正交试验优选消斑祛瘀片的提取工艺

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摘要：目的 优选消斑祛瘀片的提取工艺。方法 采用正交试验对提取工艺进行优选，以丹酚酸B、阿魏酸、干膏量为指标考察加水量、提取次数、加水倍数对提取工艺的影响最终确定当归、丹参、白鲜皮、地肤子、苍耳子等最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为加10倍量水，提取90min，提取2次。结论 为提取工艺的确定和下一步的研制工作提供了科学依据。

关键词：正交试验；提取工艺；优选

Abstract：Objective Optimization study on extraction technology of xiaoban quyu tablets. Methods Using the orthogonal experiment， optimization study on extraction technology， Dan phenolic acids B， ferulic acid and dry paste volume as index to investigation water added， extraction times， adding water multiples of extraction technology and finally determined angelica， salvia miltiorrhiza， cortex dictamni， kochia scoparia， fructus xanthii etc best water extraction process. Results The best extraction process is add 10 times water quantity， extraction 90min， extraction 2 times. Conclusion Offer scientific basis for extraction process and the next research work.

Key words：Orthogonal test； Extraction process； Optimization

消斑祛瘀片由老中医验方演变而来， 传统医学认为皮肤色斑是因肝肾不足、肝郁化火、脾胃虚弱，气血不能上荣于面，火燥精滞而成，治疗多以疏肝解郁、补肾、活血、健脾益气为主，本方从肝下手，五脏共调，临床上疗效确切。

1 试验材料与仪器

1.1仪器 高效液相色谱仪；二极管阵列检测器、柱温箱，色谱工作站，分析天平。

1.2试药 丹酚酸B（808-9301）对照品、阿魏酸（110773-201411）对照品。所用乙腈、甲醇为色谱纯，水为自制纯水，其他为分析纯。

2 方法与结果

2.1提取工艺的正交试验设计 当归、丹参、白鲜皮、地肤子、苍耳子等以水回流提取，采用正交试验考察加水量（A）提取时间（B）和提取次数（C）。正交表见表1。

2.2丹酚酸B、阿魏酸的含量测定方法

2.2.1色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq（4.6mm×250mm，5μm）；加Agilent SB-Aq C18保护柱（1.0mm×20mm，5μm），流动相乙腈-甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱（洗脱程序见表2），检测波长316nm，流速1ml/min，柱温：35℃，进样量：20μl，系统适应性试验见图1，保留时间阿魏酸为23min，丹酚酸B为36min。

图1 A 混合对照品HPLC色谱图 B 样品HPLC色谱图

2.2.2线性关系考察 分别精密的量取上述混合标准品溶液4、8、12、16、20、30μl注入高效液相色谱仪，照已确定的色谱条件进行测定，记录色谱峰面积，绘制标准曲线，按照峰面积的积分值（Y）对进样量（X）采用线性回归，计算后回归方程分别为丹酚酸B Y=1158593.4255X-64756.7089，r=0.9996，线性范围0.90～6.72μg。阿魏酸Y=5253182.5779X-16651.9231，r=0.9998，线性范围0.04～0.30μg。

2.2.3供试品溶液制备 药材的称取严格按处方的比例，共9份，同时按照表1中正交表的加水回流提取，滤过，合并滤液，备用。然后精密量取上述溶液适量并置水浴蒸干，转移到10ml容量瓶，甲醇定容，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3方法学考察

2.3.1精密度试验 取丹酚酸B、阿魏酸对照品溶液，按照各自液相方法重复进样6次，20μl/次，测定峰面积，得出RSD分别为0.56%、1.25%，表明仪器精密度良好。

2.3.2稳定性试验 供试品溶液分别于0、1、2、4、8h各进样一次，20μl/次，测定峰面积，得出RSD分别为0.38%、0.45%，表明供试品溶液在8h内稳定。

2.3.3重复性试验 供试品溶液6份，分别按照色谱条件进行测定， RSD分别为0.38%、0.45%，表明方法重复性良好。

2.3.4加样回收试验 已知含量的供试品溶液取3份，分别精密加入丹酚酸B和阿魏酸对照品溶液按“2.2.3”项方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，计算的丹酚酸B平均回收率为100.1%，RSD为1.85%，阿魏酸平均回收率为98.5%，RSD为2.25%。

2.4干膏量的测定 精密吸取水提浓缩液50ml，用80%乙醇醇沉，取上清液置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，干燥恒重，称定重量，计算干膏量。

2.5结果 正交试验安排及结果见表3，结果分析见表4。

根据本方配伍规律，确定以上指标的优先顺序为：丹酚酸B>阿魏酸>干膏量。首先指标性成分比干膏量重要的多，丹酚酸B为君药成分，重要性大于臣药，记5分，阿魏酸记3分，干膏量记2分，总分10分。

3验证试验

按处方量称取药材3份，按选定的最佳提取工艺提取，测定各指标成分含量，表5。

4 讨论

从以上试验结果来看，第8组综合得分最高。近年来中药复方提取的研究很多，关键是如何选择优选指标，以及对所选指标的评价，选择君臣药为主要考察指标，又加入水提醇沉干膏量这一指标，兼备中药复方成分多复杂的特点，更合理有效的反映提取效果，为今后科研提供了一定参考。

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