电针对阿尔茨海默病大鼠单核细胞趋化蛋白―1及基质细胞衍生因子―1的影响
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摘要：目的 观察电针对阿尔茨海默病（AD）大鼠海马组织及血清中趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）及基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的影响，并探讨其作用机制。方法 将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组，通过双侧海马区微量注射β-淀粉样蛋白（Aβ）构建AD模型，采用Morris水迷宫检测空间学习和记忆能力的变化，ELISA检测海马组织及血清中MCP-1及SDF-1水平。结果 与模型组比较，电针组可明显改善AD大鼠学习记忆能力（P
关键词：电针；阿尔茨海默病；趋化因子；基质细胞衍生因子-1；单核细胞趋化蛋白-1；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.05.014
中图分类号：R245.11 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）05-0043-04
对该病的发病机制尚未完全阐明，缺乏特效治疗药物及治疗手段。针对AD复杂的多因素致病，针灸治疗具有多层面、多途径、多靶点作用的优势，对AD具有较好的治疗作用。趋化因子是一类对白细胞游走和活化具有重要作用的蛋白超家族，除在炎性反应中起重要作用外，还参与调控白细胞的迁移。趋化因子最初的研究主要局限于免疫系统，近年来其在神经系统中的作用不断受到重视，有关AD患者体内趋化因子水平改变的报道日益增多，并且许多趋化因子也已被证实参与AD的发展。本研究在构建AD大鼠模型的基础上，以电针进行治疗，评价行为和学习记忆功能的改变，并检测海马组织及血清中基质细胞衍生因子-1（SDF-1）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达变化，明确电针对AD的治疗作用并初步探讨趋化因子在电针治疗AD中的作用机制。
1 实验材料
1.1 动物
雄性SPF级SD大鼠，体质量（200±50）g，上海中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（沪）2008-0016。
1.2 主要试剂与仪器
Aβ1-40购自美国Sigma公司，大鼠MCP-1及SDF-1 ELISA试剂盒购自上海研谨生物科技有限公司，BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物科技研究所，其他试剂均为分析纯。脑立体定位仪（江湾I型）为第二军医大学生理教研室研制，Morris水迷宫为中国医学科学院研制，微量注射器购自瑞士Hamilton公司，针灸针购自吴江市云龙医疗器械有限公司，电针治疗仪购自常州英迪电子医疗器械有限公司。
2 实验方法
2.1 造模
以双侧海马区微量注射Aβ的方式构建AD大鼠模型[2]。10%水合氯醛（3.5 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠后，将头颅固定在脑立体定位仪上，头皮备皮，消毒手术区皮肤，做正中切口暴露前囟，参照大鼠脑立体定位图谱[3]，以前囟为原点，向后3.5 mm、旁开2.0 mm为钻孔点，钻开对称2个孔，自脑表面进针3.0 mm至海马，用微量进样器抽取2 ?L（10 ?g）Aβ1-40（用无菌生理盐水将其稀释成5 ?g/?L，37 ℃孵育1周，使其变为聚集状态），每点注射Aβ1-40 1 ?L（5 ?g），缓慢进针，注射速度0.2 ?L/min，注射完毕，停针5.0 min后，以1.0 mm/min 速度缓慢拔针，明胶海绵填塞颅骨孔，缝合皮肤，术后肌肉注射青霉素8 万U，连续3 d，以防感染。假手术组注射等量生理盐水。
2.2 分组与治疗
7 d伤口完全愈合后，饮食正常，无肢体残疾，即开始治疗。实验分为正常组、假手术组、模型组、电针组，每组8只。电针组按实验动物大鼠穴位图谱[3]取“百会”（顶骨正中）及“肾俞”（第2腰椎下两旁），用普通28号13 mm不锈钢毫针，“百会”平刺约2.5 mm；双侧“肾俞”直刺约4 mm。连接G6805A型电针治疗仪，选择连续波，频率为20 Hz，强度以肢体抖动，且大鼠能安静耐受为度。针刺治疗每日1次，每次30 min，7 d为1个疗程，疗程间休息1 d，治疗4个疗程。正常组、空白组及模型组正常饲养，不予针刺治疗。
2.3 大鼠学习记忆能力检测
采用Morris水迷宫，通过测定各组大鼠逃避潜伏期和通过原平台的次数，来检测大鼠空间学习和记忆能力的变化[4]。连续5 d，记录逃避潜伏期。实验第6日撤除平台，将大鼠面向池壁从任一入水点放入水池，测试70 s内跨越原平台位置的次数和原象限停留时间。
2.4 海马组织和血清中基质细胞衍生因子-1和单核细胞趋化蛋白-1表达检测
Morris水迷宫检测结束后，眼眶后静脉丛穿刺采血并分离血清。大鼠处死后快速取出海马组织，提取总蛋白并以BCA法对蛋白进行定量，采用ELISA检测，操作严格按照试剂盒说明书进行。
3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。结果用―x±s表示，组间比较采用方差分析。P
4 结果
4.1 电针对大鼠学习记忆能力的影响
与正常组比较，自第2日开始，模型组大鼠平均逃避潜伏期时间显著延长（P