加味宫外孕Ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞的影响

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摘要：目的 探讨中药加味宫外孕Ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞的影响，进一步探索中药的杀胚作用和作用机理。方法 将55只造模成功的早孕大鼠随机分为6组：西药组、中西药结合组和中药低、中、高剂量组、空白组，分别予以连续给药7d（西药组肌注甲氨蝶呤，中西药结合组肌注甲氨蝶呤和加味宫外孕Ⅱ号方中剂量中药灌胃，中药低、中、高剂量组分别予加味宫外孕Ⅱ号方低、中、高剂量灌胃，空白组予生理盐水灌胃），第8d处死大鼠，取出子宫及孕囊行光镜及电镜检测。结果 用药后各组与空白组比较，滋养细胞组织形态及超微结构均有不同程度的病理学改变，中药低、中剂量组及西药组滋养细胞排列紊乱，有炎性细胞浸润，胚囊正常形态被破坏，线粒体肿胀；高剂量组及结合组滋养细胞及胚囊正常形态完全消失，无或少量坏死组织残留，线粒体出现空泡化。结论 加味宫外孕Ⅱ号方可能通过改变滋养细胞的组织形态及超微结构，影响滋养细胞的数量、形态、分泌、合成等生理代谢功能，从而起到杀胚作用，其中变化表现最明显的是中药高剂量组，说明随着中药浓度的增大，滋养细胞破坏更明显。

关键词：加味宫外孕Ⅱ号方；早孕大鼠；滋养细胞

目前在临床上异位妊娠的保守治疗主要以中西医结合治疗为主，西药杀胚的机理明确，而关于活血消杀胚中药的机理研究则很少见，其机理尚不明确。目前未找到有关异位妊娠动物模型的建立方法，由于异位妊娠早期与早期宫内妊娠相似，因此，我们以早孕大鼠作实验模型，通过观察加味宫外孕Ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞组织形态及超微结构的影响的实验研究，进一步探索中药的杀胚作用和作用机理，间接为中医药保守治疗异位妊娠提供新的理论依据。

1资料与方法

1.1一般资料 SD 大鼠共110只，雄性30只，体重（280±10）g，雌性80只，体重（250±10）g，由重庆第三军医大学医学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK（渝）2012-0005。

1.2仪器 OLMPUS光学显微镜，日立H-600型透射电镜，包埋机，石蜡切片机，脱水机，摊片机，烤片机（美国LEICA）。

1.3药物 加味宫外孕Ⅱ号方：丹参15 g，桃仁9 g，赤芍15 g，莪术9 g，三棱9 g，全蝎10 g，地鳖虫10 g，蜈蚣9 g，紫草25 g，由贵阳中医学院第一附属医院中药制剂室通过水煎、过滤、浓缩制成每毫升含生药6 g、3 g、1.5 g三种不同剂量（即：高剂量、中剂量、低剂量）的药液；分装密封，于4度冰箱保存备用；甲氨喋呤5 mg/支 （山西普德药业有限公司生产）。

1.4方法

1.4.1动物造模 造模方法参照徐叔云《药理实验方法学》[1]：将动情期雌鼠共69只与雄鼠按1∶1比例合笼过夜，次晨将发现阴栓或行阴道涂片发现者定为妊娠的第 1 d。为避免假孕大鼠对实验准确性产生影响，参照文献[2]后本实验在第5 d起连续对成功的大鼠行阴道脱落细胞检查，共检查3 d，剔除成功而未受孕的大鼠14只。

1.4.2分组及给药 将造模成功的55只孕鼠随机分为6组：西药组、中西药结合组和中药低、中、高剂量组、空白组。西药组在妊娠第1 d一次性肌注甲氨蝶呤7.775 mg/Kg体重，一次为一疗程，同时予生理盐水7.77 mL/Kg体重灌胃1次/d；中西药结合组于妊娠第1 d起予加味宫外孕Ⅱ号方煎剂按7.77 mL/Kg体重（每毫升含生药3 g）灌胃1次/d，同时在妊娠第1 d一次性肌注甲氨蝶呤7.775 mL/Kg体重；中药高、中、低剂量组分别在妊娠第1 d予相应剂量的加味宫外孕Ⅱ号方煎剂按7.77 mL/Kg体重灌胃，1次/d，空白组予等量生理盐水灌胃；各组均连续灌胃7 d。

1.4.3标本制备及检测 用药后第7日晚8点起禁食水，于12 h后处死大鼠，剖腹取出大鼠子宫及孕囊，平均分成两份，一份浸入4%多聚甲醛液中固定24 h，再进行常规石蜡包埋、切片、HE染色，行光镜下观察。另一份切取1 mm2大小组织块用2.5% 的戊二醛液固定，置于4℃冰箱内固定24 h，再按照电镜常规标本制作，于透射电镜下观察滋养细胞的超微结构。

2结果

2.1光镜检测 空白组滋养细胞发育良好，细胞间隙紧密、排列整齐、体积大、扁平，胚囊完整；西药组滋养细胞间隙不清、排列紊乱，大量炎性细胞浸润，胚囊正常形态破坏；中西药结合组滋养细胞及胚囊正常形态完全消失，无或少量坏死组织残留；中药中剂量组滋养细胞间隙增大、排列紊乱，炎性细胞浸润，胚囊正常形态被破坏；低剂量组滋养细胞间隙增大、排列紊乱、少量炎性细胞浸润，胚囊正常形态破坏；高剂量组滋养细胞及胚囊正常形态完全消失，大量炎症细胞浸润，无或少量坏死组织残留，见图1。

2.2电镜检测 空白组可见到清晰的核膜及核仁，均匀的染色质（常染色质）散布于核质内；西药组细胞核呈椭圆形，异染色质边集，线粒体肿胀；结合组细胞与细胞的间隙明显增宽，细胞核的核浆致密，内含边集，呈团块状的异染色质，线粒体出现空泡化；中药中剂量组细胞核形状不规则，异染色质增多，线粒体肿胀；低剂量组线粒体肿胀；高剂量组整个细胞肿胀，线粒体肿胀，脊断裂或消失，见图2。

3讨论

异位妊娠（ectopic pregnancy ，EP）是妇产科的常见病，严重威胁育龄妇女生命安全并影响生殖功能，目前在临床上异位妊娠的保守治疗主要以中西医结合治疗为主。中医学认为血瘀和气虚导致胎元阻络是本病的病因病机，主要证候是少腹血瘀之实证，以活血化瘀，消杀胚为治法，运用活血化瘀消中药。本实验所用加味宫外孕Ⅱ号方是在宫外孕Ⅱ号方的基础上加蜈蚣、全蝎、土鳖虫、紫草。方中丹参、赤芍、桃仁、三棱、莪术有活血化瘀、消徵散结的作用；蜈蚣、全蝎、土鳖虫、紫草有破血、杀胚的作用。全方以活血化瘀，杀胚消徵为治法，改善胎元阻络，气血运行不畅现状，达到杀胚消徵，通畅气血经络之功效。

滋养细胞（trophoblast cel1）是胎盘组织的主要功能细胞，在正常妊娠过程中具有类似肿瘤的浸润能力，有利于母胎间的营养供给[3]。本实验专注于对滋养细胞的组织形态学及超微结构研究，以此佐证加味宫外孕Ⅱ号方的杀胚作用。从实验结果可以看出，应用西药及杀胚中药后滋养细胞的组织形态及超微结构较空白组均产生不同程度的影响，中药低、中剂量组及西药组滋养细胞排列紊乱，有炎性细胞浸润，胚囊正常形态被破坏，线粒体肿胀；高剂量组及结合组滋养细胞及胚囊正常形态完全消失，无或少量坏死组织残留，线粒体出现空泡化，不同剂量的加味宫外孕Ⅱ号方均能改变滋养细胞的超微结构，特别体现在线粒体上，因线粒体是能量代谢的场地，由此笔者推测加味宫外孕Ⅱ号方可能通过细胞内线粒体的结构破坏而使线粒体合成的ATP量变少，导致细胞功能障碍，并促使炎症细胞浸润，影响滋养细胞的正常生理代谢过程，促进细胞凋亡或坏死，不能为胚胎提供营养支持，从而起到杀胚作用。且随着中药浓度的增大，滋养细胞破坏更明显，杀胚作用更强。但高剂量的中药是否会加重药物的副作用有待今后进一步深入研究，从而指导临床用药。

参考文献：

[1]徐淑云，卞职濂，陈修，等.药理实验方法学[M].2版.北京：人民卫生出版社，1991：1313-1314.

[2]赵春梅，郑文兰.阴道脱落细胞检查对确定大鼠妊娠价值的探讨[J].内蒙古中医药，2013，32（2）：31-32.

[3]Harris LK，Review：trophoblast-cascular cell interactions in early pregnancy：how to remodel a vesse[J].Placenta，2010，31：93-98.