由于白蛋白与葡萄糖接触的时间缩短，导致GA偏低。有研究表明，肥胖患者因脂肪细胞因子分泌亢进，可能引起白蛋白的异化亢进，也会引起GA偏低。而在白蛋白代谢低下的肝硬化、甲状腺功能减退患者，则会出现GA偏高。综上所述，GA是反映过去2-3周平均血糖水平的新指标，比HbA1c的反映周期更短。因此，在治疗效果的确认及临床用药的调整方面，使用GA比HbA1c更有优势。同时，GA不受血红蛋白代谢的影响，在许多血红蛋白代谢异常的情况下检测GA值更能反映血糖真实水平。

本研究显示，LucicaGA-L试剂盒测定血清GA水平，不仅有良好的精密度（批内CV

参考文献

[1] 李青，吴松华，潘洁敏等 酶法测定糖化血清白蛋白的初步评价 上海交通大学学报（医学版）2007，07（03），785-787

[2] 吴杰红，张志伦，周良琼等 糖化清蛋白酶法快速检测及其临床意义评价 国际检验医学杂志 2011，10（17），1920-1922

[3] 顾燕云，邢慧莉，盛正妍等 酶法测定糖化血清白蛋白的多中心临床研究 上海医学2006，29（7），432-434