氯沙坦对自发性高血压大鼠脂肪组织脂联素造成的影响

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【摘要】 目的：探讨福辛普利和氯沙坦对自发性高血压（shr）大鼠脂肪组织脂联素的影响。方法：22周龄shr大鼠随机被分成四组，分别予福辛普利、氯沙坦、福辛普利加氯沙坦、安慰剂喂养。同系魏凯氏（wky）大鼠作对照组。8周后取尿检测大鼠尿微量蛋白（upro）和n-乙酰β-d-氨基葡萄糖苷酶（nag）含量，取脂肪组织用免疫组化法及逆转录聚合酶链式反应（rt-pcr）检测脂联素的mrna的表达。结果：shr大鼠脂肪组织脂联素表达较wky大鼠降低；upro和nag酶水平升高（p均<0.01）；福辛普利组和氯沙坦组与shr组比较血压降低（p<0.01）；upro和nag酶水平降低（p<0.01），脂联素表达上调（p<0.01）。结论：(1)shr大鼠upro和nag酶水平升高，脂肪组织脂联素表达下调;(2)福辛普利和氯沙坦可以提高shr大鼠脂肪组织脂联素表达，降低upro和nag酶水平。

【关键词】 大鼠;脂联素;福辛普利;氯沙坦

abstract：objective:to observe the impacts of fosinopril and losartan on adiponectin expression in adipose tissue of vascular walls of spontaneously hypertensive rats(shr).methods:twenty two weeks old male shr were randomly divided into four groups：model (shr) group，fosinopril （fos）group，losartan (los) group and fosinopril+losartan (fos+los) group；five 22|week old male wistar|kyoto rats (wky) were regard as the control group. after 8 weeks，24 h urinary protein (upro)，urinary n?acetyl?β?d?glucosaminidase (nagase) were detected;the mrna expression of adiponectin was detected by rt-pcr；the protein expression of adiponectin was tested by immunohisto chemistry.results:as compared to wky group，24h urinary protein content and urinary nagase were increased，adiponectin expression in adipose tissue of vascular walls was down|regulated in shr groups （p＜0.01 all)；as compared to shr group，blood pressure was lowered，24h urinary protein content and urinary nagase decreased，adiponectin expression was up?regulated in fos、los and fos+los group（p＜0.01 all）.conclusion:urinary protein content and urinary nagase increased，adiponectin expression in adipose tissue of vascular walls is down|regulated in shr group；fosinopril and/or losartan can decrease urinary protein content and urinary nagase，up-regulate adiponectin expression in adipose tissue of vascular walls of shr.

author′s　address：the 163 hospital of pla,changsha,hunan,410003,china

key words：rat;adiponectin;fosinopril;losartan 脂联素(adiponectin)是由脂肪组织分泌的一种激素蛋白。脂联素具有改善胰岛素抵抗（ir）、抗炎、抗动脉粥样硬化的作用。目前已有研究表明肥胖、ir、ⅱ型糖尿病和冠心病患者的血浆脂联素浓度下降，也有部分研究表明高血压患者脂联素水平也下降。本研究旨在研究shr大鼠脂肪组织脂联素的表达情况，及福辛普利、氯沙坦在降压的同时对脂肪组织脂联素表达和尿微量蛋白（upro）、n-乙酰β-d-氨基葡萄糖苷酶（nag）的影响。

1 资料与方法

1.1 实验动物22周雄性自发性高血压（shr）大鼠20只，以及其同系对照鼠wky（wistar-kyoto）大鼠5只，以上动物均由成都史莱克实验动物研究所提供。

1.2 主要试剂与仪器 兔抗鼠脂联素抗体，nag酶试剂盒，逆转录试剂盒(toyobo公司)；taq耐热dna聚合酶(rrakar.公司)，超清晰度病理图文分析系统pips-2000，凝胶分析系统，pcr分析软件；fr-900dna扩增仪(上海复日公司)。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 实验动物分组及给药：22周龄雄性shr 20只，被随机分为4组（每组5只）：高血压组(shr组)，福辛普利组(fos组，福辛普利 10mg/kg·d灌胃)，氯沙坦组（lo组，氯沙坦 50mg/kg·d灌胃)，福辛普利＋氯沙坦组（fos＋lo组，福辛普利10mg/kg·d＋氯沙坦50mg/kg·d联合灌胃）。22周龄雄性 wky大鼠5只(wky组)，为正常对照组。shr组和wky组给予蒸馏水清晨灌胃。各组大鼠自由进食、饮水，共喂养8周。

1.3.2 标本采集及处理：（1）血标本的采集：各组大鼠于实验结束时（30周龄），称体重，测尾动脉血压，心脏采血5ml，4 ℃离心10 min，取上清液，-80℃保存待测。用德国罗氏公司的全自动生化仪测定血肌酐（scr）、血尿素氮（bun）；（2）尿标本的收集：处死大鼠前一天，用代谢笼收集大鼠24 h尿液，离心，弃渣，留上清尿液，-80℃保存待测。upro用放射免疫法检测。按nag酶试剂盒说明检测nag酶活性；（3）脂肪组织标本的采集与制备：麻醉大鼠，固定于蛙板上，剖腹，取出肾周脂肪组织，一部分置于多聚甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋，用于免疫组织化学染色分析。余脂肪组织用生理盐水和0.1% 焦碳酸二乙脂水冲洗后，置于液氮中保存，用于做rt-pcr检测。

1.3.3 免疫组织化学染色结果判断及半定量测量方法：以免疫组化方法检测脂肪组织脂联素蛋白的表达，阳性结果为细胞浆染成棕黄色。显微镜显影系统采集图像。计算机自动测量并计算阳性信号积分光密度（a值）。

1.3.4 rt-pcr方法检测脂肪组织脂联素 mrna表达：（1）引物设计脂联素：上游：5′-tcactcagcattcagcgtag-3′；下游：5′-ctgatactggtcgtaggtgaag-3′，扩增片段长度为238bp。pcr反应条件为94℃预变性，5min；变性：94℃，30sec；退火：56℃，30sec；延伸：72℃，1min；25反应循环，72℃，10min终止反应，4℃冷却；（2）β-actin：上游：5＇-cgt tga cat ccg taa aga c-3＇，下游5＇-tgg aag gtg gac agt gag -3＇，扩增片段长度为201bp。pcr反应条件与同管扩增目的基因条件相同。pcr扩增产物-20℃保存，备用于琼脂糖凝胶电泳，照相及图象半定量分析。

1.4 统计方法 应用spss 10.0 软件进行统计学处理，计量资料用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用方差分析（anova）和q检验，p<0.05 为差异有显著性。

2 结 果

2.1 五组大鼠一般资料比较

2.1.1 实验前(22周龄)五组大鼠一般资料比较：五组大鼠体重(bw)无显著性差异(p>0.05)。shr组与fos组，lo组及fos＋lo组收缩压无显著性差异(p>0.05)，shr组和fos组，lo组及fos＋lo组收缩压，upro，nag酶均明显高于wky组(p均＜0.05)，见表1。 表1 实验前五组大鼠一般资料比较 注：与魏凯氏组比较p<0.05；fos组，lo组和fos+lo组三组比较无显著差异。

2.1.2 实验第8周(30周鼠龄龄)五组大鼠的一般资料比较：shr组收缩压，upro，scr和nag酶水平明显高于wky组 (p均＜0.05)，而fos组，lo组及fos＋lo组收缩压，bun，scr与wky组比较无显著性差异(p>0.05)；fos组，lo组及fos＋lo组三组间血压，upro，scr，bun和nag酶水平比较无显著性差异(p>0.05)；fos组，lo组及fos＋lo组收缩压，upro，scr和nag酶水平明显低于shr组 (p均＜0.05)，见表2。

2.2 五组大鼠脂肪组织脂联素蛋白免疫组化染色 免疫组化结果显示，脂联素蛋白主要表达在脂肪细胞胞浆中；shr大鼠脂肪组织中脂联素蛋白含量明显低于wky大鼠（p<0.05）；而fos和lo干预后脂肪组织中脂联素蛋白含量明显增加（p<0.05）；但fos组、lo组、fos+lo组脂肪组织中脂联素蛋白含量仍明显低于wky组（p<0.05）；fos组、lo组、fos+lo组三组间脂肪组织脂联素含量无显著差异（p>0.05），见表3。

2.3 五组大鼠脂肪组织脂联素 mrna表达 shr组脂联素 mrna表达较wky组明显降低（p<0.01），fos组，lo组和fos＋lo组脂联素 mrna表达比shr组显著增强（p<0.05），但三组间差异不显著（p>0.05），见图1。五组大鼠脂肪组织脂联素 mrna表达半定量分析结果见表4。 表2 实验第8周五组大鼠血压及肾功能相关指标比较 表3 五组大鼠脂肪组织脂联素蛋白表达半定量分析 注：与wky组比较p<0.05，p<0.01；与shr组比较p<0.05；fos组，lo组和fos+lo组三组比较无显著差异。 表4 五组大鼠脂肪组织脂联素 mrna表达半定量分析 注：与wky组比较p<0.05，p<0.01；与shr组比较p<0.05;fos,lo,fos+lo组三组间比较p>0.05。

3 讨 论

近年研究表明，脂肪组织不仅是一个能量储存器官，而且是一个内分泌器官，分泌许多生物活性物质［如脂联素，肿瘤坏死因子（tnf）-α，纤溶酶原激活剂抑制因子（pai）-1，瘦素、抵抗素等］参与物质代谢。脂联素是由脂肪细胞特异性分泌的脂肪细胞因子，是1995年scherer等[1]首先从鼠的脂肪细胞中分离出来的一种蛋白质。研究已证实脂联素在改善胰岛素敏感性、抗炎以及抗动脉粥样硬化等方面，具有非常重要的作用。脂联素通过促进葡萄糖、脂肪的分解，改善胰岛素敏感性、减低ir，同时具有抗炎、抗动脉粥样硬化的作用。目前脂联素与代谢综合症（ms）的其他组成成分研究已经较成熟，血浆脂联素水平与肥胖症、ir、2型糖尿病、动脉粥样硬化之间存在显著相关性。作为ms的组成成分之一的高血压与脂联素相关性的研究也正在进行中。huang等［2］报道，在68名健康青少年女性中，脂联素与收缩压、舒张压呈显著负相关。adamaczk等［3］报道，原发性高血压患者血浆脂联素水平较正常血压者明显降低，并与收缩压、舒张压、平均动脉压均呈显著负相关。kazumi等［4］报道，在正常青年男性中，与理想血压者相比，血压正常高值者血清脂联素水平降低。朱俐俐等［5］发现老年高血压组和ms组的血清脂联素水平明显低于正常对照组；直线相关分析表明，脂联素水平与血压、upro、体重指数呈负相关。我国学者林泽鹏等［6］研究发现高血压患者用培哚普利及缬沙坦治疗两周后,平均压显著下降，血清脂联素浓度和胰岛素敏感性指数明显升高；原发性高血压患者血清脂联素与收缩压和舒张压呈直线相关；血清脂联素与胰岛素敏感性指数和高密度脂蛋白胆固醇呈直线相关。原发性高血压患者低脂联素血症与脂代谢紊乱和ir密切相关。肾素-血管紧张素系统,可提高原发性高血压患者胰岛素敏感性,从而使血清脂联素浓度升高。本实验首次研究shr脂肪组织脂联素的表达，实验显示高血压模型大鼠脂肪组织脂联素的表达下调，upro和尿nag酶水平升高，提示高血压模型大鼠出现早期肾损害。但经肾素-血管紧张素系统阻滞剂福辛普利和肾素-血管紧张素系统受体拮抗剂氯沙坦干预后高血压模型大鼠血压得到控制，upro和尿nag酶水平下降，肾功能明显改善，脂联素的表达上调，现有的研究已证实脂联素在改善胰岛素敏感性、抗炎以及抗动脉粥样硬化等方面有着重要的作用。脂联素有抗ir的作用，同时脂联素通过减弱生长因子诱导的平滑肌细胞的dna合成，并抑制生长因子刺激的平滑肌细胞的增殖和迁移；脂联素可以抑制巨嗜细胞转化为泡沫细胞，而改善和抑制动脉粥样硬化的形成；脂联素还可以抑制tnf-α在动脉内皮细胞诱导的粘附分子的表达，从而抑制单核细胞向动脉内皮细胞的粘附和对内皮细胞的损伤。高血压肾损害主要是由于肾动脉硬化，纤维化所致，福辛普利和氯沙坦降低血压同时上调脂联素的表达，改善ir，能降低upro和尿nag酶水平，对高血压所导致的肾动脉硬化和肾动脉纤维化有改善作用。 本课题研究结果为进一步研究脂联素在高血压发病中的作用和高血压靶器官——肾损害的治疗提供了新的思路和方法。

【参考文献】

[1]scherer pe,willians s,fogliano m,et al.a novel serum protein similar to c1q,produced exclusively in adpocytes［j］.j biol chem,1995,270:26746-26749.

［2］huang kc,chen cl,chuang lm,et al.plasma adiponectin levels and blood pressures in nondiabetic adolescent females［j］.j clin endocrinol metab，2003,88:4130-4134.

［3］adamczak m，wiecek a，funahashi t，et al.decreased plasma adiponectin concentration in patients with essential hypertension［j］.am j hypertens，2003，16(1)：72-75.

［4］kazumi t，kawaguchi a，sakai k，et al.young men with high|normal blood pressure have lower serum adiponectin,smaller ldl|size,and higher elevated heart rate than those with optimal blood pressure［j］.diabetes care,2002，25：97l-976.

［5］朱俐俐，周巧玲，孙 明.老年高血压和代谢综合症血清脂联素水平变化及其意义［j］.心血管康复医学杂志,2007，16（5）:461-464.

［6］林泽鹏，徐明星，方卫华.原发性高血压患者血清脂联素浓度的变化及肾素-血管紧张素系统对其影响［j］.中国循环杂志,2004，19(3)：205-208.