高效液相色谱法测定淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量

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【摘要】 目的 建立淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱为zorbax sb-c18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为乙腈-水(25?75,v/v),流速1.0 ml/min；检测波长270 nm。结果 淫羊藿苷的进样量与其峰面积积分值在0.099 84～0.599 04 μg范围内有良好的线性关系(r＝0.999 8),平均加样回收率为97.77%,rsd＝1.77%(n＝6)。结论 本法简便可行,准确可靠,可用于淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定。

【关键词】 淫羊藿苷；淫黄胶囊；高效液相色谱法

abstract：objective to establish an hplc method for determination of the content of icariin in yinhuang capsules. methods the hplc assay was performed on a zorbax sb-c18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with the mobile phase of acetonitrile-aquous (25?75, v/v) at a flow rate of 1.0 ml/min, and the detective wavelength was 270 nm. results a good linearity of icariin was obtained in the range of 0.099 84～0.599 04 μg (r＝0.999 8). the average recovery was 97.77% and rsd was 1.77% (n＝6). conclusion the method is simple, feasible, accurate and reliable. it can be applied to the determination of icariin in yinhuang capsules.

key words：icariin；yinhuang capsules；hplc

淫黄胶囊是由淫羊藿、黄芪组成的中药复方制剂,具有补气健肾之功,主要用于治疗肾病综合征。该制剂中主要药味淫羊藿主要含有黄酮类、多糖,其中黄酮类成分淫羊藿苷为淫羊藿的主要特征性有效成分。为了有效控制该制剂的质量,本实验建立了以高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷含量的方法。

1 仪器与试药

agilent 1100高效液相色谱系统(自动脱气机、vwd检测器,美国产)。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号0737-200111,供含量测定用)；淫黄胶囊(本院中药药剂实验室研制,批号20050509、20050523、20050606)。乙腈为色谱纯(美国tedia公司)；水为注射用水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：zorbax sb-c18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-水(25?75,v/v)；流速：1.0 ml/min；检测波长：270 nm。理论塔板数按淫羊藿苷计算不低于2 500。

2.2 检测波长的确定

取淫羊藿苷对照品适量,用50%乙醇溶解、稀释成浓度约为1 mg/ml的溶液,以50%乙醇为空白,在400～200 nm波长范围内扫描,结果淫羊藿苷在270 nm波长处有最大吸收。

2.3 标准曲线的制备

精密称取淫羊藿苷对照品10.40 mg,置50 ml量瓶中,加50%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为208.0 μg/ml的对照品储备液。分别从中精密吸取0.6、1.2、1.8、2.4、3.0、3.6 ml置于25 ml量瓶中,加50%乙醇稀释至刻度,摇匀,得系列浓度的对照品溶液。分别精密吸取各浓度对照品溶液20 μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以淫羊藿苷进样量为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归,得回归方程为：y＝－5.953＋2 107.944x,r＝0.999 8。结果表明,淫羊藿苷进样量在0.099 84～0.599 04 μg范围内与其峰面积积分值有良好的线性关系。

2.4 供试品溶液的制备

取淫黄胶囊10粒内容物,研细,取细粉约0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇20 ml,称定重量,超声处理(功率200 w,频率59 khz)45 min,放置,冷至室温,称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液4 ml置水浴上蒸干,加水10 ml溶解,以乙酸乙酯萃取3次,每次10 ml,合并乙酸乙酯萃取液,减压回收溶剂至干,残渣加50%乙醇溶解并定容至25 ml量瓶中,摇匀,即得供试品溶液。

2.5 阴性干扰试验

按处方制法制备缺淫羊藿的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别吸取淫羊藿苷对照品溶液(14.976 μg/ml)、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图(见图1)。结果表明,在淫羊藿苷色谱峰位置处阴性无干扰。

2.6 精密度试验

精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(14.976 μg/ml)20 μl,注入液相色谱仪,重复进样5次。结果峰面积积分值rsd＝1.03%,表明精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液(批号20050509),分别于0、2、4、6、8 h时进样20 μl,按上述色谱条件测定,峰面积积分值rsd＝1.39%。结果表明,供试品溶液中淫羊藿苷至少在8 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一批淫黄胶囊(批号20050509)5份,分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液,进样20 μl,按上述色谱条件测定,计算淫羊藿苷含量,结果rsd＝2.92%。

2.9 加样回收率试验

取已测定含量的淫黄胶囊(批号20050509)内容物,研细,称取6份,各约0.1 g,精密称定,分别精密加入淫羊藿苷对照品储备液(208.0 μg/ml)5 ml,按“2.4”项下方法制备供试品溶液,依法测定,计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）

2.10 样品测定

取淫黄胶囊样品3批,按“2.4”项下方法制备供试品溶液,进样20 μl,按上述色谱条件测定,采用外标法计算淫羊藿苷含量,结果见表2。结合《中华人民共和国药典》标准规定淫羊藿药材中淫羊藿苷含量不低于0.5%[1],暂定本品每1 g含淫羊藿苷不低于8 mg。表2 淫羊藿苷含量测定结果（略）

3 讨论

在供试品溶液制备中,曾分别比较了不同提取方式(回流法提取、超声法提取)及其不同提取时间(15、30、45、60 min)对淫黄胶囊样品中淫羊藿苷的提取效率,结果两种方式提取的效果基本一致。文中所选用的超声法提取操作简便,超声45 min可将样品所含的淫羊藿苷提取完全。因该超声提取法同时提取出较多杂质,本试验根据淫羊藿苷的溶解性质[2],再将提取液以乙酸乙酯提取、纯化,结果能使供试品溶液中杂质大大减少,在保证被测成分提取完全的同时,减少了样品对色谱柱的污染。对于流动相,将《中华人民共和国药典》[1]中淫羊藿药材含量测定项中的流动相调整为乙腈-水(25?75,v/v),即可得到满意的色谱分离效果。本试验所建立的供试品溶液制备方法简便、易行,含量测定方法准确、可靠,可用作淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。

【参考文献】

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2000.268.

[2] 杨 云,冯卫生.中药化学成分提取分离手册[m].北京.中国中医药出版社,1998.329.