观察糖尿病患者与正常人之间以及不同骨量的糖尿病患者之间维生素D受体基因型的分布差异

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摘要：目的 深入探讨正常人与糖尿病患者以及不同骨量糖尿病患者之间维生素D受体基因型的分布差异。方法 选取我院2012年11月～2014年10月收治的60例糖尿病患者为研究对象，其中1型糖尿病患者23例，2型糖尿病患者37例；骨量减少16例，骨质疏松20例；另选取同一时间段到我院进行常规体检的60例健康受检者为研究对照，采用聚合酶连反应限制性片段长度多态性技术对其进行维生素D受体，基因型检测。结果 Tt基因型分布频率比较，1型糖尿病患者升高趋势更为明显（P

关键词：骨质疏松；基因；受体

结合临床研究资料来看，在所有糖尿病并发症中，骨质疏松是发生率和影响均比较高的一种，故，我院将以实例研究的方式为切入点，深入探讨正常人与糖尿病患者之间维生素D受体基因型的分布差异，以为筛选糖尿病骨质疏松高危人群提供更为有力的科学依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2012年11月～2014年10月收治的60例糖尿病患者为研究对象，其中男性患者33例，女性患者27例，患者平均年龄（47.3±8.1）岁；其中1型糖尿病患者23例，2型糖尿病患者37例；骨量减少16例，骨质疏松20例；另选取同一时间段内到我院进行常规体检的受检者为研究对照，男性36例，女性24例，平均年龄（46.3±7.7）岁，所有受检者均对本次研究知情并签署同意书。

1.2方法 维生素D受体基因型检测：①引物的设计、合成：下游引物5，-GCA ACT CCT CAT GGT GAG GTC TC-3，；上游引物5，-CAG AGC GAG AGG GAC ATG GAA-3，，本次研究所采用的引物均源自上海百盛医疗公司生产；②全血DNA抽取：采用Promega公司生产的全血DNA抽提试剂盒，20g/L EDTA抗凝全血300μL，抽提基因组DNA，然后将其溶于60μTE中，并将其置于-20℃的环境中进行保存；③扩增产物的限制性内切酶酶切：聚合酶链反应扩增产物5μL，采用2.5U TaqI酶切，然后使用65℃（TaqI）水浴保温2h。反应完全终止完成后，产物经20g/L（TaqI）琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色，并借助凝胶图像分析系统对基因型进行分析；（4）聚合酶链反应，首先选取基因组DNA200mg，并在上游及下游引物中各取20pmol，Tris-HCI 10mmol/L，KCL50mmol/L，Taq DNA Polymerase 1.5U，dNTP200μmo

l/L，MgCl22.5mmol/L，反应总体系为50μL，循环条件为：72℃延伸1.5min，58℃退火1min，94℃变形1min，31个循环。然后选取5μL经10g/L琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色，最后借助紫外灯观察扩增是否成功[1]。

1.3观察指标 ①1、2型糖尿病患者于健康受检人群维生素D受体基因型分布频率；②维生素D受体基因多态性与糖尿病性骨质疏松的相关性分析。

1.4统计学处理 运用SPSS.17.0统计软件加以分析，使用（x±s）表示本实验的计量资料，并应用配对t检验，差异有统计学意义P

2 结果

2.1 1、2型糖尿病患者于健康受检者维生素D受体基因型分布频率对比 经过资料整合，ApaI：23例1型糖尿病患者中，aa型共计12例（52.17%），Aa型8例（34.78%），AA型2例（8.70%）；37例2型糖尿病患者中，aa型共计19例（51.35%），Aa型12例（32.43%），AA型3例（8.11%）；60例健康受检者中，aa型共计30例（50.00%），Aa型24例（40.00%），AA型共计6例（10.00%）；TaqI：1型糖尿病患者TT、Tt、tt型分别为19例（82.61%），4例（17.39%），0例；2型糖尿病患者TT、Tt、tt型分别为35例（94.59%）、3例（8.11%），0例；健康受检者TT、Tt、tt型分别为59例（98.33%），2例（3.33%），1例（1.67%）。从数据分析来看，虽然三组之间维生素D受体基因型分布无显著统计学差异（P>0.05），但是Tt基因型分布频率比较，1型糖尿病患者明显高于2型糖尿病患者及健康受检者（P

2.2维生素D受体基因多态性与糖尿病性骨质疏松相关性研究 研究中24例糖尿病骨量正常患者以及骨质疏松20例、骨量减少16例患者比较：ApaI分布比较，骨量减少和骨质疏松患者于骨量正常患者比较，差异有显著统计学意义（P0.05）。

3 讨论

结合已有的临床研究资料来看，关于骨质疏松和维生素D受体基因多态之间的联系，资料有比较大的差异，例如国外有学者指出，维生素D受体基因多态与骨密度之间存在着直接的联系，其对骨密度的影响可占遗传因素的70%～80%左右[2]；而从国内的研究资料来看，在对绝经妇女的一般资料进行调查后发现，tt、BB、AA基因型的分布频率相对较高。结合本次研究的数据分析来看，在选取的60例糖尿病患者中，骨质疏松和骨量减少患者aa基因型频率与骨量正常的糖尿病患者相比较，明显更高（P

参考文献：

[1]关美萍，薛耀明，张倩，等.雌激素受体基因多态性与2型糖尿病患者骨密度之间的关系研究[J].中国临床康复，2013，7（15）：2140-2141.

[2]陶国枢，吴青，张红红，等.维生素D受体基因多态性与骨质疏松的初步研究[J].军医进修学院学报，2012，19（01）：129-130.