纤维蛋白原Bβ148 C/T基因多态性

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇纤维蛋白原Bβ148 C/T基因多态性范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

作者：张焕铃，刘瑛，王俊霞，刘健敏，尤红煜，刘福英,李秀娟 【关键词】 脑血管病

Gene polymorphism of fibrinogen Bβ148（CT）

【Abstract】 AIM: To analyze the frequency of Fg Bβ148（CT）polymorphism in 77 patients with cerebrovascular disease. METHODS: Gene polymorphism of Fg Bβ148（CT） was analyzed by PCR and restriction fragment length polymorphism (RFLP). RESULTS: The overall allele frequency of Fg Bβ T148 (C148) was 0.636 (0.364). CONCLUSION: The T/T genotype of Fg Bβ148（CT）gene is related with carotid atherosclerosis and the level of Fg.

【Keywords】 fibrinogen Bβ148；gene polymorphism； cerebrovascular disease

【摘要】 目的：对河北省脑血管患者纤维蛋白原(Fg)Bβ148C/T基因多态性进行初步研究. 方法：用聚合酶链式反应（PCR），限制性片段长度多态性（RFLP）方法研究河北省77例脑血管病患者Fg Bβ148C/T基因多态性. 结果：77例脑血管病患者Fg Bβ148基因频率C=0.364,T=0.636. 结论：Fg Bβ148C/T突变基因T与Fg水平、严重的颈动脉粥样硬化明显相关.

【关键词】 纤维蛋白原Bβ148；基因多态性；脑血管病

0引言

杨志刚等［1］发现携带突变基因T148，A448和A445的血浆纤维蛋白原（fibrinogen， Fg）水平较野生型显著升高. 我们对河北省脑血管病患者77例的血浆Fg水平进行了分析，并研究其血浆Fg Bβ148C/T基因多态性与颈动脉粥样硬化的关系如下.

1材料和方法

1.1材料

血浆Fg Clauss测定法试剂盒购自上海医科大学华山医院技协生物试剂公司上海鹰跃试剂厂；引物：上游引物5′CCTAACTTCCCATCATTTTGTC3′， 下游引物5′ATGGTTTTAAGTTTGTGGAAGC3′由北京博润汇力基因技术有限公司(合成)；PCR扩增试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司；UNIQ10 柱式DNA胶回收试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司；100 bp DNA ladder购自华美生物工程公司； HindⅢ为Promega产品.

1.2方法

住院脑血管病患者77(男67,女10)例,其中短暂脑缺血发作（TIA）9例，椎基底动脉供血不足8例，脑梗死51例，脑出血9例. 取早晨空腹肘静脉血分别用38 g/L枸橼酸钠及20 g/L二胺四乙酸(EDTA)抗凝. 枸橼酸钠试管取2.7 mL血，用Clauss测定试剂盒检测Fg浓度. 另取晨空腹肘静脉血4 mL置20 g/L EDTA抗凝管(每管2 mL),立即颠倒摇匀,于4℃静置,血浆置-70℃冻存,采用改良盐析法提取基因组DNA. PCR扩增体系为：10×PCR buffer 2.5 μL，25 mmol/L MgCI2 2 μL，2 mmol/L dNTP 1 μL，10 pmol/μL引物各1 μL，模板DNA 1 μL，1 MU/L Taq DNA聚合酶1 μL，加灭菌双蒸水至溶液体积为25μL，混匀后以石蜡油50 μL覆盖. PCR热循环条件为: 94℃预变性2 min，然后94℃ 45 s，58℃ 45 s，72℃ 45 s 35个循环，72℃延伸5 min，4℃浸泡. 20 g/L琼脂糖凝胶电泳, 1×TAE缓冲液中电泳 35 min后,紫外检测仪观察. 切取300 bp左右条带，采用UNIQ10柱式DNA胶回收试剂盒,回收DNA, -20℃保存备用. 取回收DNA 10 μL，加入BSA 0.2 μL，10×Buffer 2 μL，10 MU/L HindⅢ酶1 μL，双蒸水6.8 mL,37℃孵育3 h，30 g/L琼脂糖凝胶电泳30 min后,紫外检测仪分析电泳结果. Fg Bβ148位点突变纯合子(T/T基因型)缺乏HindⅢ酶切位点,酶切后仅见与PCR扩增产物一样的300 bp片段,野生型(C/C基因型)酶切后可见202 bp和98 bp两个片段,突变杂合子(C/T基因型)酶切后可见300，202及98 bp三个片段. 用基因计数法计算等位基因频率.

统计学处理：各组血浆Fg用x±s表示，两组间差别统计采用t检验，多组差别比较，用方差分析和SNKq检验.

2结果

PCR扩增产物电泳后可见77个样品都在300 bp左右有一清晰条带(Fig 1). 回收PCR扩增产物，用内切酶HindⅢ酶切结果见Fig 2. 脑血管患者77例血浆Fg Bβ148基因频率C=0.364,T=0.636(Tab 1).表1脑血管病患者Fg Bβ148多态性频率与血浆Fg水平（略）

3讨论

血浆Fg的升高可作为心脑血管疾病的危险因素［2,3］. Fg Bβ基因多态性单独或与环境因素作用使循环中的Fg水平升高，造成或加速了动脉粥样硬化. T/T基因型与严重的颈动脉粥样硬化密切相关，纯合子T/T基因型增加颈动脉粥样硬化的风险OR=6.17，远远超过了C/C或C/T型，推测为一种短暂的不依赖Fg水平的Fg启动基因，重复着固有的、非固有的刺激，在颈动脉粥样硬化病因学上起一定作用. 吕波等［4］对冠心病和急性脑梗死患者Fg Bβ148C/T基因进行研究发现患者此基因变异频率显著高于对照组，且变异组(C/T及T/T)血浆Fg水平显著高于非变异组(C/C). 我们的结果显示,脑血管病患者Fg Bβ148C/T基因频率C=0.364,T=0.636，广东汉族健康人Fgβ148C/T的基因多态性与欧洲的结果［5］存在一定差异，所以这里也不能排除河北省与广东省人群之间的地区差别. A，B，E都属于C/T基因型，但A中300 bp和202 bp片断亮度相似，而B和E中却存在着差别(Fig 2)，其中B：300 bp条带较亮，E：202 bp条带较亮，可能是由于此患者本身基因组DNA中就存在两种基因型或者由于某种外在原因导致患者本身的基因型发生突变，而实验中所提取到的DNA恰是处于突变中期的，因此会存在两种基因型，酶切就会出现三条片断的亮度不均衡现象，此现象仍需进一步研究.

【参考文献】

［1］ 杨志刚,李风芹,刘国勋,等. 纤维蛋白原β455G/A， 148C/T， 448G/A基因多态性与血浆纤维蛋白原水平的关系［J］. 中华血液学杂志, 2000;9(21):463-465.

Yang ZG, Li FQ, Liu GX, et al. The study of betafibrinogen gene455 G/A, 148 C/T, 448 G/A polymorphisms and their association with plasma fibrinogen levels ［J］. Chin J Hematol, 2000;9(21):463-465.

［2］ 彭道荣,于文彬,王俊平，等.脑梗死和冠心病患者血清同型半胱氨酸改变［J］.第四军医大学学报,2003;24(23):2157-2158.

Peng DR,Yu WB,Wang JP, et al. Alerations of serum homocysteine level since rebralin farcrion and coronary heart disease ［J］. J Fourth Mil Med Univ,2003;24(23):2157-2158.

［3］ 曹义战,王津存,王伯良，等.降纤酶治疗急性脑梗死的对照研究［J］.第四军医大学学报,2002;23(17):1608-1610.

Cao YZ,Wang JC,Wang BL,et al. A matched control research of defibrasein treating acute cerebralin farction ［J］. J Fourth Mil Med Univ,2002;23(17):1608-1610.

［4］ 吕波,赵斌,邢永前，等.脑梗死患者纤维蛋白原β148C/T基因多态性的研究［J］.临床神经病学杂志, 2003;16(4):202-204.

Lü B, Zhao B, Xing YQ,et al.The study on the polymorphism of beta fibrinogen gene 148 C/T in the patients with cerebral infarction ［J］. J Clin Neurol, 2003;16(4):202-204.

［5］ van Goor MP, GomezGarcia EB, Leebeek FW, et al.The -148 C/T fibrinogen gene polymorphism and fibrinogen levels in ischaemic stroke: A casecontrol study ［J］.J Neurol Neurosurg Psychiatry, 2005;76(1):121-123.