益母草对皮肤的防护作用
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人体皮肤衰老主要表现为出现皱纹及皮肤松弛，而面部被阳光照射的机会较多，因此皮肤衰老的程度会更加明显。《唐本草》中记载益母草“敷丁肿、服汁使丁肿毒内消”，现代药理研究证实益母草中含益母草碱，具有抑制细菌及皮肤真菌的作用［1］，临床研究也证明益母草可以治疗荨麻疹［2］、皮肤瘙痒症［3］、痤疮［4］等皮肤疾病，本实验以照射性衰老模型小鼠探讨益母草对光照性皮肤衰老的修复作用。
1 实验材料
1. 1 实验药物 益母草赋形剂。
1. 2 实验动物 SPF 级小鼠，46 日龄，体重 18. 0 ～22. 0g，由沈阳医科大学实验动物中心提供。
1. 3 主要试剂 羟脯氨酸( Hyp) 试剂盒、过氧化氢酶( CAT) 试剂盒、过氧化物歧化酶( SOD) 试剂盒、谷胱甘肽过氧化酶( GSH － PX) 试剂盒和丙二醛( MDA)试剂盒，均为南京建城生物试剂公司产品。
1. 4 主要仪器 SS—03 紫外线光疗仪( 上海希格玛高技术有限公司) ; 平板离心机( 长沙湘仪仪器设备有限公司，GL －20 型) ; 紫外分光光度计( 北京普析通用仪器设备厂，T6 新世纪型) ; 脱水机( 德国徕卡公司，LEICA 300 型) ; 石蜡包埋机( 德国徕卡公司，EG1150型) ; 切片机( 德国徕卡公司，LEICA RM2235 型) ; 数码显微镜( 日本 OLYMPUS 公司，OLYMPUS BX41 型)
2 实验方法
2. 1 紫外线照射前准备 20W 中波紫外线( UVB) 灯管两根，40W 长波紫外线( UVA) 灯管 2 根，安装于SS － 03 紫外线光疗仪上，组成照光设备。照光前用紫外强度辐照仪测距离灯管各高度下 UVA 和 UVB 的紫外线辐照强度( 单位: mJ/cm2) 。应用 308nm 准分子光疗仪测得小鼠背部皮肤的最小红斑量 ( MED) 为1. 25J / cm2，拟采用 80% 的皮肤最小红斑量作为照射剂量，计算得到的每次照射剂量为 1. 0cm2。将小鼠置于固定器上，用电推剪剃除颈背部毛发，选取颈背部皮肤区作为实验研究区。使照射区域皮肤充分暴露，隔天脱毛 1 次。
2. 2 紫外线照射和涂药 将固定器放置在紫外线光疗仪灯具的正下方 20cm 处，此前测得此处的中波紫外线强度为 1. 81mJ/cm2，长波紫外线强度为 3. 58mJ/cm2，根据此处中波紫外线的强度和拟采用的照射剂量，计算出每次照射时间为 10min，每日 1 次，连续照射 40 天，计算出 UVB 照射总剂量为 43. 44J，算出相同时间下 UVA 的总剂量为 85. 92J。在紫外线照射部位选取一块皮肤，在每次照光之后，均匀涂抹一层益母草赋形剂，待下次照光前洗掉。
2. 3 组织病理学标本的制备和指标测定 分别在紫外线照射区、外涂益母草赋形剂区和正常皮肤区域切取皮肤组织，对组织切片进行常规苏木精 － 伊红( HE)染色，将取下来的皮肤去除脂肪组织，用羟脯氨酸测定试剂盒( 碱水解法) 测定皮肤中羟脯氨酸的含量; 用CAT 试剂盒( 酮酸铵法) 测定皮肤组织中 CAT 含量;用 MDA 试剂盒( 硫代巴比妥酸法) 测定皮肤组织中MDA 含量; 用 SOD 试剂盒( 黄嘌呤氧化酶法) 测定皮肤组织中 SOD 含量; 用 GSH － px 试剂盒( 二硫代二硝基苯甲酸法) 测定皮肤组织中 GSH － px 含量。
2. 4 统计学处理 实验数据以(珋x ± s) 表示，用 t 检验分析各组间差异。采用 SPSS 11. 0 统计分析软件，显著性检验水平 α =0. 05。
3 实验结果
3. 1 皮肤组织中 Hyp 、GSH － Px 的含量变化 光老化皮肤组织中 Hyp 、GSH － Px 水平较正常对照组显著降低( P ＜0. 01) ; 外涂益母草组较紫外线照射组 Hyp 、GSH － Px 增加( P ＜ 0. 01) 。Hyp 、GSH － Px 试剂盒测得的小鼠正常皮肤区域、紫外线照射区、外涂益母草赋形剂区皮肤组织中 Hyp 、GSH － Px 含量值见表 1。
3. 2 皮肤组织的 SOD、CAT 含量 光老化皮肤组织中 SOD、CAT 水平较正常对照组显著降低( P ＜0. 01) ;外涂益母草组较紫外线照射组 SOD、CAT 显著升高( P＜ 0. 01) 。SOD、CAT 试剂盒测得的小鼠正常皮肤区域、紫外线照射区和外涂益母草赋形剂区的皮肤组织中 SOD、CAT 含量值见表 2。
3. 3 皮肤组织中 MDA 含量 光老化皮肤组织中MDA 水平较正常对照组显著升高( P ＜ 0. 01) ，外涂益母草组较紫外线照射组 MDA 降低( P ＜ 0. 01) 。MDA试剂盒测得的小鼠正常皮肤区、紫外线照射区和外涂益母草赋形剂组的皮肤组织中 MDA 含量见表 3。
4 分析与讨论
本实验表明，通过短期、高强度的紫外线照射皮肤，小鼠皮肤表面干燥、粗糙，有日光性角化以及不规则色素沉着等; 组织学改变可见角质层紧密性增加、颗粒层增厚、表皮变薄、核异性、排列紊乱、角质形成细胞成熟异常等; 结合所检测的指标: HyP、GSH － px、SOD、CAT 含量降低，证明光老化皮肤造膜成功。而用药后，Hyp 、GSH － Px、SOD、CAT 指标的升高则表明益母草对紫外线所造成的皮肤损伤有保护和修复作用。现代研究表明益母草中含有 Al，B，Po 等18 种微量元素，含宏量元素 Ca 和 Mg［5］。硒是谷胱甘肽过氧化物酶GSH － Px 的主要成分，而 GSH － Px 作为一种全身性的抗氧化因子，参与多种生理和病理过程，可以清除人体内的过氧化物和自由基，使人体细胞免受伤害，从而延缓衰老［6］。益母草碱具有明显的抗血小板聚集括性［7］，益母草通过抑制血小板功能，抑制内、外凝血功能，促进纤溶活性 3 个环节对体外血栓的形成有所抑制［8］。益母草的这些作用，可以加速代谢产物排泄，体现美容作用，并可延缓衰老。