血清胰蛋白酶原―2、CA199、CA50、CA242在胰腺癌诊断中的应用价值
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[摘要] 目的 分析血清胰蛋白酶原-2、ca199、ca50、ca242在胰腺癌诊断中的应用价值。 方法 选取总医院、石景山医院诊为胰腺癌未经治疗的患者25例，随机选取体检中心健康体检者35例为对照组。入组者均留取血清标本，采用ELISA法半定量检测血清胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242的含量。 结果 血清胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242诊断胰腺癌ROC曲线下面积均>0.5（P
[关键词] 胰腺癌；血清胰蛋白酶原-2；CA199；CA50；CA242
[中图分类号] R735.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）11（a）-0054-04
胰腺癌是一种起病隐匿、进展速度快、预后极差的消化系恶性肿瘤，5年生存率在所有恶性肿瘤中最低，在美国仅为6%左右，即使已行早期根治性手术切除的患者5年生存率也只有24%，但因其起病隐匿，53%的患者发现时已有远处转移，5年生存率仅为0～2%[1]。在胰腺癌早期诊断方法中，肿瘤标志物检测方法简便、费用低廉，已被广泛应用于临床。目前比较普遍应用于胰腺癌诊断的血清学肿瘤标志物有CA199、CA50、CA242等。胰蛋白酶原-2，丝氨酸蛋白酶，绝大部分由胰腺腺泡分泌，以酶原的形式分泌到胰液中，Hedstr？m等[2]的研究提示，胰蛋白酶原-2可能与胰腺癌相关，本研究采用ELISA法定量检测胰腺癌、正常对照者血清中胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242含量，应用ROC曲线探讨其在检测胰腺癌中的应用价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2009年12月～2011年6月总医院、2011年6月～2012年2月北京市石景山医院就诊内、外科未经治疗的胰腺癌住院患者25例为胰腺癌组，其中男14例，女11例，平均年龄（66.36±12.98）岁，入组前均未行手术及放化疗治疗，均由术后病理或影像学资料+长期随访证实。随机选取同期于总医院及石景山医院体检中心进行健康体检的35例为健康对照组，其中男20例，女15例，平均年龄（43.54±11.28）岁，均无明显上消化道症状及胰腺疾病病史；并排除其他肿瘤患者及孕妇、酗酒者、药瘾者。本研究获得上述两家医院伦理委员会伦理审查批准。
1.2 标本采集与检测
留取清晨空腹静脉全血4 ml，标本经1000×g离心后去上层血清分装至Eppendorf（EP）管冻存于-70℃，检测前1天将冻存标本于4℃冷藏室解冻，检测前取出放置室温（20℃）1 h，应用标准ELISA操作流程（双抗体夹心法）检测，采用全自动多功能酶标仪及相应检测统计软件进行分析，胰蛋白酶原-2及CA199、CA242、CA50检测试剂盒由北京永瀚星港生物技术有限公司惠赠，酶标仪为全自动多功能酶标仪（OLY- MPUS5421全自动生化分析仪）。
1.3 统计学处理
应用SPSS 16.0统计学软件处理数据，绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC曲线），找出最佳截断点（ROC曲线上最左上方的点，此时灵敏度及特异度均较高，或根据文献设定的临界值选取临界点），因数据呈非正态分布，采用中位数、四分位数间距描述各组结果。
2 结果
各肿瘤标志物ROC曲线如图1。
图1 各肿瘤标志物ROC曲线
胰蛋白酶原-2：AUC=0.988，P
2.1 血清胰蛋白酶原-2鉴别正常人和胰腺癌的灵敏度和特异度
以点SEN 0.960（1-SPE 0.086）为最佳临界点，其对应的临界值为1.85 ng/ml，ROC曲线下面积为0.988（P
表1 两组血清胰蛋白酶原-2含量的检测值（ng/ml）
M：中位数；QL-QU：四分位数间距；Min-Max：最小值-最大值
2.2 CA199鉴别正常人和胰腺癌的灵敏度和特异度
当前通常以37 U/ml作为胰腺癌诊断临界值，本试验选取最接近点SEN 0.88（1-SPE 0.171），相应临界值为37.20 U/ml，ROC曲线下面积为0.906（P
表2 两组血清CA199含量的检测值（U/ml）
M：中位数；QL-QU：四分位数间距；Min-Max：最小值-最大值
2.3 CA50鉴别正常人和胰腺癌的灵敏度和特异度
当前通常以20 U/ml作为胰腺癌诊断临界值，本试验选取最接近点SEN 0.72（1-SPE 0.200），相应临界值为19.68 U/ml，ROC曲线下面积为0.833（P
表3 两组血清CA50含量的检测值（U/ml）
M：中位数；QL-QU：四分位数间距；Min-Max：最小值-最大值
2.4 CA242鉴别正常人和胰腺癌的灵敏度和特异度
当前通常以20 U/ml作为胰腺癌诊断临界值，本试验选取最接近点SEN 0.68（1-SPE 0.143），相应临界值为20.45 U/ml，ROC曲线下面积为0.834（P
表4 两组血清CA242含量的检测值（U/ml）
M：中位数；QL-QU：四分位数间距；Min-Max：最小值-最大值
3 讨论
胰腺癌是预后极差的恶性肿瘤，近年我国胰腺癌发病率明显上升，且多数胰腺癌确诊时已属中晚期，失去了最佳治疗时机，预后差[3]。Pelaez-Luna等[4]回顾性分析45例胰腺癌患者114次CT扫描（胰腺癌诊断时或诊断前），发现在临床诊断胰腺癌前6个月做CT扫描，部分未检测到病变，部分为可切除性病变，但有临床症状患者几乎均属于不可切除性胰腺癌，提示在胰腺癌临床诊断前，仅有6个月的时间窗，此时病灶多数可切除。但多数无症状者，一般不会就诊，故“因症就诊”者是不太可能检测到真正意义上的早期可治愈的胰腺癌的，必须对无症状者进行筛查才有可能发现早期胰腺癌[5]。肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞所产生或分泌并释放到血液、细胞及体液中，反映肿瘤存在和生长的一类物质，已被广泛应用于临床，在肿瘤的诊断和预后判断中发挥了巨大作用。糖类抗原CA199是一种非特异性的肿瘤相关抗原，在胰腺癌患者血清中升高最为显著[6]，是当前国内外应用最广泛的胰腺癌肿瘤标志物[7]。CA50是一种缺少岩藻糖残基碳水化合物的糖蛋白，其构型与CA199有相似的抗原决定簇，Lewis抗原阳性或阴性的人种均能检测出，故认为CA50对肿瘤的识别谱较CA199更为广泛[8]。CA242主要存在于胰腺和结肠恶性肿瘤细胞中，是不同于CA199和CA50的唾液酸化糖酯类抗原，它的单克隆抗体与Lewis-a血型物质及唾液酸化的半乳糖苷均不发生反应，在胰腺癌中有较高的特异度、灵敏度。胰蛋白酶原-2，绝大部分以胰腺腺泡酶原的形式分泌到胰液中，并在肠内被肠激酶激活。近年来发现，胰蛋白酶原-2在一些肿瘤细胞中呈高表达[9-12]。本试验胰腺癌组胰蛋白酶原-2含量明显高于正常组，提示血清胰蛋白酶原-2与胰腺癌关系密切。本文采用ROC曲线对胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242在诊断胰腺癌中进行分析，结果显示，胰蛋白酶原-2鉴别胰腺癌与正常人曲线下面积为0.988，以1.85 ng/ml为临界点，灵敏度为96%，特异度为91.4%。CA199鉴别胰腺癌与正常人曲线下面积为0.906，以37.2 U/ml为临界点，灵敏度为88%，特异度为82.9%。CA50鉴别胰腺癌与正常人曲线下面积为0.833，以19.68 U/ml为临界点，灵敏度为72%，特异度为80%。CA724鉴别胰腺癌与正常人曲线下面积为0.834 U/ml，以20.45 U/ml为临界点，灵敏度为68%，特异度为85.7%。
本试验中可见4种标志物ROC曲线下面积，胰蛋白酶原-2最高，其次为C199，CA242和CA50接近，均>0.5，提示以上肿瘤标志物用于诊断胰腺癌均有一定的临床意义。据文献报道及临床试验观察，提示各自有其局限性：CA50无器官特异度，多种肿瘤中均可增高，尤其是胃肠癌，在肝胆疾病患者，尤其是黄疸中也升高[7]，因此单独测定CA50对胰腺癌的诊断意义较小。Kawa等[13]认为，CA242比CA199和CA50更特异，在胰腺炎、慢性肝炎和肝硬化等良性疾病中也很少升高，并且不受肝实质损害、胆汁淤积的影响，但也有文献报道CA242、CA50的灵敏度和特异度均不优于CA199[14]。尽管CA199是目前对胰腺癌灵敏度最好的标志物[7]，但在Lewisa阴性基因人群中无法表达，因此此血清型的肿瘤患者表现为CA199阴性。此外，急慢性胰腺炎、胆囊炎、胆管阻塞、肝炎、肝硬化等疾病中，CA199也有不同程度的升高，且在分化差的肿瘤中表达也较低[15-16]。目前鲜有关于胰蛋白酶原-2与胰腺肿瘤大小、病情严重程度、病理分期相关性，及是否能预测胰腺癌预后、评价治疗效果的研究报道，且有文献报道[17]胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎患者血清中呈现高表达，因此，胰蛋白酶原-2也非胰腺癌绝对理想指标。目前尚未发现单一理想诊断胰腺癌的肿瘤标志物，近年倾向于将灵敏度、特异度较高的肿瘤标志物联合检测。
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（收稿日期：2014-09-29 本文编辑：郭静娟）