马铃薯试管保存品种资源的复壮

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摘 要：就马铃薯LB系列品种资源的复壮讨论了2个问题：（1）LB系列中主要存在的问题以及这些问题产生的原因；（2）针对这些问题所采取的措施以及复壮的结果。结果表明，该系列经复壮后品质得到了一定的恢复，效果显著。

关键词：马铃薯；试管苗；复壮；MS培养基

近10多年来，随着马铃薯新品种及无病毒种薯生产技术的推广应用，云南省马铃薯种植面积从20世纪80年代末的20万hm2，迅速增长到了2010年的65.89万hm2[1]；平均单产也从当时的11.25t/hm2增加至14.3t/hm2[2]。脱毒试管苗快繁技术在近几年的生产实际中已经得到了普遍的应用。但是，在马铃薯试管苗的快速繁殖及品种资源的保存中，仍然存在一些典型的问题急待解决，其中比较重要的问题之一就是试管苗的复壮问题。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试的马铃薯品种资源为云南师范大学薯类作物研究所长期试管保存的LB系列品种资源，共30个品种。

1.2 试验方法

试验采用试管内继代、结合相应处理及培养程序改变的方法。使用的培养基包括：MS[2]固体培养基、MS+抗生素固体培养基、MS+生长素+细胞分裂素固体培养基、MS+生长素+细胞分裂素+抗生素固体培养基。上述培养基中蔗糖浓度为25g/L、琼脂7.0g/L、pH值调至5.8，采用常规高温高压灭菌。接种外植体采用一个叶片的单节茎段。接种时将茎段插在培养基上，腋芽朝上。培养条件为28℃、60%～80%相对湿度、2000lx光强，12h/d的光照时间[3]。

2 结果与分析

马铃薯LB系列30个品种经过长时间的保存，由于保存条件和保存期间频繁继代操作等原因；上述品种资源或多或少都存在退化问题。这些问题主要表现为细菌、真菌引起的污染（LB-5；LB-27；LB-32；LB-35；LB-37；LB-40；LB-46）、黄化（LB-3；LB-4；LB-5；LB-16；LB-26；LB-29；LB-31；LB-37）、植株矮化（LB-3；LB-11；LB-22；LB-26；LB-35；LB-37）、气生根（LB-2；LB-5；LB-6；LB-12；LB-15；LB-16；LB-18；LB-19；LB-21；LB-22；LB-23；LB-24；LB-25）、不生根（LB-12；LB-18；LB-21；LB-27；LB-33；LB-35；LB-37；LB-44）、植株瘦弱（LB-15；LB-33）、植株枯死和茎尖或顶侧芽坏死（LB-2；LB-19；LB-21）。

分析LB系列存在的各种问题，除了污染是由于人为造成的外，其余问题在不同程度上都是由于培养条件不佳和营养物质缺乏而引起的。根据不同组培苗存在的问题，实验采取了不同的措施进行复壮，试验结果见表1。

在短时间内，经过3代的复壮处理后，30个LB系列品种中，复壮后生长良好的有21个品种，占总体的70%；生长仍然较差的有2个品种，占总体的6.7%；其余品种的生长状况已经有了明显的改善。

3 讨论

针对试管苗退化问题，一般的解决方法有3种：①重新取材和建立新的无菌培养系；②利用茎尖分生组织培养方法重新获得复壮的培养材料；③根据导致退化原因的分析，在继代过程中直接解决退化问题。

从试验结果分析：气生根的产生主要是由于保存时间过长以及生长过密导致培养瓶内O2不足，CO2含量过多。植株为了吸收O2，所以产生气生根以增加吸收面积。解决方法主要是控制转接密度，适时进行转接。植株矮化以及茎叶黄化主要是由于营养物质不足和光照不足造成的，解决方法为更换培养基，增加光照。植株不生根主要是因为生长素和细胞分裂素不足所导致的结果，在MS培养基中加入适量的生长素和细胞分裂素就能得到很好的控制。细菌和真菌的污染主要是接种时的器具或材料的污染造成的。

目前，对于试管苗退化和复壮的研究仍处于探讨之中，许多问题尚待解决。

（收稿：2014-05-06）

参考文献：

[1]龙蔚，金，张德亮等.云南省马铃薯与市场行情分析[J].云南农业大学学报，2013（7）：15-17

[2]杨万林，李云海，李先平.脱毒马铃薯丰产栽培技术的应用研究[J].云南农业科技，2009（3）：20-21

[3]董淑英，李梅，孙静等.马铃薯试管苗低成本快繁方式研究[J].中国马铃薯，2002，16（1）：7-10

作者简介：张玲艳（1979-）女，硕士研究生，讲师，主要从事植物逆境生物学研究和植物组织培养教学工作。