乙酰半胱氨酸注射液无菌方法学验证
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[摘 要]建立乙酰半胱氨酸注射液的无菌检查方法。方法：本试验参照《中国药典》2010年版二部无菌检查法进行试验。结果： 与对照组比较，含供试品的各滤筒中试验菌生长良好，并与各对照组中相应的菌落生长情况相同。结论：本品可采用此法进行无菌检验并结果准确可靠。
中图分类号：TM 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0023-01
乙酰半胱氨酸注射液临床主要应用于对乙酰氨基酚中毒及其他原因引起的肝衰竭的治疗。本文按照《中国药典》[1]2010年版二部附录Ⅺ H无菌检查法进行测定，并进行方法学验证。
1.材料与仪器
1.1 试验样品：
乙酰半胱氨酸注射液（规格： 20ml：4g，批号：140510，数量：160支/批，哈尔滨誉衡药业股份有限公司）
1.2 试验用菌株
大肠埃希菌44102第2代、金黄色葡萄球菌26003第2代、枯草芽孢杆菌63501第2代、生孢梭菌 64941第2代、白色念珠菌98001第2代、黑曲霉98003第3代。
1.3 试验用培养基
营养琼脂培养基 批号130916、玫瑰红钠琼脂培养基 批号111031、硫乙醇酸盐流体培养基 批号121015、改良马丁培养基 批号130603、营养肉汤培养基 批号111206、0.1%蛋白胨水溶液 批号130221、氯化钠 批号101217。
1.4 仪器
LDZX-75KBS立式压力蒸汽灭菌器-上海博迅实业有限公司医疗设备厂、DHG-9145A电热鼓风干燥箱-上海和呈仪器制造有限公司、LRH-250生化培养箱-上海一恒科技有限公司、DHP-9272电热恒温培养箱-上海一恒科技有限公司、HTY-2000B集菌仪-杭州泰林生物技术设备有限公司、SW-CT-2FD净化工作台-苏州净化设备有限公司、BSA2202S电子天平-德国赛多利斯股份公司、BSC-1100ⅡB2生物安全柜-北京东联哈尔仪器制造有限公司。
2.方法学验证
2.1 菌种接种
改良马丁琼脂培养基：称取2.1g，加水50ml；营养肉汤培养基：称取0.9g，加水50ml；改良马丁培养基：称取1.42g，加水50ml；硫乙醇酸盐流体培养基：称取1.46g，加水50ml。
接种：取黑曲霉斜面培养物至改良马丁琼脂培养基斜面上，于23～28℃培养5～7d；取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h；取生孢梭菌液体培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，于30～35℃培养18～24h；取白色念珠菌斜面培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24～48h。
2.2 验证试验
2.2.1培养基配制：营养琼脂培养基：称取4.8g，加水150ml；玫瑰红钠琼脂培养基：称取3.05g，加水100ml；硫乙醇酸盐流体培养基：称取29.25g，加水1000ml；改良马丁培养基：称取17.1g，加水600ml；0.1%蛋白胨水溶液：称取0.3g，加水300ml；0.9%氯化钠溶液：称取2.7g，加水300ml。
2.2.2菌液制备：取经30～35℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌液体培养物各1ml，分别加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍依次稀释，金黄色葡萄球菌至10-6，大肠埃希菌至10-7，生孢梭菌至10-7。取经23～28℃培养24～48h的白色念珠菌液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍依次稀释至10-5。取经培养5～7d的黑曲霉培养物，加3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，转移至另一试管，取1ml加至9ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍依次稀释至10-4。
2.2.3试验组：取供试品120支，每支取5ml，分别置6个滤筒中过滤（每筒20支），过滤后每筒加入菌悬液1ml，加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基100ml，分别于30～35℃和23～28℃培养5d，逐日观察。
2.2.4对照组：另取6个滤筒，分别加入1ml相应的试验菌，再加入相应的等量培养基，作为对照，按规定条件培养5d，逐日观察。
2.2.5供试品对照组：取供试品40支，每支取5ml，分别置2个滤筒中过滤（每筒20支）。过滤后再加入相应的等量培养基，作为对照，按规定条件培养5d，逐日观察。
阴性对照组：取0.1%无菌蛋白胨水溶液适量，加入相应的培养基，按规定条件培养5d，逐日观察。
3.结果
实验结果：
验证试验样品接种6株阳性菌的生长情况：硫乙醇酸盐流体培养基：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌试验组、对照组均为阳性，供试品对照组与阴性对照组为阴性；改良马丁培养基：白色念珠菌、黑曲霉试验组、对照组均为阳性，供试品对照组与阴性对照组为阴性。
验证试验用活菌计数结果：金黄色葡萄球菌74，大肠埃希菌67.5，枯草芽孢杆菌55，生孢梭菌29.5，白色念珠菌41，黑曲霉45.5。
4.结论
经方法学验证，依法检测，可有效检测乙酰半胱氨酸注射液的无菌检查，为控制产品质量提供检测依据。
参考文献
[1] 中国药典，2010年版二部