胆草的抗菌成分研讨

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本文作者：王蓓、梅文莉、左文健、曾艳波、刘国道、戴好富 单位：海南大学园艺园林学院、中国热带农业科学院热带生物技术研究所、海南省黎药资源天然产物研究与利用重点实验室、中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所

白花地胆草(ElephantopustomentosusLinn.)为菊科(Asteraceae)地胆草属植物。地胆草属植物全世界约有32种，广泛分布于热带地区，我国有白花地胆草和地胆草2种，分布于华南和西南地区[1]。白花地胆草具有清热、凉血、利湿的功效，是我国华南地区，尤其是港台地区的常用民间药[2]。前人对白花地胆草的化学成分研究集中在地上部分，其主要成分为倍半萜内酯[3–4]。文献报道其水煎煮液和乙醇提取液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用[5]。我们对白花地胆草全草的化学成分和抗菌活性进行了研究，从中分离得到9个化合物。本文报道其分离方法、结构鉴定和生物活性结果。

1材料和方法

1.1材料植物样品于2010年10月采自海南省昌江县霸王岭，经中国热带农业科学院热带生物技术研究所代正福副研究员鉴定为菊科地胆草属白花地胆草(ElephantopustomentosusLinn.)，植物凭证标本(ET201010)存放于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC51650由海南省药品检验所提供；烟草青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)由云南大学生物资源保护与利用重点实验室莫明和教授提供。

1.2仪器和试剂北京泰克X-5型显微熔点仪(温度未校正)；APIQSTARPulsar质谱仪；BruckerAV-400型超导核磁仪(TMS为内标)；RudolphAutopolШ旋光仪；CO2培养箱(SheldonManufacturingInc.)；超净工作台(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；柱层析硅胶(200~300目)和薄层层析硅胶(青岛海洋化工厂)，SephadexLH-20(Merck公司)，四甲基偶氮唑盐(MTT)，硫酸卡那霉素(上海生工有限公司)，硫酸链霉素(深圳华药南方制药有限公司)。

1.3提取和分离白花地胆草全草(19.7kg)晒干后加工成粗粉，用95%乙醇浸提3次。减压浓缩至无乙醇味后得粗浸膏，将粗浸膏分散于水中成为悬浊液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚部分(124.0g)、乙酸乙酯部分(81.0g)和正丁醇部分(197.0g)。乙酸乙酯部分(81.0g)采用常压干柱柱层析，以三氯甲烷-甲醇(9∶1)洗脱，分段收集，薄层检查，合并相同部分，浓缩收集得到5个组分(Fr.1~5)。Fr.1(31.4g)经硅胶柱层析,以石油醚-乙酸乙酯(10∶1~0∶1)梯度洗脱，得到9个亚组分(Fr.1.1~Fr.1.9)。Fr.1.3(1.5g)经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯5∶1)得到化合物1(20.7mg)。Fr.1.4(2.6g)经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯(6∶1)洗脱，甲醇重结晶得到化合物2(760.7mg)。Fr.1.5(1.1g)依次经SephadexLH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)和反复硅胶柱层析(石油醚-丙酮7∶1)得到化合物3(10.8mg)。Fr.1.6(3.1g)依次经SephadexLH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)和反复硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯(6∶1)洗脱得到化合物4(11.7mg)，以石油醚-乙酸乙酯(2∶1)洗脱得到化合物5(23.6mg)。Fr.1.7(4.4g)依次经SephadexLH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)和反复硅胶柱层析，以石油醚-丙酮(4∶1)洗脱分别得到化合物6(36.4mg)和化合物7(3.3mg)；Fr.2(7.6g)依次经反复硅胶柱层析，以石油醚-丙酮(3∶2)洗脱得到化合物8(20.7mg)。Fr.3(3.4g)经反复SephadexLH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)洗脱，丙酮重结晶得到化合物9(13.7mg)。1.4抗菌活性测试方法通过滤纸片法[6]测定化合物的抗S.aureus和R.solanacearum活性。采用NA培养基，将两种菌分别制成的菌悬液(1×105~1×107cfumL-1)，用棉签将其均匀涂布于供试无菌培养皿中，制成含菌平板，待用。抗R.solanacearum活性

将单体化合物加入DMSO配成浓度为50.0mgmL-1的样品溶液，选用直径为6.0mm的灭菌滤纸片，分别加样品溶液1.6μL，待溶剂挥干后放置于含R.solanacearum平板上，静置20min，再放入培养箱37℃无光照培养，24h后测定其抑菌圈直径(D)，包含滤纸片直径6.0mm，以相同剂量的DMSO溶液为空白对照，取1.6μL浓度为50mgmL-1硫酸卡那霉素作为阳性对照，实验重复3次。通过比较抑菌圈直径大小，运用t检验法进行显著性差异评价。抗S.aureus活性

将单体化合物分别配成浓度为20.0mgmL-1的样品溶液，取25μL于滤纸片上,待溶剂挥干后放置于含S.aureus平板上，取10μL浓度为0.64mgmL-1硫酸链霉素作为阳性对照，实验方法步骤和结果计算同上。1.5结构鉴定表木栓醇(Epifriedelanol,1)

无色针晶(甲醇);分子式C30H52O;mp283℃~285℃;[α]25D。

2结果和讨论

前人报道白花地胆草的化学成分主要是倍半萜内酯，本文对白花地胆草的进一步研究，从中分离鉴定出9个化合物，包括5个三萜:表木栓醇(1)、羽扇豆醇(2)、桦木酸(4)、熊果酸(5)、30-醛基羽扇豆醇(9)；1个酮:6-deoxyisojacreubin(3)；1个苯丙素:阿魏酸(6)；1个生物碱:3-甲酰吲哚(7)和1个脂肪酸:半夏酸(8)。以上化合物均为首次从该植物中分离得到。通过抗菌活性筛选，结果显示化合物6和7对金黄色葡萄球菌的生长有抑制作用；化合物6和8对烟草青枯病菌的生长有抑制作用。本次研究结果丰富了白花地胆草中的化学成分和生物活性，为白花地胆草的开发利用提供了科学依据。