核桃胚培养条件研究
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【摘 要】以香玲核桃胚为试材，研究了不同基本培养基、蔗糖和琼脂浓度对离体胚萌发、生根和成苗的影响，筛选最佳培养条件。结果表明：最适宜的基本培养基为MS+3%蔗糖+（0.6～0.8）%，种胚培养4周后即可成苗，选生长健壮的生根苗（不需要炼苗）移栽到经高压灭菌的蛭石中，成活率可达91%以上。
【关键词】核桃；离体培养；萌发；生根
1.目的、材料与方法
核桃（Juglans regia L.）属胡桃科（Juglandaceae）胡桃属，是世界四大干果之一，以其很高的经济、生态及社会效益在世界各地广泛栽培[1，2]。在核桃种胚离体培养方面，前人有刘淑兰[3]对果实不同发育时期的胚培养研究，结果表明，在受精前两个月的幼果胚培养效果最好。袁巧平[4]等探索了幼胚的培养基、光照和时间等培养条件。郭洪英[5]等以成熟种胚上胚轴以上部分作外植体材料进行组织培养，获得了完整幼苗。本文旨在通过以香玲成熟种胚为外植体，找出最适宜其生长发育的培养条件，为今后核桃种胚组织培养提供理论依据。
材料与方法：
1.1材料
河北临城绿岭公司基地 香玲核桃成熟果。
1.2方法
果实采收后，用洗洁净清洗核桃并用自来水冲洗干净，用单面刀片去掉核桃青皮后移至超净工作台，用75%的酒精消毒5min，最后用无菌水冲洗2次，用单面刀片去掉核桃硬壳和子叶剥取胚，胚用镊子剥下来：a：将胚分别接种在MS、B5、DKW、WPM基本培养基上。B：以MS为基本培养基，设置蔗糖浓度分别为1%、2%、3%、5%、7%五个梯度；以MS为基本培养基，设置琼脂浓度分别为0、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.5%六个梯度。
每瓶接种3个，每处理为3瓶，3次重复。培养温度（25±1）℃，光照时间为16h/d，自然光。若无特别说明，pH6.0；3%蔗糖，0.6%琼脂。暗培养1周，后转入光照培养。每天观察胚的动态变化，4周后统计萌发率。
2.结果与分析
2.1基本培养基对核桃离体胚培养的影响
本试验选用了4种不同的基本培养基MS、B5、WPM、DKW、MS，从表1可以看出，DKW和WPM基本培养基的萌发率显著低于B5、MS、WPM培养基；B5和MS基本培养基之间萌发率无差异，生长势和萌发率均明显优于WPM、DKW基本培养基；而 B5基本培养基培养的幼苗生长稍慢于MS基本培养基，说明核桃胚萌发过程中对钾盐需求量较高，硝酸盐虽对萌发率无影响，但影响胚的生长。综合考虑，以MS做基本培养基为宜。（备注说明：基本培养基MS、B5、WPM、DKW、MS和B5均含有钾（KNO3）和硝酸根（KNO3和NH4NO3），但B5的硝酸盐含量较低，而WPM、DKW含有钾盐（K2SO4）和硝酸盐【Ca（NO3）2和NH4NO3】，与MS和B5基本培养基相比，钾盐和硝酸盐的含量稍低。）
2.2蔗糖浓度对核桃胚离体培养的影响
在MS基本培养基的基础上，添加不同浓度的蔗糖。结果表明：蔗糖浓度为1%、2%、3%、5%、7%的萌发效果均好，萌发率分别为81.2%、84.6%、89.8%、86.6、62.3。但在后期胚的生长发育中，蔗糖3%处理的幼苗生长势较强。幼苗生长势由强到弱依次为3%>5%>2%>1%>7%。由此看出， 3%蔗糖是适宜核桃胚萌发的最佳浓度。培养基中不含蔗糖时仅少数胚能萌发；当蔗糖浓度过高（7%），萌发率下降不明显，但生长势很弱，这可能是较高的蔗糖浓度引起培养基渗透压的改变，导致后期幼苗的生长受到抑制。
2.3琼脂浓度对核桃杂交胚离体培养的影响
在MS培养基的基础上，添加不同浓度的琼脂。结果表明：含琼脂0、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.5% 的萌发率分别为0、80%（少数褐死）、100%、84%、67%（细菌感染，试验失败）、100%，可以得知，核桃种胚不适于液体培养基培养。在后期生长过程中，含琼脂1.5%处理生长势最弱，说明琼脂浓度增大对核桃胚的生长不利，其原因是琼脂浓度增大，固体培养基的结实度增大，营养元素被局限于一定的空间范围内，流动性差，不足以给胚的生长提供营养；而0.4%、0.6%、0.8%和1.0%四个处理幼苗长势良好，胚根伸长约5.5cm，苗高4cm，叶片5～11片。综合观察，含0.6%～0.8%琼脂是核桃胚生长发育最好的浓度。
3.生根和移栽
培养4周后，选择苗高3cm、生长健壮的生根苗移栽到经高压灭菌的蛭石中，1周后长势良好，移栽后的幼苗成活率达91%。
4.结论
通过试验可以看出，香玲核桃成熟种胚最适宜的基本培养基为MS基本培养基，最佳蔗糖浓度为3%蔗糖，琼脂浓度为在0.6～0.8%比较合适；种胚培养4周后即可成苗，并且成活率高。
【参考文献】
[1]郗荣庭，张毅萍.中国核桃[M].北京：中国林业出版社，1992.
[2]郗荣庭，张毅萍.中国果树志（核桃卷）[M].北京：中国林业出版社，1996.
[3]刘淑兰，韩碧文.核桃离体胚的植株再生[J].植物生理与分子生物学学报，1989，15（1）：98-100.
[4]袁巧平，董茂山.离体培养条件下核桃器官发生和体细胞胚胎发生[J].林业科学，1990，26（6）：495-498.
[5]郭洪英，王永清，李玉堂.核桃离体胚的培养[J].四川林业科技，1999，20（1）：53-56.