HPLC法测定素清丸黄芩苷含量

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【摘要】建立hplc法测定素清丸中黄芩苷的含量。方法采用PhenomenexC18Gemini（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，柱温为室温，以甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长：280nm。结果黄芩苷进样量0.501～2.506μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9999）,平均回收率为99.10%,RSD=0.50%（n=5）。结论该方法简便,结果准确,可作为本品质量控制的有效方法。

【关键词】HPLC素清丸黄芩苷

【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthequantitativedeterminationofBaicalininSuqingpills.MethodsThedeterminationwasperformedonPhenomenexC18column（250mm×4.6mm,5μm）withthemobilephaseconsistedofmethanol-0.5%phosphoricacidsolution（50:50）andthecolumntemperaturewasambient.Theflowratewas1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwassetat248nm.ResultsThemethodshowedagoodlinearrelationshipwithintherangeof0.501～2.506μgofBaicalin（r=0.9999,n=5）.Theaveragerecoveryratewas99.10%withRSD=0.50%（n=5）.ConclusionThemethodissimpleandaccurateandcanbeusedforthequalitycontrolofSuqingpills.

【Keywords】HPLC;Suqingpill;baicalin

素清浓缩丸是由茯苓、黄芩、黄连、生苡仁等九味药组方而成，为连云港中医院制剂室制剂，用于清热化湿，主治湿热内蕴，口苦口干，口中粘腻，不思饮食，精神倦怠，大便不爽，舌苔黄厚，临床用于清热泻火、消炎利便，效果显著。为了确保制剂质量，笔者根据方中成分,选择其主药之一黄芩苷作为含量控制的指标,现参照相关文献资料［1～4］，建立用高效液相色谱法测定素清丸中黄芩苷含量的方法，方法简便，重现性好，可用于该制剂的质量控制和评价。

1仪器与试药

Waters-2695型液相色谱仪,Waters-2996型紫外检测器，Empower色谱工作站；色谱柱：PhenomenexC18柱Gemini（250mm×4.6mm，5μm）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检验所，批号1110715-200514）；甲醇为色谱纯，磷酸为优级纯。素清丸为连云港中医院制剂室提供（批号：20060521、20060612、20060803）。

2方法与结果

2．1色谱条件流动相为甲醇：0.5%磷酸溶液（50：50），流速：1.0ml/min，检测波长：280nm。柱温：室温；理论板数按黄芩苷计7500。

2．2对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品50.12mg，置50ml量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液5ml置50ml量瓶中,用流动相稀释到刻度，作为对照品溶液。

2．3样品溶液的制备样品研细，精密称取的样品细粉3.12g用流动相50ml,加热回流3h，然后转移置100ml容量瓶中，超声30min使溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm水溶性滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2．4线形关系的考察取对照品溶液，分别进样5、10、15、20、25μl，即得含相当于黄芩苷0.5012、1.0024、1.5036、2.0048、2.506μg的对照品溶液，测定峰面积，以黄芩苷质量为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得出回归方程以及线性范围，Y=1.78×107X－6521，r=0.9999，黄芩苷进样量在0.501～2.506μg范围内峰面积与进样量呈良好线性。

2．5进样精密度试验在上述色谱条件下，取黄芩苷对照品溶液重复进样6次20μl,记录峰面积，RSD为0.6%。

2．6重复性试验精密称取同一批号的样品（批号：20060521），按照样品测定的方法操作重复操作6次，测得黄芩苷平均含量和RSD,结果表明：重复性试验RSD为1.6%，表明本法重现性较好。

2.7加样回收试验精密称取已知含量的样品5份，每份加入精密称定的对照品混匀，照样品含量方法操作，计算回收率见表1。表1加样回收试验

2.8稳定性试验取样品（批号：20060521）新配的供试品溶液分别在0，1，3，5，8h进样10μl,测定其中黄芩苷的峰面积，结果RSD为1.2%，表明供试品溶液在8h内稳定。

2.9样品的含量测定取3批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10μl，记录色谱图，按外标法计算，结果见表2，图1。表2样品含量测定结果

3讨论

参考《中国药典》有关黄芩苷含量测定方法［1］,分别选用甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）；甲醇-0.1%磷酸溶液（50：50）和乙腈-0.5%磷酸溶液（28：72）三种流动相实验，黄芩苷的峰型没有太大差异，分离效果不太理想，但是采用甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）作为流动相，与样品周围的杂质峰能够完全分开，分离效果较为理性。

用纯甲醇和流动相两种溶剂分别对样品进行超声提取,结果显示,仅仅用甲醇超声提取,样品提取不是很完全，选用流动相先加热回流3h，提取率高,再测定黄芩苷的含量，为了避免其他成分的干扰，每针样品进样分析时间不得少于35min。

【参考文献】

1国家药典委员会.中国药典（一部）.北京:化学工业出版社,2005，211.

2徐群英，应佳.高效液相色谱法测定气管炎片中黄芩苷含量.中国药业，2008，7（3）：23.

3赵向阳,沈静,刘峰,等.HPLC法测定复方半枝莲胶囊中野黄芩苷含量.安徽医药,2005,9（5）:348.

4左宏笛，鲍家科，茅向军.HPLC法测定功劳去火胶囊中黄芩苷的含量.贵阳中医学院学报，2008，30（1）：79.