高效液相色谱法测定鹰不扑中齐墩果酸的含量

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作者：蒙毅,钟一雄,范卫锋,黄维安

【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定鹰不扑中齐墩果酸含量的方法。方法 选用c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-0.2%磷酸溶液(85∶15)为流动相,流速1.0 ml/min,柱温30 ℃,检测波长为210 nm。结果 齐墩果酸的平均回收率为95.4%,rsd＝0.67%(n＝6),线性范围为0.059～0.59 μg,r＝0.999 8。结论 本法简便、准确,可用于鹰不扑中齐墩果酸的含量测定。

【关键词】 鹰不扑；齐墩果酸；高效液相色谱法

abstract： objective to establish a hplc method for determining the content of oleanolic acid in radix araliae armatae. methods stationary phase was lichrospher-c18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm), mobile phase was methanol-0.2% phosphoric (85∶15), detection wavelength was 210 nm, flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 30 ℃. results there was good linearity in the range of 0.059～0.59 μg for oleanolic acid. the average recovery of oleanolic acid were 95.4% with rsd＝0.67% (n＝6). conclusion this method is rapid and accurate. it can be applied to control the quality of radix araliae armatae effectively.

key words：radix araliae armatae；oleanolic acid；hplc

鹰不扑又名鸟不企、老鸦怕等,为五加科植物黄毛?B木aralia decaisneana hance的干燥根,主产于广西、广东和湖南等地,具有清热解毒、祛风除湿、散瘀消肿之功效,用于治疗跌打损伤、风湿性腰腿痛、急慢性肝炎、肾炎水肿、淋巴结肿大、咽喉炎、蛇咬伤及糖尿病等症[1]。鹰不扑主要含以齐墩果酸为主的三萜皂苷[2]。齐墩果酸是主要有效成分,原标准(收载于《广西中药材标准》1990年版)未有含量测定项,文献报道仅为薄层扫描法[3]对齐墩果酸进行定量分析。本试验首次采用hplc法对鹰不扑中齐墩果酸进行含量测定,为药材使用和质量控制提供科学依据。

1 仪器与试药

lc-10at日本岛津高效液相色谱仪(带紫外可见检测器),日本岛津uv-2001紫外分光光度计,威玛龙化学工作站。

齐墩果酸对照品(批号110709-200304,含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；鹰不扑由广西玉林制药有限责任公司提供,经广西玉林制药有限责任公司中药鉴定室鉴定为五加科植物黄毛?B木aralia decaisneana hance的干燥根。水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

lichrospher-c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(85∶15)[4]；流速：1.0 ml/min；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。理论板数按齐墩果酸计算应不低于3 000(色谱图见图1)。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取齐墩果酸对照品适量,加甲醇制成每1 ml含齐墩果酸59 μg的溶液,作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取鹰不扑粉末约0.5 g,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入甲醇-15%盐酸(4∶1)50 ml,称定重量,水浴加热回流5 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。

2.4 线性关系的考察

分别精密吸取齐墩果酸对照品溶液(59.0 μg/ml)1、2、4、6、8、10 ml,置于10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10 μl,连续进样2次,测定峰面积。以对照品进样量(c)为横坐标,峰面积(a)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：a＝2.618 6×105c－473.5,r＝0.999 8(n＝6),结果表明,齐墩果酸在0.059～0.59 μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取齐墩果酸对照品溶液,各重复进样6次,测定峰面积,结果齐墩果酸峰面积平均值为157 847,rsd＝0.58%(n＝6)。

2.6 重现性试验

取同一批号样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定,结果齐墩果酸峰面积平均值为120 822,rsd＝1.09%(n＝6)。表明该法重现性良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液,分别于配制后0、4、8、12、24 h依法测定峰面积,结果齐墩果酸rsd＝1.25%,表明样品溶液在24 h内基本稳定。

2.8 加样回收率试验

取已知齐墩果酸含量的鹰不扑粉末约0.2 g,精密称定,平行称取6份,各加入一定量的齐墩果酸对照品,按“2.3”项下方法制备供试液,按上述色谱条件测定。结果齐墩果酸平均加样回收率为95.4%,rsd＝0.67%,说明该方法准确可靠。见表1。 表1 齐墩果酸加样回收率试验结果（略）

2.9 样品测定

取鹰不扑样品,按“2.3”项下方法操作,在上述色谱条件下进行测定,结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)

3 讨论

齐墩果酸标准品在紫外分光光度计190～500 nm波长范围进行光谱扫描,其最大吸收波长为203 nm,但由于流动相在短波长处有末端吸收,为了减少干扰,提高信噪比,采取不同波长的色谱图进行比较。选择210 nm为检测波长,检测器响应值大,基线平稳,峰形好。

本试验考察不同的酸(硫酸、盐酸、醋酸)及酸度(5%、15%、30%)回流提取,其中15%盐酸甲醇液直接回流提取的水解效果最好,比一般水解过程(先甲醇提取再水解)简单,重现性好。首次采用hplc法对鹰不扑中齐墩果酸进行含量测定,精密度优于薄层扫描法,无需显色,结果稳定,方法简便。为用hplc法测定鹰不扑中齐墩果酸含量,提供了一种可借鉴的方法。

鹰不扑的传统药用部位为根,本试验考察广西不同地区的鹰不扑,齐墩果酸的含量相差不大,根与茎的含量也相差不大,可以用其茎作为药用部位,扩大药用范围。

【参考文献】

[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准[s].南宁：广西科学技术出版社,1990,95－96.

[2] 熊筱娟,高应东,邹盛勤.江西黄毛?B木生药学、化学成分及药理活性研究[j].安徽农业科学,2006,34(6)：1104－1106.

[3] 姚向超,邓杏灵,曾池清.薄层扫描法测定黄毛?B木中齐墩果酸的含量[j].江西中医学院学报,2005,17(3)：45－46.

[4] 韩 锋,王惠淑.hplc法测定舒肝灵胶囊中齐墩果酸的含量[j].天津中医药,2006,23(6)：67－68.