凝胶色谱范文精选

摘 要：介绍在线凝胶渗透色谱-气相色谱/质谱（GPC-GC/MS）工作原理，分析在线凝胶渗透色谱-气相色谱/质谱在农药残留分析中的应用，包括蔬菜水果中的农药残留、坚果中的农药残留、茶叶中的农药残留、粮食作物中的农药残留。

关键词：在线凝胶渗透色谱-气相色谱/质谱 食品 农药残留

中图分类号：TS207 文献标识码：A 文章编号：1007-3973（2013）007-131-02

农药，以造福人类，提高农产品的产量走进了我们的世界，但是随着农药的广泛使用，大量食用含有农药残留的食品会导致机体正常生理功能失调，引起病理改变和毒性危害，它对人类健康，生态环境构成了严重的威胁。食品安全问题已经受到各国政府的密切关注，目前，农药残留分析技术已经不能满足当前社会的需求，GPC-GC/MS在线联用技术具备样品处理简单，分析时间快、溶剂使用量少，定性准确等优势，近几年，逐渐受到食品检测工作者的青睐。在线GPC-GC/MS已经用于粮食、蔬菜、水果、坚果等中的多农药残留分析。

1 在线GPC-GC/MS简介

GPC-GC/MS主要包括两部分：凝胶渗透色谱和气相色谱/质谱。GPC主要目的是去除样品基质中可能干扰目标化物检测的大分子油脂、色素等组分。系统流路图如图1，GPC根据尺寸排阻原理先将分子量较大的脂肪和色素等先从色谱柱中洗脱，通过六通阀位置的切换将这些基质干扰物排出系统，之后将所需检测物质导入试样捕集环中，最后导入GC/MS进行分离检测。

图1 系统流路图

2 在线GPC-GC/MS在农药残留分析中的应用概况

【摘要】凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是于六十年代初发展起来的一种快速简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便且对高分子物质有很高的分离效果，所以凝胶色谱法在测定头孢菌素中高分子杂质方面应用很广，有鉴于此本文对头孢菌素中高分子杂质的凝胶色谱法测定进行了详细的阐释，对具体的测定方法及操作方法也一并做了介绍，希望对我国头孢菌素类药物高分子杂质的测试有所帮助。

【关键词】头孢菌素类药物；凝胶色谱技术；高分子杂质

【中图分类号】R927，2

【文献标识码】A

【文章编号】1672-5158（2012）12-0391-01

目前经国内外临床试验研究证明多数抗生素所致的速发型过敏反应与药品中的高分子杂质有关，可见高分子杂质的含量对药品质量影响很大。所以为了有效提高药品的纯度及减少不良反应的发生，就要不断采取措施减少头孢菌素类药物中的高分子杂质的含量。

一、仪器与实验准备上的注意事项

在采用液相色谱仪测定抗生素中的高分子杂质含量时，应该严格遵守实验室液相色谱仪的检定规程定期进行检定。在仪器的使用过程中要认真参阅操作说明书，严格按照规范操作才能使得测量结果更加准确。

摘要 应用凝胶渗透色谱（GPC）和气相色谱（GC）技术，建立了大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）的分析方法。样品经GPC全自动凝胶净化定量浓缩联用仪净化，HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色谱柱进行分离测定。 本方法的检出限为4 mg/kg。TBHQ在检测范围内具有良好的线性，在浓度1～1 000 mg/L范围内与峰面积呈线性相关，相关系数为0.999 6。加标油样的回收率在88.3%～95.4%之间，相对标准偏差（RSD）小于4%。

关键词 大豆油；特丁基对苯二酚；凝胶渗透色谱；气相色谱仪

中图分类号 TS221 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0273-02

Abetract Using gel penetration chromatography （GPC） and gas chromatography （GC） technique to establish analysis method of soybean oil antioxid-ant tertiary butyl hydroquinone （TBHQ）. Sample by GPC automatic gel purification quantitative concentration spectrometer purification， HP-5 （30 m× 0.32 mm，0.25 μm） for the separation and deter mination of chromatographic column.The detection limit was 4 mg/kg.TBHQ had a good linearity in the detection range，the concentration in the range of 1～1 000 mg/L and the peak area was linear correlation，the correlation coefficient was 0.999 6.Recovery rate of oil sample was between 88.3% and 95.4%.The relative standard deviation （RSD） was less than 4%.

Key words soybean oil；TBHQ；gel permeation chromatography；gas chromatography

氧化是导致食品品质变劣的重要因素之一，特别是在食用油或者含油量较高的食品中更是如此。大豆油是日常生活中主要的一种食用油，为了防止大豆油氧化酸败，延长货架期，市售大豆油往往需要在其中添加适宜的抗氧化剂[1-3]。特丁基对苯二酚作为油溶性抗氧化剂的新型产品，它的抗氧化能力大于2，6-二叔丁基对甲苯（BHT），被广泛用于延迟或阻止食品油脂的氧化变质中。

食用油脂中TBHQ常用的分析方法有比色法、气相色谱法、液相色谱法，但这些前处理方法比较繁琐，同时样品油脂得不到充分的净化[2-4]。该文采用凝胶渗透色谱/气相色谱法测定大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚，具有步骤简单、结果准确、灵敏度高等优点。

1 材料与方法

摘 要 采用改进QuEChERS方法，以石墨化炭黑/乙二胺-N-丙基键合硅烷/磁性四氧化三铁复合材料为吸附剂，对烟叶提取物进行净化，结合在线凝胶渗透色谱-气相色谱-串联质谱联用仪，建立了烟叶中10种农药残留的检测方法。优化了影响实验结果的参数，最终凝胶渗透色谱在线收集时间选取为3.30～5.30 min、磁性吸附剂用量为80 mg、净化时间为1.0 min。目标物的检出限在0.940～100 ng/L之间，线性相关系数R2≥0.9989，日内和日间相对标准偏差分别小于15.1%和19.8%，实际样品的加标回收率为68.8%～132.2%。本方法成功应用于实际烟叶样品的检测，检测结果与现行标准方法相吻合。

关键词 QuEChERS方法； 在线； 凝胶渗透色谱； 气相色谱-串联质谱； 烟叶； 农药残留

1 引 言

为了防治病虫害，烟草在育种、种植、调制和保存期间要使用农药。残留农药会降低烟叶质量，加剧环境污染， 并威胁人类和其它生物的健康[1]。因此，烟叶中的农药残留检测对保证烟叶质量和环境安全具有重要意义。由于烟叶样品基质复杂，其中残留农药含量低（低至ng/g级），因此通常需要样品预处理过程才能进行后续测定[2]。目前，液-液萃取[3]、固相萃取[4]、固相微萃取[5]等方法已用于烟叶中农药残留测定。这些方法存在有机溶剂消耗量大、操作繁冗费时、回收率低等不足。Anastassiades等[6]开发了“快速、简便、经济、高效、耐用且安全（Quick， easy， cheap， effective， rugged and safe， QuEChERS）”的样品前处理技术。QuEChERS方法具有回收率高、稳定性强和被分析目标物范围广等优点，因此在农药残留检测中广泛应用[3]。常规QuEChERS方法在净化步骤中通过离心或过滤将吸附剂与样品液分离，耗时费力。为了克服这一缺陷，本研究组以石墨化炭黑/乙二胺-N-丙基键合硅烷/四氯化三铁（GCB/PSA/Fe3O4）复合材料为吸附剂，改进了QuEChERS方法[7]，吸附剂可以在磁场作用下与提取液快速分离，具有操作简单、快速高效的优点。

在线凝胶渗透色谱-气相色谱-质谱（GPC-GC-MS）是将凝胶渗透色谱和气相色谱-质谱在线联用的分析检测技术，不但具有抗基质干扰能力强、灵敏度高的优点，而且可以连续自动分析，能提高分析速度和结果的准确性，已被应用于农药残留检测[8～10]。本研究采用改进QuEChERS方法对烟叶样品前处理，以在线凝胶渗透色谱-气相色谱-串联质谱（GPC-GC-MS/MS）检测，选取烟草种植生产中对烟叶质量和烟草制品产品安全有影响的常用10种除草剂、抑芽剂和杀虫剂为代表性化合物，建立了烟叶中农药残留量的快速、准确、灵敏分析方法。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

在线GPC-GC-MS/MS系统（日本岛津公司），GPC配有LC-20AD泵，SIL-20A自动进样器，CTO-20AC柱温箱，DGU-20A3R脱气机和SPD-20A紫外检测器；GC-MS/MS包括日本岛津2010-plus气相色谱和TQ 8030三重四级杆质谱，由FCV-12AH电磁阀实现GPC和GC-MS/MS的在线连接。用Quanta 200 扫描电镜（Quanta 200，FEI，Holland）对材料形貌进行表征。

凝胶渗透色谱（GPC）是液相分配色谱的一种，是60年代中期发展起来的一种分离技术。它的分离基础是按溶液中溶质分子流体力学体积大小进行大，溶质分子的淋洗体积主要取决于分子尺寸、填料孔径、孔度和柱容积等物理参数。而不是依赖于试样、流动相和固定相三者之间的相互作用。这样就可以使凝胶渗透色谱在很多情况夏具有独特的分离效果和准确的相对分子质量测量，由于高分子化合物的许多重要的加工性能和使用性能与其相对分子质量和相对分子质量分布有关，它们的快速和可靠的测定对研究高分子材料过程中的控制、产品规格的合理制定以及实验条件的有效选择提供了科学依据，因而在许多领域内得到了迅速发展和应用[1-3]。本文介绍了凝胶渗透色谱在制浆造纸中的应用。

一 、凝胶渗透色谱的发展概况

茨维特（Tswett）创立的液体色谱技术，由于分离效率低、分离时间长、适用范围窄等缺点，使它的发展一直受到很大的限制，长期停留在原始的实验阶段。直到1959年，Porath和Flodin用交联的缩聚葡萄糖制成的凝胶来分离水溶液中不同相对分子量的物质，如蛋白质、核酸、酶和多糖等。他们制备的具有一定孔度和强度的凝胶立即以商品“Sephadex”出售，并正式以“凝胶过滤”一词表示这一分离过程。

有机溶剂体系的凝胶色谱首先需要解决适用于有机溶剂的凝胶的制备问题。1964年，Moore以苯乙烯和二乙烯苯在不同的稀释剂存在下制成一系列孔径不同的凝胶这些凝胶可以在有机溶剂中分离相对分子量从几千到几百万的试样。第二年，Maly以示差折光仪为浓度检测器、以体积指示器为相对分子质量检测器制成凝胶色谱仪，这些凝胶和仪器立即被制成商品出售。这样，凝胶色谱技术很快就成为在高分子科学领域内被广泛应用。几十年来，凝胶色谱一直是一个非常活跃的研究课题，无论在凝胶制备、仪器技术性能、数据处理和理论研究上都有较大进展，它的应用范围逐步从生物化学、高分子化学、无机化学向其它领域渗透，已经成为化学领域内一种重要的分离手段。

二 、凝胶色谱测定相对分子质量或排布的方法

1.直接法

直接法是指凝胶色谱仪和粘度计或光散射仪联用；而最常用的间接法则用一系列分子量已知的单分散的（分子量比较均一）标准样品，求得其各自的淋出体积Ve，作出logM对Ve校正曲线（图1）。

图1 凝胶色谱分离范围

[摘要] 目的:建立比阿培南聚合物的测定方法。方法:采用葡聚糖凝胶Sephadex G-10不锈钢柱(10 mm×300 mm),流动相A:磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾5.59 g,与磷酸二氢钾0.41 g,加水使其溶解成1 000 ml);流动相B:水;流速为0.3 ml/min;检测波长为254 nm;进样量为200 μl;柱温为室温;对照品采用法罗培南。结果:比阿培南在100.40～400.55 mg/ml 范围内,浓度与聚合物的峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9)。结论:凝胶色谱法方法简便,结果可靠,可以用于比阿培南中高分子聚合物杂质的检测。

[关键词] 凝胶色谱法;比阿培南;聚合物

[中图分类号] R927.2[文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)03(b)-116-02

Determination of high polyler impurities in Biapenem by gel permeation chromatography

MA Jie,ZHAO Yuxin,WANG Guanghui,REN Jiqiu

( Development and Scientific Research Centre,Harbin Pharmaceutical Group CO., LTD. General PharmAceuticalFactory,Heilongjiang Province,Harbin150046, China)

[Abstract] Objective:To develop a method for the determination of high polyer impurities in biapenem. Methods:Gel permeation chromatography method was adpoted.The analytical column was Sephadex G-10 stainless steel column (10 mm×300 mm), the mobile phase A:was phosphate buffer(dissolve 5.59 g of potassium dihydrogen phosphate and 0.41 g monopotassium phosphate in water to make 1 000 ml), and the mobile phase B was water; The flow rate was about 0.3 ml per minute; The detective wavelength was 254 nm; The volume of injection was 200 μl; The column temperature was room temperature;Reference standards Faropenem. Results: The calibration curves of high polyler impurities in biapenem was in good linearite over the range of 100.40～400.55 mg/ml(r=0.999 9). Conclusion: Gel permeation chromatography issensitive,specific,accurate and reliable, it is suitable to the determination of high polyler impurities in biapenem.

[Key words] Gel permeation chromatography;Biapenem;High polyler

【摘要】 目的：建立多花黄精多糖的分子量与分子量分布分析方法。方法：应用高效凝胶渗透色谱法，色谱柱为shodex ohpak sb?803hq（8 mm×300 mm），流动相为0.71%硫酸钠溶液（内含0.02%叠氮钠），柱温：35 ℃，示差折光检测器（检测器温度35 ℃），流速0.5 ml·min-1。结果：根据建立的方法测定，得到多糖的高效凝胶色谱图，计算出多花黄精多糖的重均分子量及其分布。结论：所用方法简便、快速、准确，可用于多花黄精多糖的质量控制。

【关键词】 高效凝胶色谱法； 多花黄精多糖； 分子量及其分布

多花黄精多糖是从传统中药百合科植物多花黄精中发现并分离出一种低分子量活性多糖，为新药(中药)原二类,全国第一个治疗病毒性角膜炎的中药。多花黄精多糖抗单纯疱疹病毒i型的体外细胞培养试验结果结果表明,多花黄精多糖有明显的抗单纯疱疹病毒i型的作用。多糖为单糖的天然聚合物，多糖的性质和药理作用与其分子量大小，分子量分布及其结构密切相关。多糖的分子量不是均一的，具多分散性，需要用统计方法表征其平均分子量及其分子量分布。高效凝胶色谱法测定多糖的分子量及其分布，具有快速，重现性好等优点，在国内外得到了广泛的应用[1]。多花黄精多糖为水溶性多糖，针对其单糖组成和空间结构与葡聚糖相似，在色谱柱的选择上倾向于更适合于水溶性多糖分离测定用的shodex ohpak sb?803hq系列（对葡聚糖的排阻极限为1×105）。有关多花黄精多糖的平均分子量及其分子量分布尚未见相关报道，本文应用凝胶渗透色谱（gpc）法测定多花黄精多糖的平均分子量及其分子量分布[2]，为考察生产工艺的稳定一致性及控制产品质量提供了科学依据，为多花黄精多糖分子大小和药理作用的相关性研究打下了一定基础。

1实验部分

1.1仪器与试药

agilent 1100型高效液相色谱仪（自动进样器），示差折光检测器。shodex ohpak sb?803hq凝胶色谱柱。北京龙智达公司提供gpc专用软件。

供分子量测定用右旋糖酐分子量标准对照品（中国药品生物制品检定所提供，d0、d1、d2、d3、d5、d6、d8、d2000分子量依次为180、2500、4600、7100、21400、41100、133800、2000000）；其余试剂均为分析纯；高纯水用millipore?q超纯水系统制得。

试验用样品多花黄精多糖由四川泰华堂制药有限公司提供。

【摘 要】在对头孢菌素类药物中的高分子杂质进行测定的过程中，主要选择的是凝胶色谱法。主要是由于这种方式不仅测定方式比较简单，而且分离效果比较明显，操作方式比较常见。在实际的研究和测定的过程中，研究人员对对这一技术加强重视，现如今已经在医药研究领域中得到高效地推广。在本文中，笔者主要对凝胶色谱法对头孢菌素类药物中的高分子杂质进行测定的方式进行分析和探讨，希望能够给相关的药物研究人员提供借鉴和参考。

【关键词】凝胶色谱法；头孢菌素类药物；高分子杂质；测定方法

从现如今我国医药临床研究中可以看出，有些药物对人体会造成一定的过敏性，这和药物中的高分子杂质的含量之间存在着必然的联系。从实际的判断中可以看出，要想保证药品的安全性，药物研究人员应该对高分子杂质的数量进行控制，减少其对人体健康的威胁。为了保证药物的整体质量。工作人员需要对纯度进行测定。工作人员所采用的测定方式就是凝胶色谱法。

一、实验过程中的注意事项

研究人员在对头孢菌素类药物进行测定的过程中，主要采用的是凝胶色谱法。在测定的过程中要经过严格地检定。保证实验操作的规范性和科学性，这样才能够提升测量结果的精准度。

1、仪器准备

在实验进行之前，做好准备阶段的工作至关重要，在检测之前，工作人员要对实验仪器和设备等进行检测，包括每一个检测单元、输液单元。在检测之后需要做好记录。进行这一环节主要是为了有效的满足紫外检测工作基本要求，提升输液单位的流速，进而在检测的过程中发出相对比较科学的模拟信号。在设备和系统使用的过程中，工作人员主要涉及到液相色谱仪，保证检测的精准度是至关重要的。只有做好定期的检定工作，才能提升实验结果的高效性

2、凝胶色谱柱准备

[摘要] 目的 建立复方鬼臼毒素凝胶中鬼臼毒素有光物质的高效液相测定法。 方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil ODS柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为磷酸盐溶液（取磷酸氢二钾17.12 g，置1 000 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用稀磷酸调pH值至7.5）－甲醇（48∶52）；流速为1.0 mL/min；检测波长为292 nm；柱温为30℃。 结果 鬼臼毒素最低检测限为1.22 ng（S/N=3），与杂质的分离度符合要求，有关物质检复性试验符合要求。 结论 本法简便、准确、快速、专属性强，可用于复方鬼臼毒素凝胶中鬼臼毒素有关物质的控制。

[关键词] 复方鬼臼毒素凝胶；有关物质测定；高效液相色谱法

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）01（b）-114-04

RP-HPLC determination related substances of Podophyllotoxin of Compound Podophyllotoxin Gel

FENG Caili1 YU Yong2 JIANG Lixin1 ZHANG Hongshan1

1.Beijing Staidson New Medicine Research Limited Company, Beijing 100176, China; 2.Beijing Saisheng Pharmceutical Co., Ltd, Beijing 100176, China

[Abstract] Objective To establish the HPLC method for determination related substances of Podophyllotoxin in Compound Podophyllotoxin Gel. Methods Kromasil ODS-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used as stationary phase. The mobile phase was the solution containing Phosphoric acid salt solution (Dipotassium hydrogen phosphate 17.12 g, dissolved with the 1 000 mL water, shaking to adjust the pH value to 7.5 with the thin Phosphoric acid) - methanol (48∶52); flow rate was 1.0 mL/min, wavelength of UV detection was 292 nm, and temperature of column was 30℃. Results The detection limits was 1.22 ng (S/N=3), which met the requirement with the impurity resolution and the repeatability for related substances for Podophyllotoxin. Conclusion This method is simple, accurate, quick and very good specificity, and can be applied to the determination related substances of Podophyllotoxin in Compound Podophyllotoxin Gel.

[Key words] Compound Podophyllotoxin Gel; Determination related substances; HPLC

【摘 要】凝胶渗透色谱技术，简称GPC技术，是农药残留分析方面较为先进的净化方法之一。在全球经济一体化的当代，发达国家高度重视农药残留问题，更加关注人类食品安全问题，对进出口贸易中的农药残留问题严格把关，更是设置了重重关卡来对农药残留率进行限制。我国的农药残留标准体系不健全，检测系统漏洞繁多，监控力度有限。而凝胶渗透色谱技术能够快速测量相对分子质量，覆盖面涉及生化、无机化学等多种领域，为我国农药残留分析提供多种可能。

【关键词】凝胶渗透色谱；农药残留分析；全球经济一体化；监测系统

1 引言

随着经济的不断发展和人民生活水平的不断提高，健康问题已得到社会各界的广泛关注，食品安全问题也提上记事议程，环境的破坏和食品农药残留问题不断涌现，逐渐成为阻碍我国出口贸易发展的屏障。农药是一种农业生产不可或缺的生产资料，在适量的条件下，对生存与农业、林业和畜牧业之间的害虫和细菌有积极的预防作用，也能在一定程度上促进动植物的生长，预防各种虫害，为农业的创收增产和预防传染病方面有不可磨灭的突出作用。在有限的科技手段中，农药仍是预防疾病、增产创收、缓解粮食压力的最快捷、最便利、最廉价、最有效的方法之一。可是，农药也不是面面俱到，农药的使用本身存在着巨大的隐患，由于我国是农业大国，农药的大量长期使用不仅污染土地和大气，还造成生态环境的严重失衡，更严重的是，农药可残留于食物中，使牲畜和人类中毒，产生严重的后果。然而，农药残留的原因复杂繁多：使用了价格低廉，不易分解的农药；使用农药过量；畜牧业药浴；在动物即将宰杀前仍使用农药；饲养牲畜的饲料为受过农药污染的产品等。近日，农药残留分析方法及检测技术得到了突飞猛进的发展，但食品分类复杂以及农药品种的化学性质千差万别，为农药残留分析检测带来了更大的挑战。其中，农药残留分析的样品前处理技术包含先进的固相萃取技术、基质固相分散萃取技术、凝胶渗透色谱技术以及加速溶剂萃取技术等等。这些技术的功能特点不尽相同，有的是专门分析水源和土壤的，有的是分析果蔬的，有的是分析生物样品的，而本文讨论的凝胶渗透色谱技术在大分子样品分离净化脂肪、色素等方面有显著效果。

2 凝胶渗透色谱技术

前处理和测定是农药残留分析处理的主要手段，而分析的关键是样品的前处理问题。凝胶渗透色谱技术大部分使用的是XAD系列的凝胶，其洗脱剂是配比不同的乙酸乙酯和环乙烷，将大小分子不同的多孔凝胶分离，把油脂、叶绿素、聚合物和生物碱等大分子物质首先淋洗处理，分子质小的后淋洗处理。然后将洗脱液收集起来再次进行分析。凝胶渗透色谱分离的关键因素是柱填料，它分为有机凝胶和无机凝胶，这要求其必须具备强韧的机械强度和化学惰性，还要有流动性小，分离广等特点。一般的分离方法有机溶剂消耗量极大，误差也大，从而操作繁琐，而凝胶渗透色谱技术分离样品运用物理方法分离蛋白质脂肪，并且过程简单，误差小。

2.1 凝胶渗透色谱技术的应用原理

检验农药残留的方法颇多，目前主要有两种____生化法和色谱法。生化法操作简单，测速快效率高。色谱法是使用色谱分离技术，选取合适的仪器测定农药残留的方法，也是农药残留检测的常见方法。凝胶渗透色谱技术是根据溶质分子的大小进行分离的技术，它可用于分析化学性质相同但分子体积有差异的同系物质。先用洗脱机把注射进色谱柱中的预处理浓缩样品洗脱分离完成，使样品的形状和分子大小各异，在通过固定凝胶直径使大分子样品首先被洗脱出来，小分子随之被洗脱出来。凝胶渗透色谱是一项十分有发展前景的分子量测量方式的课题，从一开始的生物学向生化、高分子化学、无机化学等广泛扩展领域，可见其应用范围之广泛，渗透领域之普遍，是农药残留分析的关键性的净化方法。