人类免疫缺陷病毒耐药检测研究进展
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[摘要] 艾滋病抗病毒治疗对于病毒抑制和患者生存意义重大，但病毒耐药问题的出现已成为治疗的严重威胁，不仅会导致个体治疗的失败，也会引发耐药毒株的传播风险，因此开展耐药检测工作十分必要。本文对耐药检测的意义、方法和应用研究最新进展加以综述，从临床和公共卫生的角度为进一步加强耐药检测工作，更有效的降低耐药的发生、传播和流行提供参考依据。
[中图分类号] R512.91 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）19-30-04
[Abstract] Antiviral therapy of acquired immunodeficiency syndrome （AIDs） is of great importance for virus inhibition and the survival of patients， but drug resistance of virus has been recognized as a serious threat to treatment， leading to failure of individual treatment and spreading risk of the drug resistant strains. Thus， drug resistance detection is very necessary. This paper generalizes the latest progress of significance， methods and applicative research of drug resistance to provide clinical and public health references for the further improvement of drug resistance detection and further reduction of occurrence， spreading and prevalence of drug resistance.
[Key words] Acquired immunodeficiency syndrome； Human immunodeficiency virus； Drug resistance detection
近年来艾滋病抗病毒治疗工作呈现全球性的迅速发展，接受有效的抗病毒治疗对于抑制病毒复制，降低发病率和死亡率，提高生命质量具有重要意义。但目前人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）耐药已成为抗病毒治疗的重要问题，不仅会影响个体自身治疗，并且会引起耐药毒株传播流行的社会风险。面对HIV耐药现状，开展耐药检测不仅能够指导评估、选择和优化调整临床治疗方案，还能够为分析耐药毒株的流行状况、有效制定公共卫生防治策略提供科学依据。
1 HIV耐药现状
用于艾滋病治疗的抗病毒药物现已发展至6大类[1]，而治疗方案也发展为不同分子靶点的多种药物联合作用，但是耐药的出现严重影响治疗效果，并且随着抗病毒治疗的推广普及，HIV耐药在全球已呈广泛流行趋势。Pham等[2]在2014年的一项系统性研究中指出，2009～2013年中/低收入国家高危人群的耐药率较2004 ～ 2008年升高了近一倍，形势非常严峻。更值得重视的是，耐药的发生不止针对一线药物，随着新的抗病毒药物及治疗方案的应用，新的耐药突变也在不断出现，当前HIV耐药已经成为导致抗病毒治疗失败的主要因素[3]。
HIV耐药是指HIV在通常能够抑制其复制的药物存在情况下复制的能力[4]，病毒逆转录酶缺乏校正功能，复制过程中存在高频错误倾向（约3×10-5 突变/碱基/复制周期）[5]，而病毒高速复制的特点加速了感染进程中病毒突变的积累，在机体自身免疫和抗病毒药物的选择压力下筛选出耐药优势株。如果患者服药依从性低引起血药浓度波动，会增加发生耐药的危险，对云南德宏州艾滋病患者接受抗病毒治疗后耐药突变情况的研究发现[6]，在353例成功进行耐药相关基因位点突变检测的患者中，有198例（56.1%）发现耐药基因突变。HIV耐药不但会影响患者自身治疗效果，更会引起耐药毒株流行的公共卫生问题。如杨洪等[7]报道2011年我国凉山州未治疗人群原发耐药率为5.43%（7/129），达到中度流行状态。因此有效开展HIV耐药检测对于指导个体治疗和防控HIV耐药传播都具有十分重要的意义。
2 HIV耐药检测方法
2.1 表型耐药检测
表型耐药检测原理是通过检测在体外不同浓度抗病毒药物存在情况下HIV病毒的复制能力，评价病毒对药物的敏感性，结果以所检毒株的50%抑制浓度（50% Inhibitory Concentration，IC50）与作为对照的野生毒株的 IC50的倍数改变来表示[8]，适用于复杂多位点的耐药性突变检测，可以用于评估新的抗病毒药物。
作为传统检测方法，外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）共培养法通过p24抗原定量来计算待测毒株的IC50，实验条件要求严格，对于技术和费用的需求标准较高，同时在培养过程中存在诱导出耐药优势株的风险，应用具有局限性。除PMBC外，还有一些细胞系可作为指示细胞，比如稳定表达CD4、CXCR4和CCR5受体的TZM-b1，并且TZM-b1细胞也可以被假病毒所感染[9]。以重组技术为基础的假病毒表型耐药检测是将扩增的HIV特定区域基因插入载体，用构建的重组病毒进行检测。目前商品化的检测试剂盒主要有：AntivirogramlTM、PhenoSense GTTM和PhenoscriptTM。假病毒表型耐药检测具有较高的安全性，过程相对较为快捷，能够检测病毒载量较低的样本。徐萌等[10]通过构建40株包含患者基因片段的假病毒对6组不同单药和多药进行表型耐药检测，成功定量评估了样本的耐药水平，而杨婧等[11]对比研究了5种药物的真病毒和假病毒表型耐药检测情况，数据表明两种方法一致性较高，仅有对于齐多夫定的一个检测结果存在耐药程度的不同，其结果为假病毒表型耐药检测推广应用的适宜性提供了更多的支持。
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