雷公藤多苷调节肾组织p38MAPK信号通路改善糖尿病肾病肾小球炎症性损伤的作用和机制
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇雷公藤多苷调节肾组织p38MAPK信号通路改善糖尿病肾病肾小球炎症性损伤的作用和机制范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
[摘要] 目的：探讨雷公藤多苷（multi-glycoside of Tripterygium wilfordii，GTW）在体内改善糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）模型鼠肾小球炎症性损伤的作用和机制。方法：采用单侧肾切除联合腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立DN模型。将大鼠随机分为3组：假手术组、对照组、GTW组，各5只。大鼠在造模成功后分别经灌胃给予蒸馏水（2 mL）或GTW悬浊液（50 mg・kg-1・d-1），每日1次，连续8周。各组大鼠自给药开始计时，第8周末处死。采集血液、尿液样本和肾组织，观察各组大鼠尿白蛋白、肾功能、肾小球形态特征、巨噬细胞（ED1+细胞）浸润以及肾组织肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α，白介素（interleukin，IL）-1β，p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK），磷酸化p38mapk（phosphorylated p38，p-p38MAPK），转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-β1的蛋白表达水平。结果：GTW能改善DN模型鼠一般情况、体重，减少尿白蛋白，减轻肾小球硬化，抑制肾小球ED1+细胞浸润，下调肾组织TNF-α，IL-1β，p-p38MAPK，TGF-β1蛋白表达水平。结论：GTW在体内具有抑制炎症细胞浸润和炎症因子表达，减轻肾组织炎症性损伤的作用；GTW通过下调肾组织p38MAPK信号通路中关键信号分子――p-p38MAPK蛋白表达水平，抑制炎症信号通路活性，减少TGF-β1表达，从而，改善肾组织炎症性损伤。
[关键词] 糖尿病肾病；雷公藤多苷；炎症；p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路
目前，炎症（inflammation）作为糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）糖代谢紊乱、血流动力学障碍、氧化应激损伤等经典发病机制的下游途径被国内外学者高度关注[1]。DN炎症性损伤包括炎症细胞（inflammatory cell）活化、炎症因子（inflammatory cytokine）高表达、炎症信号通路（inflammatory signaling pathway）激活等重要环节。其中，p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路不但可以调控炎症细胞增殖、分化和凋亡过程，而且，在炎症参与的肾组织病变（肾小球硬化和肾间质纤维化）中发挥着关键作用。研究表明，在DN相关病理因素诱导下，肾小球中浸润的巨噬细胞（macrophage，MΦ）活化，过度生成炎症因子，如肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α、白介素（interleukin，IL）-1β、单核细胞趋化蛋白（monocyte chemotactic protein，MCP）-1等，诱导磷酸化p38MAPK（phosphorylated p38，p-p38MAPK）高表达，从而，激活p38MAPK信号通路，促进下游产物――转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-β1基因转录和蛋白表达，导致系膜细胞（mesangial cell，MC）增生及细胞外基质（extracellular matrix，ECM）沉积，最终，形成肾小球硬化[2]。因此，国内外学者认为，炎症是促进DN肾小球硬化的恶化因素；改善炎症，尤其是抑制p38MAPK信号通路的活性，就可以改善DN肾小球炎症性损伤[3-4]。
近年来，经典的抗炎症单味中药――雷公藤多苷（multi-glycoside of Tripterygium wilfordii，GTW）在临床上被应用于治疗DN蛋白尿。据报道[5]，GTW（120 mg・d-1）治疗65例DN患者3个月，蛋白尿减少，肾功能改善，其疗效优于缬沙坦；GTW治疗DN患者8周，其保护足细胞的作用与厄贝沙坦相当。此外，GTW可以减少DN模型鼠蛋白尿，改善肾小球硬化性损伤，其作用类似贝那普利[6]。然而，迄今为止，针对DN模型相关的肾小球炎症性损伤，GTW在体内的作用和机制还不是很清楚。因此，笔者借助单侧肾切除联合链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）诱导的DN模型，阐明GTW在体内改善DN肾小球炎症性损伤的作用和机制。
1 材料
1.1 动物 15只8周龄左右的雄性Sprague Dawley大鼠（SPF）购自总院动物中心（批号slxk2012-02），饲养于南京大学医学院附属鼓楼医院（简称“鼓楼医院”）动物实验中心。
1.2 药物和试剂 STZ购自Sigma公司，GTW购自江苏泰州美通制药有限公司（批号090513）。据报道[7]，对于抗Thy1.1抗体诱导的慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）模型鼠而言，GTW有效而安全的剂量为50 mg・kg-1・d-1；将GTW 10 g溶解于10 mL蒸馏水中，配置GTW悬浊液（1 g・mL-1）。全蛋白提取试剂盒、二喹啉甲酸（bicinchonininc acid，BCA）蛋白浓度测定试剂盒购自凯基公司，山羊抗小鼠IgG抗体购自联科公司，驴抗兔Alexa Fluor 594购自Invitrogen公司，兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体、小鼠抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）单克隆抗体、小鼠抗大鼠TNF-α单克隆抗体、小鼠抗大鼠巨噬细胞（ED1+细胞）单克隆抗体购自Abcam公司，兔抗大鼠p38MAPK和p-p38MAPK多克隆抗体购自Cell Signaling Technology公司，兔抗大鼠IL-1β多克隆抗体、兔抗大鼠β-actin多克隆抗体、小鼠抗大鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate deydrogensae，GAPDH）单克隆抗体、辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的山羊抗兔IgG购自Bioworld公司。
2 方法
2.1 模型制作方法 借助STZ建立大鼠糖尿病模型，并基于文献记载的方法[8-9]而进行适当改进。以氯胺酮（2 mg・kg-1）腹腔注射，麻醉大鼠；取俯卧位，在左侧背部肋弓下缘做下行纵向切口3 cm，暴露左肾，分离肾脏周围脂肪和肾上腺，结扎左侧肾门血管，摘除左肾，缝合切口。手术7 d后，向右侧腹腔中注射 STZ（35 mg・kg-1）。72 h后，再次腹腔注射同等剂量的STZ，此后，每日用血糖仪测定大鼠随机血糖，当血糖持续在16.7 mmol・L-1以上时，确定糖尿病模型建立。此时，开始用诺和灵N（1 U・kg-1）给大鼠皮下注射，隔日1次。保持糖尿病大鼠随机血糖稳定在16.7～25.5 mmol・L-1。术后2周，当糖尿病大鼠尿白蛋白（urinary albumin，UAlb）稳定在 20 mg・d-1以上时，确定为DN模型建立。假手术组大鼠仅在手术时暴露肾脏，缝合切口。术后7 d，向右侧腹腔中注射1 mL生理盐水。
2.2 分组与给药方法 将15只大鼠随机分为3组：假手术组、对照组、GTW组，各5只。GTW组大鼠在DN造模成功后经灌胃给予GTW（50 mg・kg-1・d-1）、对照组和假手术组大鼠也同时予蒸馏水（2 mL），每日1次，连续8周。实验结束时，所有大鼠麻醉后心脏穿刺处死，采集血液样本和肾组织而进行相关检测。
2.3 一般情况、体重 观察各组大鼠精神、饮食、饮水、皮毛色泽以及活动情况等。
2.4 尿白蛋白、尿量和血糖 分别将各组大鼠放入金属代谢笼，禁食，自由饮水，收集24 h尿液，并测量尿量。尾静脉取血测定血糖。采用免疫散浊法测定UAlb。
2.5 血清生化指标 经心脏采集血样，采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐（serum creatinine，Scr）、血清尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、谷丙转氨酶（alanine transaminase，ALT）以及谷草转氨酶（aspartate transaminase，AST）。
2.6 肾小球形态特征 肾脏摘除后，分离皮、髓质，并取少量肾皮质（肾上、下极）固定于10%中性甲醛内，经脱水16 h后，石蜡包埋，切片3 μm，进行过碘酸雪夫（periodic acid schiff，PAS）染色；借助光学显微镜（光镜），观察肾小球内细胞数量、ECM沉积程度；每张切片随机选取20个肾小球，采用病理图像分析系统imagepro plus（IPP）计算肾小球内细胞数量、ECM相对面积（ECM面积/肾小球面积）。
2.7 肾小球I型胶原表达 取右肾极组织，进行3 μm冷冻切片，再以间接免疫荧光法进行I型胶原荧光染色。一抗为兔抗大鼠I型胶原多克隆抗体（Abcam公司），二抗为荧光标记的驴抗兔 IgG抗体。向冷冻切片所载标本内依次滴加一抗和二抗，其间，以磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）洗片，经37 ℃孵育30 min，甘油封片。每张切片随机选取20个肾小球，按文献方法[10]，进行I型胶原荧光染色范围半定量积分（0～4分）。
2.8 肾小球巨噬细胞浸润 将石蜡切片常规脱蜡（二甲苯I，II，III各10 min，无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇各5 min，自来水冲洗5 min），将切片置于专用塑料抗原修复盒中，加入抗原修复液（0.05 mmol・L-1 EDTA，pH 9.0），应用医用微波炉抗原修复20 min，取出抗原修复盒，室温自然冷却。PBS冲洗3次，每次5 min，3%双氧水室温10 min，PBS冲洗3次，每次5 min。滴加山羊血清10 min，甩干。滴加一抗[小鼠抗大鼠ED1+单克隆抗体（1∶100）]，4 ℃过夜。PBS冲洗3次，每次5 min，滴加二抗[HRP标记的山羊抗兔IgG（1∶1 000）]孵育30 min，PBS冲洗3次，每次5 min。滴加DAB，并观察、控制显色程度，蒸馏水冲洗，以终止显色。苏木素轻度复染，脱水、透明、封片。借助光镜，观察肾小球ED1+细胞数量并摄片。
2.9 肾组织炎症因子及p38MAPK信号通路关键信号分子蛋白表达 从-80 ℃冰箱中取出100 mg肾组织，用剪刀剪碎；用PBS冲洗肾组织，放入4 ℃离心机，离心（3 000 r・min-1×5 min），反复冲洗，再离心，共3次；弃去PBS冲洗液，向肾组织中加入含蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）的总蛋白裂解液，用电动匀浆机匀浆，在冰上放置30 min，每隔3 min震荡1次，最后，再次放入4 ℃离心机，离心（12 000 r・min-1×15 min），取上清液（即总蛋白），少量用于BCA法测定蛋白浓度，其余按4∶1的比例与蛋白上样缓冲液混匀，在沸水中煮10 min进行蛋白变性，于-80 ℃冰箱保存备用。提取总蛋白后，配制分离胶和浓缩胶，分别加样，在电泳槽中加满电泳缓冲液进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）。电泳完毕，取下凝胶，根据目的蛋白的位置留取相应凝胶，并将凝胶上的蛋白电转移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，用含10%脱脂奶粉的Tris buffered saline tween（TBST）缓冲液（20 mmol・L-1 Tris HCl，150 mmol・L-1 NaCl，0.05% Tween 20）封闭2 h。分别向PVDF膜中加入相应的一抗[TNF-α（1∶1 000），IL-1β（1∶250），p38MAPK（1∶250），p-p38MAPK（1∶250），TGF-β1（1∶1 000），α-SMA（1∶1 000），GAPDH（1∶10 000），β-actin（1∶1 000）]，室温孵育4 h，用TBST缓冲液洗涤约1 h。分别加入二抗，如HRP标记的山羊抗兔IgG抗体（1∶2 500）、山羊抗小鼠IgG抗体（1∶10 000），室温孵育2 h，再次用TBST缓冲液洗涤约1 h。取出PVDF膜，将HRP显色液均匀地涂在PVDF膜上，在暗室曝光，定影。用Quantity one 1.1.1软件进行光密度分析，结果分别与GAPDH或β-actin光密度相对照，其比值表示蛋白相对表达量。
2.10 统计学分析 实验数据采用±s表示，组间比较在进行方差齐性检验后采用单因素方差分析，P
3 结果
3.1 GTW对模型鼠一般情况、体重的影响 对照组和GTW组大鼠均出现进食、饮水、尿量增多，活动减少，体态消瘦，皮毛晦暗等变化，其中，对照组大鼠表现尤为明显。自术后第2周（造模后0周）开始，对照组大鼠体重增长缓慢，经GTW干预后，体重有所上升，与对照组大鼠相比，其差异有统计学意义（P
3.2 GTW对模型鼠尿白蛋白、尿量、血糖的影响 假手术组大鼠UAlb、尿量、血糖始终保持在较低水平，而对照组及GTW组大鼠的血糖在STZ注射72 h后升高，并一直维持在16.7 mmol・L-1以上；UAlb、尿量在术后第2周后明显升高，其中，对照组大鼠UAlb随时间持续性增加。经GTW干预后，模型鼠UAlb出现下降，在干预后的第4，8周末，与对照组大鼠比较，其差异有统计学意义（P
3.3 GTW对模型鼠血清生化指标的影响 在造模后第8周末，对照组、GTW组大鼠Scr，BUN有所升高，与假手术组大鼠比较，其差异有统计学意义（P
3.4 GTW对模型鼠肾小球ED1+细胞浸润和肾组织TNF-α，IL-1β表达的影响 在造模后的第8周末，假手术组大鼠肾小球内未见或仅见极少量ED1+细胞浸润，对照组大鼠肾小球浸润的ED1+细胞数明显增多，肾组织TNF-α，IL-1β蛋白表达水平明显上调，与假手术组大鼠比较，其细胞数和蛋白表达量差异均有统计学意义（P
3.5 GTW对模型鼠肾组织p-p38MAPK，TGF-β1表达的影响 在造模后第8周末，对照组大鼠肾组织p-p38MAPK，TGF-β1蛋白表达水平明显上调，与假手术组大鼠比较，其差异有统计学意义（P
3.6 GTW对模型鼠肾小球形态特征的影响 假手术组大鼠肾小球毛细血管襻开放良好，未见明显细胞增生、ECM增宽以及I型胶原染色增强等病理变化（图3中A，图4中B）；在造模后的第8周末，对照鼠肾小球肥大，肾小球内ECM面积及细胞总数增多（图3中B），与假手术组大鼠比较，其差异有统计学意义（P
4 讨论
国内外所采用的糖尿病动物模型包括“自然发病、药物诱导、基因转染”等3类，其中，STZ诱导的大鼠糖尿病模型应用最为广泛。研究表明，大鼠在被注射STZ后2周逐渐出现白蛋白尿；在造模后的1～3个月出现代表性致纤维化细胞因子――TGF-β
在DN发展过程中，炎症作为上游因素，对于下游的肾小球硬化性损伤的形成具有重要作用。据报道[13]，巨噬细胞在肾小球浸润是DN出现炎症反应的标志性特征。巨噬细胞通过自分泌或旁分泌而生成多种炎症因子，如IL-1β，TNF-α等[13]，这些炎症因子的过度表达又促进了肾组织损伤的进展。据报道[14-15]，TNF-α是由单核/巨噬细胞或肾脏固有细胞产生的代表性炎症因子，TNF-α不仅对肾脏细胞具有直接的细胞毒作用，而且，可以激活多条细胞信号通路而诱导细胞凋亡[16-17]；在DN肾组织中高表达的IL-1β可以直接刺激肾小球细胞增生和ECM合成[18]。笔者的研究结果显示，GTW不仅可以改善DN模型鼠肾小球内ED1+细胞浸润，抑制肾组织IL-1β，TNF-α高表达，还可以减少肾小球细胞增生、ECM和胶原沉积，降低肾小球内I型胶原表达，改善肾小球硬化性病变。
研究表明，在DN状态下，肾组织的炎症可以启动多条细胞内信号通路，其中，p38MAPK信号通路是较为经典的炎症通路。p38MAPK信号通路具有3级激酶级联反应的特点，即“MAPK激酶激酶（MAPK kinase kinase，MAPKKK）MAPK激酶（MAPK kinase，MAPKK或MKK）MAPK”。作为p38MAPK信号通路的上游启动因子――IL-1β或TNF-α，其过度表达而刺激系膜细胞后，MAPKKK被磷酸化而激活，进而，再激活MAPKK。MAPKK具有磷酸化苏氨酸/酪氨酸残基的双特异功能，尤其是MKK3/MKK6对p38MAPK有高度特异性的活化作用。活化的p38MAPK可以进入到细胞核，调控下游代表性致纤维化因子――TGF-β1的表达及其生物效应[19]。因此，通过干预p38MAPK信号通路中关键信号分子――p-p38MAPK表达就有可能抑制其活性。
基于上述理论，为了阐明GTW改善DN模型鼠肾组织炎症性损伤的机制，笔者探讨了GTW是否可以在体内抑制肾组织p-p38MAPK，TGF-β1蛋白表达。结果表明，DN模型鼠肾组织p-p38MAPK蛋白表达水平上调，同时，出现了肾小球ED1+细胞浸润以及TGF-β1蛋白表达水平升高；经GTW干预后，肾组织p-p38MAPK，TGF-β1蛋白表达水平下调，肾小球内浸润的ED1+细胞也相应地减少。笔者推测，DN模型鼠肾组织p38MAPK信号通路激活后，胞内p-p38MAPK表达水平升高，促进核内TGF-β1靶基因转录和过度表达，加剧肾小球硬化的形成；而GTW通过下调DN模型鼠肾组织p38MAPK信号通路中关键的信号分子――p-p38MAPK表达，抑制其信号通路的活性，减少其下游TGF-β1蛋白表达水平，最终，改善肾小球硬化。这可能就是GTW改善DN模型鼠肾组织炎症性损伤的机制之一。
综上所述，借助单侧肾切除联合STZ诱导的DN模型鼠，笔者阐明，GTW在体内具有抑制炎症细胞浸润和炎症因子表达，减轻肾组织炎症性损伤的作用；GTW通过下调肾组织p38MAPK信号通路中关键信号分子――p-p38MAPK蛋白表达水平，抑制炎症信号通路活性，减少TGF-β1表达，从而，改善肾组织炎症性损伤。
[致谢] 本课题得到南京大学医学院附属鼓楼医院检验科罗浔阳副主任技师和科技处张乐助理研究员的帮助和指导。
[参考文献]
[1] Navarro-González J F，Mora-Fernández C，Muros de Fuentes M，et al. Inflammatory molecules and pathways in the pathogenesis of diabetic nephropathy [J]. Nat Rev Nephrol，2011，7（6）：327.
[2] Adam J L，Badger A M，Kumar S，et al. p38MAP kinase：molecular target for the inhibition of pro-inflammatory cytokines [J]. Prog Med Chem，2001，38：1.
[3] 陈好利，万毅刚，赵青，等. 糖尿病肾病肾组织炎症信号通路p38MAPK的调节机制及中药的干预作用[J]. 中国中药杂志，2013，38（14）：2268.
[4] Zhang Y J，Tian Z L，Yu X Y，et al. Activation of integrin β1-focal adhesion kinase-RasGTP pathway plays a critical role in TGF beta1-induced podocyte injury[J]. Cell Signal，25（12）：2769.
[5] 葛永纯，谢红浪，李世军，等.雷公藤多苷治疗糖尿病肾病的前瞻性随机对照临床试验[J].肾脏病与透析肾移植杂志，2010，19（6）：501.
[6] 张慧兰，孙伟，万毅刚，等.雷公藤多苷对糖尿病肾病模型肾小球损伤的影响[J].中国中药杂志，2010，35（11）：1460.
[7] 万毅刚，孙伟，，等.雷公藤多苷对抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子表达的影响[J]. 中国中西医结合杂志，2006，26（12）：1094.
[8] 徐颖，周世文，汤建林，等.实验性糖尿病肾病大鼠模型建立及优化[J].第三军医大学学报，2006，28（22）：2247.
[9] 邢淑丽，郑君芙，黄文政.单侧肾切除STZ诱导的糖尿病肾病大鼠动物模型研究[J].中国中医急症，2006，15（6）：643.
[10] Raij L，Azar S，Keane W. Mesangial immune injury，hypertension，and progressive glomerular damage in Dahl rats[J]. Kidney Int，1984，26（2）：137.
[11] Ma B，Kang Q，Qin L，et al. TGF-β2 induces transdifferentiation and fibrosis in human lens epithelial cells via regulating gremlin and CTGF [J]. Biochem Biophys Res Commun，2014，447（4）：689.
[12] Hao H H，Shao Z M，Tang D Q，et al. Preventive effects of rutin on the development of experimental diabetic nephropathy in rats [J]. Life Sci，2012，91（19/20）：959.
[13] Wu C C，Sytwu H K，Lin Y F. Cytokines in diabetic nephropathy [J]. Adv Clin Chem，2012，56：55.
[14] Pamir N，McMillen T S，Kaiyala K J，et al. Receptors for tumor necrosis factor-alpha play a protective role against obesity and alter adipose tissue macrophage status [J]. Endocrinology，2009，150（9）：4124.
[15] Zhang B，Ramesh G，Norbury C C，et al. Cisplatin-induced nephrotoxicity is mediated by tumor necrosis factor-alpha produced by renal parenchymal cells [J]. Kidney Int，2007，72（1）：37.
[16] Luster M I，Simeonova P P，Gallucci R，et al. Tumor necrosis factor alpha and toxicology [J]. Crit Rev Toxical，1999，29（5）：491.
[17] Laster S M，Wood J G，Gooding L R. Tumor necrosis factor can induce both apoptic and necrotic forms of cell lysis [J]. Immunol，1988，141（8）：2629.
[18] Rivero A，Mora C，Muros M，et al. Pathogenic perspectives for the role of inflammation in diabetic nephropathy [J].Clin Sci，2009，116（6）：479.
[19] Li G，Li Y，Liu S，et al. Gremlin aggravates hyperglycemia-induced podocyte injury by a TGFβ/smad dependent signaling pathway [J]. J Cell Biochem，2013，114（9）：2101.
Effects and mechanisms of multi-glycoside of Tripterygium wilfordii improving
glomerular inflammatory injury by regulating p38MAPK signaling
activation in diabetic nephropathy rats
HUANG Yan-ru1，2， WAN Yi-gang2，3*， SUN Wei2*， MAO Zhi-min1，2， ZHAO Qing2， SHI Xi-miao1，2， YAO Jian4
（1. Nanjing Drum Tower Hospital Clinical College of Traditional Chinese and Western Medicine，
Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210008， China；
2. Research Institute of Kidney Disease， Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210029， China；
3.Department of Traditional Chinese Medicine， Nanjing Drum Tower Hospital， The Affiliated Hospital of
Nanjing University Medical School， Nanjing 210008， China；
4. Department of Molecular Signaling， University of Yamanashi， Yamanashi 409-3898， Japan）
[Abstract] Objective： To explore the effects and mechanisms of multi-glycoside of Tripterygium wilfordii（GTW）on improving glomerular inflammatory lesion in rats with diabetic nephropathy（DN）. Method： DN model was induced by unilateral nephrectomy and intraperitoneal injection of STZ（35 mg・kg-1）twice. The rats were randomly divided into 3 groups，the sham-operated group（Sham group，n=5），the vehicle-given group （Vehicle group，n=5）and GTW-treated group（GTW group，n=5）. After the model was successfully established，the rats in GTW group were daily oral administrated with GTW suspension（50 mg・kg-1・d-1），meanwhile，the rats in Vehicle group were daily oral administrated with distilled water （2 mL） for 8 weeks. From the beginning of the administration，all rats were killed 8 weeks later. Blood and renal tissues were collected，and then UAlb，renal function，glomerular morphology characteristics and glomerular macrophages（ED1+ cells）infiltration，as well as the protein expressions of inflammatory cytokines including tumor necrosis factor（TNF）-α and interleukin（IL）-1β，and the key molecules in p38MAPK signaling pathway including p38 mitogen-activated protein kinase（MAPK），phosphorylated p38（p-p38MAPK）and transforming growth factor（TGF）-β1 were investigated respectively. Result： GTW not only ameliorated the general state of health and body weight，but also attenuated UAlb，glomerulosclerosis，the infiltration of glomerular ED1+ cells and the protein expressions of TNF-α，IL-1β，p-p38MAPK and TGF-β1 in the kidney in DN model rats. Conclusion： By means of DN model rats，we demonstrated that GTW has the protective effect on renal inflammatory damage in vivo via inhibiting inflammatory cells infiltration and inflammatory cytokines expression. Furthermore，GTW could improve renal inflammatory lesion through down-regulating the expressions of the key signaling molecules in p38MAPK pathway such as p-p38MAPK and TGF-β1，and inhibiting the activation of p38MAPK signaling in the kidney.
[Key words] diabetic nephropathy； multi-glycoside of Tripterygium wilfordii； inflammation； p38MAPK signaling pathway
doi：10.4268/cjcmm20142105