复方生物黄酮的致突变实验研究

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作者：王舒然1，谢友祥2，栗新年3

【摘要】 目的 为了研究复方生物黄酮（圣安泰牌百力康片）的潜在致突变性。方法 我们对该产品进行了Ames实验、小鼠骨髓细胞微核实验和小鼠畸形实验。结果 Ames实验，小鼠骨髓细胞微核实验，小鼠畸形实验等结果均为阴性，均未见毒性改变。结论 复方生物黄酮在服用剂量内未见致突变性。

【关键词】 复方生物黄酮；Ames实验；小鼠骨髓细胞微核实验；小鼠畸形实验

【Abstract】 In order to study the potential mutation genesis of compound flavine， we have performed Ames tests， rat marrow osteocyte micronuclear tests and rat sperm deformation tests. The results are all negative， no toxic changes have been observed. It is concluded that no mutation genesis effects of compound bio-flavine have been discovered in feeding dosage.

【Key words】 compound bio-flavine；Ames tests；rat marrow osteocyte micronuclear tests；rat sperm deformation tests

随着生命科学的不断发展，人们对生物黄酮有了广泛的研究，发现黄酮类化合物具有良好的抗氧化性能［1］和清除自由基的能力［2］；具有抗肿瘤作用［3］；植物雌激素样作用；减少体内胆固醇的合成，降糖作用［4］和降低血清胆固醇浓度和对心脑血管的保护作用［5］；对细胞免疫功能和非特异性免疫功能均有提高作用。生物黄酮的种类众多，其来源不同，所发挥的生物活性也不同。根据传统中医理论以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成的复方生物黄酮，可以更好的发挥黄酮的提高免疫作用，尽管这些主要原料均来源于“既食又药”的物质，但是关于复方成分的致突变性研究较少。为了研究复方生物黄酮（圣安泰牌百力康片）可能对人体造成的潜在致突变性，我们对该产品进行了Ames实验、小鼠骨髓微核实验和小鼠畸形实验，以期为今后开发利用我国“既食又药”的医药宝库提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 样品 复方生物黄酮的商品名称为圣安泰牌百力康片，由哈尔滨圣安泰生物科技有限公司提供。样品以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成，功效成分为总黄酮。

1.2 材料 昆明种小白鼠（批准证号：医动字第09-2-7号），购自黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心。TA97a、TA98、TA100和TA102四种菌株引自美国加州大学Ames实验室。

1.3 方法

1.3.1 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验（Ames实验） TA97a、TA98、TA100和TA102　四种菌株引自美国加州大学Ames实验室。经菌株特性鉴定均符合实验要求。活化系统为PCB-五氯诱导的雄性Wistar大鼠肝s-9液。按1：9加入辅助因子（Ames　1983年配方）配成10％　s-9混合液，经阳性诱变剂活性鉴定符合实验要求。实验样品经XAD-11树脂柱过滤及洗脱预处理，最后以DMSO为溶剂，剂量设计分别为5mg/皿、1mg/皿、0.2mg/皿、0.04mg/皿和0.008mg/皿受试物。除上述5个剂量组外，又设未处理对照组、溶剂对照组（DMSO）和阳性对照组［加s-9用2-AF（TA102用1，8-二羟蒽醌），不加s-9用DEXON（TA100用叠氮钠）］。采用平板渗入法进行实验。在保温的顶层培养基中依次加入测试菌株新鲜增菌液0.1ml，混匀；加受试物或对照物0.1ml［需活化时加入10％　s-9混合液0.5ml（含s-9　5μl）］，再混匀，迅速倾入底层培养基上，转动平皿使顶层培养基均匀分布在底层上，平放固化，37℃培养48h观察结果。每个剂量平行做了3皿，并重复一次，最后以3皿平均值报告实验结果。

1.3.2 小鼠骨髓细胞微核实验 昆明种小白鼠，体重25～30g，共50只，在本实验室适应环境7天后，随机分成5组，每组10只，雌雄各半。高剂量组剂量为10g/kg bw；中剂量组为5g/kg Bw；低剂量组为2.5g/kg bw；阴性对照组经口灌胃蒸馏水；阳性对照组灌胃给予环磷酰胺，剂量为40.0mg/kg bw。按20ml/kg bw灌胃容积进行灌胃。采用30h给受试物法，即二次给受试物间隔24h，第二次给受试物后6h颈椎脱臼处死小鼠，取股骨，常规制片。显微镜双盲法阅片，每只小鼠观察1000个嗜多染红细胞（PCE），记录有微核的嗜多染红细胞数，计算出微核率。每只动物计数200个嗜多染红细胞，观察嗜多染红细胞与成熟红细胞比值。

1.3.3 小鼠畸形实验 昆明种小白鼠25只，体重25～30g；随机分成5组，每组5只。设3个剂量组，剂量设计同小鼠骨髓微核实验，即高剂量组为10g/kg bw，中剂量组为5g/kg bw，低剂量组为2.5g/kg bw。阴性对照组给予蒸馏水，阳性对照组给予环磷酰胺，剂量为40mg/kg bw。所有各组均按20ml/kg bw容积灌胃，每日1次，连续5天。各组动物均于首次投入检样后35天处死。按常规方法制片，固定，2％伊红溶液染色，每只小鼠镜检1000个完整，计算畸形率。

2 结果

2.1 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验（Ames实验） 圣安泰牌百力康片二次Ames实验结果见表1和表2。

表1 圣安泰牌百力康片第一次Ames实验结果 (x±s)

注：以上结果为3皿回变菌落数的平均值

表2 圣安泰牌百力康片第二次Ames实验结果 （x±s）

注：以上结果为3皿回变菌落数的平均值

实验结果表明，受检样品对Ames各实验菌株在加与不加活化系统条件下均呈阴性结果，即鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验为突变阴性结果。

2.2 小鼠骨髓细胞微核实验 圣安泰牌百力康片的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验结果见表3。 表3 圣安泰牌百力康片小鼠骨髓细胞微核实验结果

注：与阴性对照组相比**P<0.01

对实验结果进行泊松分布检验，结果两个性别小鼠除阳性对照组外，各剂量组微核率与阴性对照组相比均无统计学差异（P>0.05），亦无剂量效应关系，说明受试物小鼠骨髓细胞微核实验为阴性结果。此外，各组动物PCE/RBC值经方差分析差异无显著性，说明各组动物均未见到细胞毒性作用。

2.3 小鼠畸形实验 圣安泰牌百力康片的小鼠畸形实验结果见表4。

表4 圣安泰牌百力康片对小鼠畸形发生率的影响

注：与阴性对照组相比**P<0.01

从表4可见，各组小鼠均可见到一定数量的畸形，除阳性对照组外各实验组小鼠的畸形与阴性对照组相比，均没有超过2倍，且无剂量效应关系，亦无统计学意义，说明受试物对小鼠畸形发生率无影响。

3 讨论

复方生物黄酮的主要来源为枸杞、银杏叶和黄芪。研究证实这几种成分未见致突变毒性结果。枸杞的Ames实验（TA97、TA98、TA100、TA1024个菌株）结果为无论加S9与不加S9回变菌落数均未超过空白对照的两倍。雌性和雄性动物的微核率分别为1.6‰与1.2‰，与阴性对照组微核率相比，差异不显著。小鼠畸形实验畸形率均在正常范围内，与阴性对照组畸形率相比，差异无统计学意义［6］。对银杏叶的遗传毒性实验研究也未见致突变作用［7］，目前尚未见黄芪的突变性研究。本文在急性毒性实验的基础上进行了复方生物黄酮的Ames实验、小鼠畸形实验和小鼠畸形实验，结果表明复方生物黄酮对Ames各实验菌株在加与不加活化系统条件下均呈阴性结果。各剂量组微核率与阴性对照组相比均无统计学差异（P>0.05），亦无剂量效应关系，说明受试物小鼠骨髓细胞微核实验为阴性结果。各组小鼠均可见到一定数量的畸形，除阳性对照组外，各实验组小鼠的畸形与阴性对照组相比，均没有超过2倍，且无剂量效应关系，亦无统计学意义，说明受试物对小鼠畸形发生率无影响。总之，本研究结果说明实验剂量的复方生物黄酮没有致突变性。

【参考文献】

1 姚平，刘烈刚，贾文波，等.银杏黄酮对小鼠急性酒精摄入后抗氧化系统的影响.卫生研究，2005，34（3）：303-306.

2 彭珊珊，于化泓，赵哲霞.具有抗氧化效果的植物性食品.食品科技，2005，1：44-48.

3 杜凤英.植物雌激素抗癌作用的研究进展.预防医学情报杂志，2005，21（2）：153-155 .

4 曹群华，瞿伟菁，牛伟，等.沙棘黄酮对链脲佐菌素致糖尿病大鼠降糖作用.营养学报，2005，27（2）：151-154.

5 朱旭贞.杏丁治疗急性脑梗死50例疗效观察.现代中西医结合杂志，2005，14(9)：1169.

6 穆冰，刘晓峰，熊进，等.枸杞多糖的急性毒性及致突变性.环境与职业医学，2002，19（3）201-202.

7 张卫明，顾龚平，史劲松.银杏叶食用安全性的毒理学评价.南京师大学报(自然科学版)，2005，28（1）：80-83.