复方夏枯草胶囊质量标准
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【摘要】建立复方夏枯草胶囊的质量标准。方法用薄层色谱法鉴定黄芩、钩藤等；用HPLC法对夏枯草中熊果酸进行含量测定。结果薄层图谱斑点清晰，阴性对照无干扰。夏枯草中熊果酸在0.473～3.5μg（r=0.9992）范围内，对照品浓度与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为98.79％，RSD1.27％。结论该质量控制方法简便可行，精密度高，重现性好，可用于复方夏枯草胶囊质量控制。
【关键词】复方夏枯草胶囊质量标准TLCHPLC
【Abstract】ObjectiveToestablishthequalitystandardforFufangXiakucaoCapsule.MethodsQualitativeanalysisofBaicalin,UncariarhynchophyllaJackswereidentifiedbyTLCandthecontentsofUrsolicacidinPrunellavulgarisL.wasdeterminedbyHPLC．ResultsThespotsintheTLCwereclearandidentifiedwithouttheinterferenceofnegativecontrol.ThelinearrangeofUrsolicacidwas0.473～3.5μg（r=0.9992）．Theaveragerecoveryratewas98.79％wihRSD1.27％．ConclusionThemethodsaresimple，feasible，accurate,withgoodreproducibilityandcanbeusedforthequalitycontrolofFufangXiakucaoCapsule．
【Keywords】FufangXiakucaoCapsule;qualitystandard;TLC;HPLC
复方夏枯草胶囊是在临床验方基础上研制的治疗高血压病的中药复方制剂，由夏枯草、黄芩、钩藤等药味配伍而成，组方中夏枯草、黄芩均为重要组成，夏枯草中含有熊果酸成分，具有镇静、抗菌、抗炎等作用；黄芩主要功用为抗炎、降压、镇静，主要有效成分以黄酮类化合物黄芩苷为主。因此，制订复方夏枯草胶囊中黄芩等的定性标准及熊果酸的定量标准，对确保该产品的临床疗效有重要的意义。为有效控制本品质量，采用TLC鉴别黄芩、钩藤；用HPLC法测定熊果酸的含量，保证测定的专属性和结果的准确性。
1仪器与试药
采用Waters高效液相色谱系统；CAMAG（瑞典）薄层色谱扫描仪；Waters2487双波长紫外检测器。
复方夏枯草胶囊为青岛国风药业股份有限公司提供，阴性对照样品为自制。熊果酸标准品（批号：0742-9706）；黄芩苷标准品（批号120955-200406）；钩藤对照药材（121190-200402），均由中国药品生物制品检定所提供。硅胶G（青岛海洋化工厂）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。
2方法与结果
2.1钩藤的鉴别［3］取本品内容物2g，加入浓氨试液10ml使溶解，用三氯甲烷60ml加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加3%盐酸溶液20ml使溶解，用浓氨试液调pH至碱性，再用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制除钩藤外的阴性对照液。另取钩藤对照药材2g，同法制成对照药材溶液。吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸丁酯-氨水（18：3：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图1。
图1钩藤色谱图
注：1,3.样品2.钩藤对照药材4.阴性对照
2.2黄芩的鉴别取本品内容物2g，加无水乙醇回流提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加1%硫酸溶液10ml使溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备除黄芩外的阴性对照液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-正丁醇-甲酸-水（15：3：1：2）为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，再喷以2%三氯化铁乙醇溶液显色，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照液无相同斑点。见图2。
图2黄芩苷色谱图
注：1，3.样品液2.黄芩苷对照品4.阴性液
2.3熊果酸含量测定［2］
2.3.1色谱条件色谱柱：chromasilC18（规格4．6mm×200mm,5μm）；流动相：甲醇-水（85：15），检测波长210nm，进样量20μl。理论塔板数按熊果酸峰计算应不低于4000。样品测定色谱图见图3。
图3熊果酸含量测定的HPLC图谱
注：A：样品B：对照品C：阴性对照溶液
2.3.2对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品，用甲醇将其定容至刻度，摇匀，制成浓度为20μg／ml对照品溶液。
2.3.3供试品溶液制备取胶囊内容物粉末约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流4h，放冷，溶剂挥干，残渣用石油醚（60～90℃）浸泡2次，每次15ml，每次2min，倾出石油醚液，残渣挥干残留溶剂，用甲醇溶解并转移至50ml量瓶中，摇匀，滤过，即得。
2.3.4测定方法分别精密吸取对照品，供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。含熊果酸不得少于0.42％。本品每粒含夏枯草以熊果酸（C30H48O3）计，不得少于1.89mg。
2.3.5线性关系考察精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇稀释成200μg／ml,精密吸取此对照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，摇匀，分别取20μl进样测定，按上述色谱条件测定峰面积，回归方程为：Y=235711X＋4863，r=0．9992，结果表明熊果酸在0．473～3.5μg范围内线性关系良好。
2.3.6精密度试验将对照品储备液稀释10倍后精密吸取20μl，连续进样5次，测定峰面积，其RSD为1.23％。结果表明该色谱条件精密度良好。
2.3.7重复性试验取同一批号样品5份，按上述条件测定，结果样品中熊果酸平均含量为0.754％，RSD值为1.75％。
2.3.8稳定性试验将对照品储备液稀释10倍后精密吸取对照品溶液20μl，室温下放置，每隔一定时间进样一次，测定24h内峰面值，熊果酸含量的相对标准偏差为1.42％。结果表明室温下供试品溶液较稳定。
2.3.9加样回收率测定取已知熊果酸含量（0.754％）的供试品溶液6份，分别精密加入一定量的熊果酸对照品，按上述含量测定项下的方法测定，结果见表1。平均回收率为98.79％，RSD值为1.27％。表1加样回收率试验测定结果
2.3.10样品测定分别取本品内容物粉末，精密称定，然后按上述方法制备供试品溶液，分别精密吸取20μl，按上述色谱条件测定，计算熊果酸的含量。结果熊果酸平均含量为0.739％。见表2。表2含量测定结果
3讨论
本品系多味中药组成的复方制剂，其中夏枯草为方中君药。为准确测定熊果酸的含量，参考药典及相关文献资料，曾进行了薄层扫描法与高效液相法比较，最终确定HPLC法的色谱条件及测定方法，并进行了方法学考察，结果表明熊果酸吸收峰灵敏度较高，分离较为理想，阴性对照液测定显示在熊果酸出峰位置处无其他干扰，保证了检测的准确性。文中钩藤的薄层鉴别，经多次实验此方法提取效果好，展开系统也曾尝试用乙酸乙酯-丁酮-氨水等，但不能得到很好的分离，后经优化采用氯仿-乙酸丁酯-氨水，取得较满意的层析效果。黄芩苷的薄层鉴别经实验比较，以硅胶G板代替药典的聚酰胺薄膜法，采用文中所述展开系统，结果斑点清晰，可以有效分离，且阴性无干扰。
【参考文献】
1国家药典委员会．中国药典，一部．北京：化学工业出版社，2005，198．
2闫雪生，刘青松.高效液相色谱法测定中药中熊果酸的含量.临床与试验研究，2005，3（5）：4-6.
3郑琴，潘革.正天丸中钩藤的薄层色谱鉴别方法改进.中国药师，2003，6（4）：248-249.