家鸽铸型透明塑化标本的制作

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摘要：目的 展示家鸽的呼吸系统（气管、肺、气囊）及全身骨标本的制作技术。方法 探讨了将铸型、透明、简易塑化技术结合起来。结果 制作结果满意。结论 利用铸型、透明、简易塑化技术制作的家鸽标本，兼有3种技术之长，为家鸽标本。

关键词：标本；铸型；透明；塑化

在解剖学的比较科研项目中，需要展示各类脊椎动物的呼吸系统，而鸟类的呼吸系统极为特殊，为便于观察鸟类的呼吸系统，展现鸟类与人类等呼吸系统的不同，采用铸型、透明、简易塑化三者相结合的技术，制作出鸟的呼吸系统、全身骨的标本，制作过程如下。

1药品与器材

1.1药品 95%酒精、无水酒精、氢氧化钾、双氧水、甘油、自凝牙托水、自凝牙托粉、邻苯二甲酸二丁酯、绿色油画颜料、茜素红、吡咯烷酮（PVP K30）、麝香草酚。

1.2器材 棉线、100 mL一次性注射器、手术刀、镊子、量筒、大容量烧杯、干燥箱（自然通风可不备）、玻璃棒、天平、台秤。

2实验过程

2.1计算铸型灌注材料的用量 先对家鸽编号，称量家鸽体重并记录。然后计算家鸽体重总和，将体重数据乘以17%（可依据气囊体积17 mL/体重100 g计算）再除以75%（配制灌注材料时会自然损耗25%），所得数据即为此次试验所需铸型灌注材料的体积总量[1]。

2.2家鸽肺和气囊的灌注

2.2.1配制铸型材料 依据前面计算铸型灌注材料的总量，配置的比例为：自凝牙托粉75 g，自凝牙托水100 mL，邻苯二甲酸二丁酯44 mL[2]，配置方法：将少量的绿色油画颜料、邻苯二甲酸二丁酯加入自凝牙托水混合均匀，加入适量的自凝牙托粉充分搅拌即可。配置时应稍多勿少，略有剩余，且随时配制随时使用。

2.2.2灌注铸型材料 选择30d龄雄性幼鸽，处死排血后，小心拔除上颈部、腹部侧面的羽毛，切开上颈部皮肤，分离出气管，用一次性注射器吸取适量自凝牙托材料，将针头穿入气管，用棉线结扎气管。将自凝牙托材料注入气管，如腹部出现颜色，则表明灌注液已进入腹部的气囊，如阻力加大，停止注射，提起家鸽头部，鸽体下垂，拍打并震动鸽体再行注射，直至腹部颜色范围不再扩大，充满为止，整个灌注过程不可大力、过量、不然会导致气囊壁破裂。灌注完成后，棉线结扎气管，待灌注材料固化变硬后，再灌注余下气管。灌注完成，清除口腔、鼻孔多余灌注材料，转入下一步骤。

2.3透明标本 由于家鸽肌肉发达，采用氢氧化钾溶液和甘油2次透明法，具体过程如下。

2.3.1固定 灌注材料固化后，除去标本羽毛、皮肤、脑、眼、食管、嗉囊，在肛前开口，小心去除内脏，不要触及肺和气囊，然后浸入95%酒精溶液中，固定5～7 d，更换固定液1次/2 d，至标本充分硬化固定，乙醇还可起到脱脂作用，然后浸入清水中除去乙醇。

2.3.2漂白 用质量分数3%的过氧化氢溶液浸泡固定后的标本数天，期间标本要经常翻动，刮除趾部的皮肤，肌肉呈现乳白色时，即可停止漂白。

2.3.3初次透明 在肌肉发达处，用针刺形成密集孔道，同时注射5%的氢氧化钾溶液，将上述处理过的标本，放入1%的氢氧化钾溶液中浸泡数天，待肌肉半透明隐约可见骨骼时，透明完成。期间可更换透明液，可加速透明进程，也可使组织疏松，利于后续步骤各试剂的渗透。

2.3.4染色 茜素红染色剂配制方法：在质量分数95%的酒精中加入茜素红，配制成饱和溶液，此饱和溶液可长期存放备用，取一份（体积）饱和溶液与9份（体积）70%的酒精混合，配制成稀释溶液，然后取一份（体积）稀释溶液，加入等份（体积）2%氢氧化钾溶液，即配制成染色剂[2]。将标本放入染色剂中进行染色，至骨骼变为紫红色，即可停止染色。

2.3.5脱色 先用水洗去表面浮色，取1%的氢氧化钾溶液一份（体积）与质量分数50%甘油溶液一份（体积）配制成混合溶液，将标本放入混合溶液中，直至肌肉颜色退为淡红色为止。

2.3.6再次透明 将标本依次浸入40%、50%、60%、80%的甘油各2d，然后浸入纯甘油中，直至肌肉无色透明，突显出铸型的气管、气囊、肺和骨骼即可。如果肌肉发达透明效果不好，可往此处注射纯甘油，使其透明。

2.4塑化保存 塑化剂选用聚乙烯吡咯烷酮，简称PVP，是一种高分子水溶性化合物，塑化剂选用黏着性适中，水溶液为酸性的PVPK30。

2.4.1 PVP溶液配制 PVPK30塑化剂的配制方法：先配制质量分数0.5%的氢氧化钾溶液作为母液，然后配制麝香草酚无水酒精溶液，并加入母液中，使母液中麝香草酚质量分数约为2%，将母液加热到60℃，向母液加入适量聚乙烯比咯烷酮，分别制成25%和50%的PVP液。

2.4.2塑化 使用浓度梯度脱水塑化法塑化标本。此法操作简单，需要设备少，但塑化剂用量大，时间较长。将透明好的标本依次浸没入25%的PVP溶液浸泡5～7 d，再转入50%的PVP溶液浸泡5～7 d[3]。

2.4.3干燥、保存 将标本整形后，既可以选用自然通风干燥，也可将温度控制在25℃，在干燥箱中对流干燥。干燥完成后，再将制作好的标本放入有机玻璃盒或标本瓶中，密闭保存，同时可在其中放少量干燥剂。

3讨论

在制作标本过程中，应注意以下几方面：①为使铸型完整、饱满，要使用新鲜幼体（约30 d内）；②为使透明效果明显，必须对标本排血；③灌注材料选用改良的自凝牙托材料，因为其配制简单，便于操作，灌注后收缩率小，无需补注，一次成型；④从处死到铸型灌注，时间越短灌注效果越好；⑤经酒精防腐处理后，用茜素红染色效果优于用甲醛防腐固定。漂白可使透明效果更佳。使用氢氧化钾溶液时，浓度宜小不宜大，以免标本的骨骼离散，在塑化标本时加入少量麝香草酚，可使保存效果更佳。

总之，利用铸型、透明、简易塑化技术制作的家鸽标本，兼有3种技术之长，也为今后制作人体器官标本开辟了一条新路。

参考文献：

[1]刘代成，邹鹏.介绍一种家鸽肺和气囊铸型标本的制作方法[J].山东师范大学学报：自然科学版，1992，7（1）：117-119.

[2]杨成杰，石瑾，李中华.解剖学特殊标本制作技术[M].香港：银河出版社，2004：96.

[3]董代辉，唐安科.聚乙烯吡咯烷酮制作鱼类透明骨骼标本的研究[J].生物学通报，2010，45（1）：45.编辑/肖慧