中药对mRNA表达的影响

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蛋白激酶 C 是一类可使丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化的蛋白激酶，在多种免疫受体介导的信号转导中可被二酰甘油( DAG) 和钙离子所激活。而 DAG － PKC通路的异常变化很可能是高血糖引起各组织功能紊乱的共同通路。PKC 是一种重要的第二信使，它通过将胞外信息传递到细胞内，从而调节细胞的生长发育、收缩、分泌、传导、膜通透性、细胞外基质和基因表达等等。在糖尿病状态下，这些功能均出现了异常。蛋白激酶 C 的激活可引起血管内皮功能异常、血管基底膜增厚、血管通透性增加、诱发心肌病变、提高肾小球滤过率等，从而引发各种糖尿病并发症。近年来，中药对糖尿病蛋白激酶 C 活性影响的研究开展的也比较多，中药对蛋白激酶 C 的抑制在糖尿病及其并发症的治疗研究中将有良好的前景。本实验研究拟探讨中药复方益糖康对 STZ 致糖尿病模型大鼠蛋白激酶 C( PKC)mrna 表达的影响。

1 材料与方法

健康雄性 Wistar 大鼠 30 只，体重 200 ～ 250g，采用 STZ 腹腔注射方法复制糖尿病大鼠模型，剂量为55mg / kg。72h 后测血糖，高于 16. 7mmol / L 纳入实验，并将其随机分为安慰剂组和益糖康组，每组 10 只。没有注射 STZ 的列为空白对照组，空白对照组大鼠 10只。空白对照组给予生理盐水，安慰剂组和益糖康组分别给予安慰剂和益糖康( 均为临床试验用药) ，日 1次灌胃，5mL/次。于 6 周末，将大鼠断髓处死，分离脊柱，用眼科剪纵向剖开脊柱，眼科镊子收集 L3～ L5段双侧背根神经节，置于冻存管中，－ 80℃ 保存备用。采用 RT － PCR方法检测各组大鼠背根神经节中 PKC mRNA 的表达。蛋白激酶 C 的扩增引物: 5’－ CGC TTC GCC CGCAAA GG － 3 ’; 5 ’ － GCA GGT GTC ACA TTTCATCCC － 3’，扩增片段长度 223bp采用 SPSS10. 0 软件包进行统计分析。计量资料均以均数 ± 标准差(珋x ± s) 表示，多组均数比较采用单因素方差分析。

2 结 果

RT － PCR 结果显示，安慰剂组大鼠背根神经节中PKC mRNA 表达水平显著上调，益糖康组较安慰剂组PKC mRNA 表达水平显著降低( P ＜ 0. 01) 。( 见表 1，图 1) 。

3 讨 论

蛋白激酶 C 的激活可引起血管内皮功能异常、血管基底膜增厚、血管通透性增加、诱发心肌病变、提高肾小球滤过率等，从而引发各种糖尿病并发症。如蛋白激酶 C 的激活可诱发心肌病变，导致心肌肥大和纤维化，以致心肌收缩力降低。有研究发现，在心肌病变的发生与发展过程中 PKCα、PKCβ 和 PKCε 起着重要作用，而 PKCε 和 PKCδ 的激活是心肌病发病的首要条件［1］。糖尿病肾病中蛋白激酶 C 的激活可使肾血管扩张，血流增加，提高肾小球滤过率。有研究表明，PKCβ 通过引起 PLCγ 酪氨酸磷酸化，激活血管内皮细胞生长因子( VEGF) ，导致肾内毛细血管增殖、硬化［2］。蛋白激酶 C 的激活可以使血管内皮功能异常、基底膜增厚、透性增加等，从而使周围神经缺血、缺氧，是糖尿病周围神经病变的重要因素。

近年来，中药对糖尿病蛋白激酶 C 活性影响的研究屡见报道。如茅彩萍等［3］采用酶联免疫法( ELISA)检测葛根素对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶 C 活性的影响，发现葛根素治疗后细胞膜 PKC 活性明显降低，胞浆 PKC 明显升高; 也有实验研究，六味地黄加味胶囊亦可使糖尿病大鼠肾皮质组织细胞膜 PKC 活性明显降低，胞液 PKC 明显升高［4］; 也有用免疫组化的方法检测糖尿病大鼠坐骨神经 PKC － βII 表达，发现经加味补肝汤干预后，坐骨神经纤维中神经膜、轴突中PKC － βII 的阳性表达随着治疗时间而逐渐减少［5］。本实验结果显示，与空白对照组比较，安慰剂组大鼠背根神经节中 PKC mRNA 表达显著上调，而中药益糖康组 PKC mRNA 表达水平有所下调，提示我们中药益糖康可能是通过下调 PKC mRNA 表达水平而实现其对糖尿病及其并发症的良好疗效的。