半红树玉蕊化学成分的研究

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[摘要] 该文对半红树玉蕊地上部分的化学成分进行了研究，运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、HPLC等方法从半红树玉蕊的甲醇冷浸提取物中分离得到12个化合物，利用理化常数测定和各种谱学 （NMR，MS） 数据分析等鉴定其结构分别为3-O-反式对-香豆酰马斯里酸（3β-p-E-coumaroymaslinic acid，1），顺式-careaborin （cis-careaborin，2），careaborin （3），马斯里酸 （maslinic acid，4），2α，3β，19α-三羟基-12-烯-24，28-齐墩果酸 （2α，3β，19α-trihydroxyolean-12-ene-24，28-dioic acid，5），3-O-顺式对-香豆酰科罗索酸（3β-p-Z-coumaroylcorosolic acid，6），科罗索酸 （corosolic acid，7），1α，2α，3β，19α-四羟基-12-烯-28-乌苏酸 （1α，2α，3β，19α-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid，8），19α-羟基熊果酸 （19α-hydroxyl ursolic acid，9），3α，19α-二羟基-12-烯-24，28-乌苏酸 （3α，19α-dihydroxyurs-12-en-24，28-dioic acid，10），委陵菜酸 （tormentic acid，11），3-羟基-7，22-二烯-麦角甾醇（3-hydroxy-7，22-dien-ergosterol，12）。化合物1～4，7～12均为首次从玉蕊属中分离得到的化合物。以上化合物对MCF-7（乳腺癌细胞株）和A549（人肺腺癌细胞）均无明显的细胞毒作用（IC50>50 mg・L-1）。

[关键词] 半红树玉蕊；化学成分；三萜类；细胞毒测试

[Abstract] To investigate the chemical constituents from Barringtonia racemosa， twelve compounds were isolated by chromatography methods and identified as 3β-p-E-coumaroymaslinic acid （1）， cis-careaborin （2）， careaborin （3）， maslinic acid （4）， 2α， 3β， 19α-trihydroxyolean-12-ene-24， 28-dioic acid （5）， 3β-p-Z-coumaroylcorosolic acid （6）， corosolic acid （7）， 1α， 2α， 3β， 19α-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid （8）， 19α-hydroxyl ursolic acid （9）， 3α， 19α-dihydroxyurs-12-en-24， 28-dioic acid （10）， tormentic acid （11）， 3-hydroxy-7， 22-dien-ergosterol（12） by the NMR and MS data analysis. Among them， compounds 1-4，7-12 were obtained from the genus Barringtonia for the first time. All the compounds didn′t show nocytotoxic activity against MCF-7 and A549 cell lines （IC50>50 mg・L-1）.

[Key words] Barringtonia racemosa；chemical constituents；triterpenes；cytotoxicity

doi：10.4268/cjcmm20161315

玉蕊Barringtonia racemosa系玉蕊科Lecythidaceae玉蕊属植物，俗名水茄{，棋盘脚。广泛分布于热带非洲、南亚、热带太平洋、澳大利亚北部以及我国台湾等地区，是一类很重要的热带木本植物[1]。本属有20个种，但在我国该属植物仅有一种，即玉蕊B.racemosa，其主要分布于海南和台湾。在民间，玉蕊的根可退热，果可止咳；能够有效治疗咳嗽、哮喘等症状，并对疝气具有一定的治疗作用。此外，还具有细胞毒活性和抗微生物，虫鱼毒性等生物活性[2]。玉蕊中主要含有三萜和二萜等化合物，另外还含有如双氢杨梅素，3，3′-二甲氧基鞣花酸，没食子酸，bartogenic acid和豆甾醇等化学成分[3-6]。本文通过采用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、HPLC等方法对玉蕊地上部分的甲醇提取物进行了分离鉴定，共得到12个化合物，通过理化常数测定及各种谱学 （NMR，MS） 数据分析等，鉴定了化合物分别为：3-O-反式对-香豆酰马斯里酸（3β-p-E-coumaroymaslinic acid，1），顺式-careaborin （cis-careaborin，2），careaborin （3），马斯里酸 （maslinic acid，4），2α，3β，19α-三羟基-12-烯-24，28-齐墩果酸 （2α，3β，19α-trihydroxyolean-12-ene-24，28-dioic acid，5），齐墩果酸 （oleanolic acid，6），科罗索酸 （corosolic acid，7），1α，2α，3β，19α-四羟基-12-烯-28-乌苏酸 （1α，2α，3β，19α-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid，8），19α-羟基熊果酸 （19α-hydroxyl ursolic acid，9），3α，19α-二羟基-12-烯-24，28-乌苏酸 （3α，19α-dihydroxyurs-12-en-24，28-dioic acid，10），委陵菜酸 （tormentic acid，11），3-羟基-7，22-二烯-麦角甾醇（3-hydroxy-7，22-dien-ergosterol，12）。化合物1～4，7～12均为首次从玉蕊属中分离得到的化合物。以上化合物对MCF-7（乳腺癌细胞株）和A549（人肺腺癌细胞）均无明显的细胞毒作用。

1 材料

Bruker-ARX-300和Bruker-ARX-600 型核磁共振光谱仪测定（TMS作内标），ESI-MS谱用LTQ Orbitrap Velos pro型质谱仪。分析和半制备型高效液相色谱仪为安捷伦1260型。柱色谱用硅胶（200～300目）均由青岛海洋化工厂生产，ODS柱所用ODS填料为天津市化学试剂工厂色谱技术开发公司生产，Sephadex LH-20为瑞士Pharmacia公司产品，柱色谱中所用试剂均为AR级，HPLC所用溶剂均为色谱纯，系国药集团化学试剂有限公司生产，氘代试剂由美国CIL公司生产。实验中所用药材于2013年采于海南东寨港红树林保护区，经郑希龙副研究员鉴定为玉蕊B.racemosa。

2 提取与分离

取干燥玉蕊4 kg，粉碎后，经甲醇冷浸提取（48 h×3次），合并提取液，减压回收溶剂。浸膏加适量水混悬分散，分别用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取各3次，萃取液浓缩，得氯仿部分（38.0 g），乙酸乙酯部分（5.0 g）和正丁醇部分（21.0 g）。将氯仿部分经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（100∶0～1∶1）进行梯度洗脱，得到10个组分（Fr.1～Fr.10）。Fr.2（5.0 g）再经硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯（100∶2～2∶1）进行梯度洗脱，得到化合物2（2.5 mg），3（1.2 mg），5（2.9 mg），7（1.5 mg），12（3 mg）。Fr.6经Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）柱色谱纯化，再经制备液相分离，流动相为35%乙腈，流速为2 mL・min-1，得到化合物1（2.0 mg），6（3.3mg）。Fr.8经Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）柱色谱纯化，再经制备液相分离，流动相为55%～90%甲醇，流速为2 mL・min-1，得到化合物4（2.1 mg），8（1.6 mg），9（1.9 mg），10（1.2 mg），11（2.8 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 641.9 [M+Na]+；1H-NMR （C5D5N，600 MHz）δ：8.03 （1H，d，J=15.9 Hz，H-7′），7.59 （2H，d，J=8.2 Hz，H-2′，6′），7.18 （2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.72 （1H，d，J=15.8 Hz，H-8′），5.49 （1H，br s，H-12），5.28 （1H，d，J=9.8 Hz，H-3），4.32 （1H，m，H-2）；13C-NMR （C5D5N，150 MHz）δ： 180.7 （C-28），168.3 （C-39），161.7 （C-34），145.3 （C-37），145.1 （C-13），131.0 （C-32，36），126.6 （C-31），122.6 （C-12），117.2 （C-33，35），116.5 （C-38），85.4 （C-3），66.7 （C-2），55.9 （C-5），48.7 （C-9），48.4 （C-1），47.0 （C-19），46.8 （C-17），42.6 （C-14），42.3 （C-18），40.2 （C-8），40.1 （C-4），38.8 （C-10），34.6 （C-21），33.6 （C-22，29），33.4 （C-7），31.3 （C-20），29.3 （C-23），28.6 （C-15），26.6 （C-27），24.3 （C-16），24.1 （C-30），24.0 （C-11），19.0 （C-6），18.6 （C-26），17.8 （C-25），17.1 （C-24）。根据上述波谱数据并与文献[7]对照，确定化合物1为3-O-反式对-香豆酰马斯里酸（3β-p-E-coumaroylmaslinic acid）。

化合物2 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 595.9 [M+Na]+；1H-NMR （CDCl3，600 MHz）δ：7.66 （2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′），6.84 （1H，d，J=12.6 Hz，H-7′），6.81 （2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′），5.84 （1H，d，J=12.6 Hz，H-8′），5.80 （1H，dd，J=3.1，8.1 Hz，H-15），4.80 （1H，dd，J=4.9，11.0 Hz，H-3）；13C-NMR （C5D5N，150 MHz）δ： 166.7 （C-39），158.0 （C-14），156.8 （C-34），143.4 （C-37），132.2 （C-32，C-36），127.4 （C-31），117.7 （C-38），116.9 （C-15），115.1 （C-33，C-35），81.2 （C-3），55.6 （C-5），49.1 （C-9），48.8 （C-18），41.2 （C-19），38.9 （C-8），37.9 （C-4），37.8 （C-13，C-22），37.5 （C-10），37.4 （C-1），36.6 （C-12），35.8 （C-17），35.1 （C-21），33.7 （C-16），33.3 （C-29），33.1 （C-7），29.9 （C-27），29.8 （C-28），28.8 （C-20），28.0 （C-23），25.9 （C-26），23.4 （C-2），21.3 （C-30），18.7 （C-6），17.5 （C-11），16.6 （C-24），15.5 （C-25）。根据上述波谱数据并与文献[8]对照，确定化合物2为cis-careaborin。

化合物3 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 595.9 [M+Na]+；1H-NMR （CDCl3，600 MHz）δ：7.66 （2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′），6.84 （1H，d，J=12.6 Hz，H-7′），6.81 （2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′），5.84 （1H，d，J=12.6 Hz，H-8′），5.80 （1H，dd，J=3.1，8.1 Hz，H-15），4.80 （1H，dd，J=4.9，11.0 Hz，H-3）；13C-NMR （C5D5N，150 MHz）δ： 167.3 （C-39），158.0 （C-14），157.5 （C-34），143.9 （C-37），129.9 （C-32，C-36），127.4 （C-31），116.9 （C-38），116.4 （C-15），115.8 （C-33，C-35），81.0 （C-3），55.7 （C-5），49.1 （C-9），48.8 （C-18），41.2 （C-19），39.8 （C-8），39.0 （C-4），37.9 （C-13），37.7 （C-22），37.6 （C-10），37.4 （C-1），36.7 （C-12），35.8 （C-17），35.1 （C-21），33.7 （C-29），33.3 （C-16），33.1 （C-7），29.9 （C-27），29.8 （C-28），28.8 （C-20），25.9 （C-26），23.6 （C-2），21.3 （C-30），18.7 （C-6），17.5 （C-11），16.8 （C-24），15.5 （C-25）。根据上述波谱数据并与文献[8]对照，确定化合物3为careaborin。

化合物4 白色无定形粉末 （氯仿）。ESI-MS m/z 495.6 [M+Na]+；1H-NMR （DMSO-d6，600 MHz）δ： 5.15 （1H，s，H-12），3.47 （1H，m，H-2），3.42 （1H，d，J=5.2 Hz，H-3），1.09 （3H，s，H-27），0.92 （3H，s，H-29），0.90 （3H，s，H-23），0.87 （6H，s，H-25，30），0.71 （3H，s，H-26），0.70 （3H，s，H-24）；13C-NMR （DMSO-d6，150 MHz）δ： 178.9 （C-28），144.0 （C-13），121.4 （C-12），82.3 （C-3），67.2 （C-26），54.8 （C-5），47.1 （C-1），46.9 （C-9），45.8 （C-17），45.5 （C-19），41.4 （C-18），40.9 （C-14），39.0 （C-4，C-8），37.7 （C-10），33.4 （C-21），32.9 （C-7），32.4 （C-22），32.2 （C-29），30.5 （C-20），28.9 （C-23），27.2 （C-15），25.7 （C-27），23.4 （C-30），23.1 （C-11），22.7 （C-16），18.1 （C-6），17.2 （C-26），17.0 （C-24），16.4 （C-25）。根据上述波谱数据并与文献[9]对照，确定化合物4为马斯里酸（maslinic acid）。

化合物5 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 541.7 [M+Na]+；1H-NMR （DMSO-d6，600 MHz）δ：5.23 （1H，br s，H-12），3.90 （1H，m，H-2），3.77 （1H，br s，H-18），2.75 （1H，d，J=9.5 Hz，H-3），1.28 （3H，s，H-23），1.24 （3H，s，H-27），0.87 （3H，s，H-25），0.85 （3H，s，H-29），0.84 （3H，s，H-30），0.68 （3H，s，H-26）；13C-NMR （DMSO-d6，150 MHz）δ： 179.2 （C-28），179.0 （C-24），143.5 （C-13），122.3 （C-12），82.3 （C-3），80.1 （C-19），66.7 （C-2），55.4 （C-5），53.3 （C-4），49.0 （C-1，C-9），46.8 （C-17），46.1 （C-18），43.2 （C-14），41.4 （C-8），38.9 （C-10），38.1 （C-7，C-22），34.9 （C-16，C-21），28.5 （C-15），28.1 （C-20，C-29），27.9 （C-23），27.3 （C-30），25.9 （C-11），24.3 （C-27），21.1 （C-6），16.8 （C-26），14，6 （C-25）。根据上述波谱数据并与文献[10]对照，确定化合物5为2α，3β，19α-三羟基-12-烯-24，28-齐墩果酸 （2α，3β，19α-trihydroxyolean-12-ene-24，28-dioic acid）。

化合物6 白色无定形粉末 （氯仿），ESI-MS m/z 641.4 [M+Na]+；1H-NMR （DMSO-d6，600 MHz） δ： 8.17 （2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′），7.17 （2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），6.95 （1H，d，J=12.9 Hz，H-7′），6.11 （1H，d，J=12 Hz，H-8′），5.48 （1H，br s，H-12），5.23 （1H，d，J=9.8 Hz，H-3），4.28 （1H，m，H-2），1.20 （3H，s，H-27），1.06 （3H，s，H-24），1.04 （3H，s，H-23），0.99 （3H，s，H-26），0.98 （3H，d，J=6.6 Hz，H-30），0.96 （3H，d，J=6.6 Hz，H-29）。13C-NMR （C5D5N，150 MHz） δ：180.3 （C-28），167.5 （C-9′），160.8 （C-4′），144.0 （C-7′），139.7 （C-13），134.1 （C-2′，6′），127.0 （C-1′），125.7 （C-12），117.4 （C-8′），116.2 （C-3′，5′），85.3 （C-3），66.6 （C-2），55.9 （C-5），53.8 （C-18），49.0 （C-1），48.4 （C-17），48.3 （C-9），42.9 （C-14），41.4 （C-21），40.3 （C-8），40.0 （C-4），39.8 （C-19，20），38.6 （C-10），37.8 （C-22），33.7 （C-7），29.4 （C-23），29.0 （C-15），25.2（C-16），24.3 （C-27），24.0 （C-11），21.8 （C-30），19.0 （C-6），18.6 （C-26），17.9 （C-29），17.8 （C-25），17.2 （C-24），根据上述波谱数据并与文献[11]对照，确定化合物6为3-O-顺式对-香豆酰科罗索酸 （3β-p-Z-coumaroylcorosolic acid）。

化合物7 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 495.8 [M+Na]+；1H-NMR （DMSO-d6，600 MHz）δ：5.47 （1H，t，J=3.1 Hz，H-12），4.12 （1H，m，H-2），3.42 （1H，d，J=9.4 Hz，H-3），2.64 （1H，d，J=11.3 Hz，H-18），1.29 （3H，s，H-27），1.22 （3H，s，H-26），1.09 （3H，s，H-23），1.05 （3H，s，H-24），0.99 （3H，s，H-25），0.99 （3H，d，J=6.3 Hz，H-30），0.96 （3H，d，J=6.3 Hz，H-29）；13C-NMR （C5D5N，150 MHz） δ： 180.4 （C-28），139.8 （C-13），125.9 （C-12），84.1 （C-3），68.9 （C-2），56.2 （C-5），53.8 （C-18），48.4 （C-9，C-17），48.3 （C-1），42.9 （C-14），40.4 （C-8），40.2 （C-19），39.8 （C-4），39.7 （C-20），38.3 （C-10），37.8 （C-22），33.8 （C-7），31.4 （C-21），29.7 （C-23），29.0 （C-15），25.2 （C-16），24.2 （C-11），24.1 （C-27），21.8 （C-30），19.2 （C-6），18.1 （C-26），17.9 （C-25），17.8 （C-24），17.2 （C-29）。根据上述波谱数据并与文献[12]对照，确定化合物7为科罗索酸（corosolic acid）。

化合物8 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 527.6 [M+Na]+；1H-NMR （DMSO-d6，600 MHz）δ：5.12 （1H，br s，H-12），3.46 （1H，dd，J= 9.3，2.8 Hz，H-2），3.28 （1H，d，J=9.3 Hz，H-3），3.22 （1H，d，J=2.8 Hz，H-1），1.28 （3H，s，H-23），1.07 （3H，s，H-27），0.89 （3H，s，H-25），0.86 （3H，s，H-24），0.82 （3H，d，J=6.5 Hz，H-30），0.79 （3H，s，H-29），0.70 （3H，s，H-26）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 176.5 （C-28），137.7 （C-13），128.0 （C-12），79.1 （C-3），78.4 （C-2），71.7 （C-19），69.9 （C-1），53.2 （C-18），48.6 （C-5），47.6 （C-17），47.3 （C-9），47.0 （C-8），42.7 （C-14），41.5 （C-20），41.1 （C-4），40.1 （C-10），37.6 （C-22），33.0 （C-7），28.8 （C-23），28.2 （C-15），26.9 （C-29），26.5 （C-21），26.1 （C-11），25.4 （C-27），24.1 （C-6），21.9 （C-30），18.0 （C-26），17.1 （C-24），16.4 （C-16），12.4 （C-25）。根据上述波谱数据并与文献[13]对照，确定化合物8为1α，2α，3β，19α-四羟基-12-烯-28-乌苏酸（1α，2α，3β，19α-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

化合物9 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 495.5 [M+Na]+；1H-NMR （DMSO-d6，600 MHz） δ：5.15 （1H，br s，H-12），3.73 （1H，br s，H-3），2.37 （1H，br s，H-18），1.28 （3H，s，H-27），1.23 （3H，s，H-29），1.19 （3H，s，H-23），1.07 （3H，s，H-26），0.86 （3H，s，H-24），0.84 （3H，d，J=6.5 Hz，H-30），0.72 （3H，s，H-25）；13C-NMR （DMSO-d6，150 MHz）δ： 179.0 （C-28），141.8 （C-13），126.6 （C-12），76.9 （C-3），71.6 （C-19），56.3 （C-5），54.9 （C-18），53.3 （C-17），47.7 （C-9），47.0 （C-20），45.9 （C-14），41.4 （C-8），41.2 （C-4），40.0 （C-22），37.3 （C-1），36.9 （C-10），33.3 （C-7），29.0 （C-15），28.9 （C-23），28.1 （C-2），26.4 （C-29），26.0 （C-21），25.3 （C-16），24.9 （C-27），23.8 （C-11），23.4 （C-6），20.3 （C-26），16.7 （C-30），16.3 （C-24），14.0 （C-25）。根据上述波谱数据并与文献[14]对照，确定化合物9为19α-羟基熊果酸（19α-hydroxyl ursolic acid）。

化合物10 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 525.5 [M+Na]+；1H-NMR （DMSO-d6，600 MHz）δ：5.16 （1H，br s，H-12），3.74 （1H，br d，H-3），2.36 （1H，s，H-18），1.28 （3H，s，H-23），1.26 （3H，s，H-27），1.06 （3H，s，H-29），0.83 （3H，d，J=6.7 Hz，H-30），0.82 （3H，s，H-25），0.71 （3H，s，H-26）；13C-NMR （DMSO-d6，150 MHz）δ： 179.5 （C-28），178.9 （C-24），139.0 （C-13），127.4 （C-12），77.2 （C-19），72.1 （C-3），55.9 （C-18），53.7 （C-23），49.1 （C-4），48.5 （C-17），47.4 （C-9），46.5 （C-20），41.8 （C-14），41.7 （C-8），39.1 （C-22），37.7 （C-10），37.4 （C-1），33.4 （C-7），28.6 （C-15），28.3 （C-2），26.8 （C-29），26.4 （C-21），25.7 （C-16），24.4 （C-23），24.2 （C-27），23.8 （C-11），20.3 （C-6），17.0 （C-26），16.7 （C-30），13.8 （C-25）。根据上述波谱数据并与文献[15]对照，确定化合物10为3α，19α-二羟基-12-烯-24，28-乌苏酸（3α，19α-dihydroxyurs-12-en-24，28-dioic acid）。

化合物11 白色无定形粉末（氯仿）。ESI-MS m/z 511.7 [M+Na]+；1H-NMR （DMSO-d6，600 MHz） δ：5.16 （1H，br s，H-12），3.42 （1H，dt，J=4.3，11 .0 Hz，H-2），2.74 （1H，d，J=9.3 Hz，H-3），2.59 （1H，s，H-18）。13C-NMR （DMSO-d6，150 MHz）δ： 179.1 （C-28），138.7 （C-13），126.6 （C-12），82.3 （C-3），71.6 （C-19），67.2 （C-2），54.8 （C-5），53.2 （C-18），47.0 （C-17），46.9 （C-9），46.7 （C-1），41.4 （C-14），41.4 （C-20），38.9 （C-8），37.8 （C-4），37.6 （C-10），37.3 （C-22），32.6 （C-7），28.3 （C-23），28.1 （C-15），26.4 （C-29），26.0 （C-21），25.2 （C-16），24.0 （C-27），23.2 （C-11），18.2 （C-6），17.1 （C-26），16.7 （C-30），16.3 （C-24，C-25）。根据上述波谱数据并与文献[16]对照，确定化合物11为委陵菜酸（tormentic acid）。

化合物12 无色针晶（氯仿）。ESI-MS m/z 421.4 [M+Na]+；1H-NMR （CDCl3，600 MHz）δ：5.35 （1H，t，J=2.4 Hz，H-7），5.15 （1H，dd，J=8.4，15.0 Hz，H-23），5.02 （1H，dd，J=9.0，15.0 Hz，H-22），1.02 （3H，d，J=6.6 Hz，H-21），1.01 （3H，s，H-19），0.85 （3H，d，J=6.6 Hz，H-28），0.81 （3H，d，J=7.8 Hz，H-27），0.80（3H，d，J=6.6 Hz，H-26），0.70 （3H，s，H-18）。根据上述波谱数据并与文献[17]对照，确定化合物12为麦角甾-7，22-二烯-3β-醇（3-hydroxy-7，22-dien-ergosterol）。

4 抗肿瘤活性

将A549和MCF7 2种肿瘤细胞于37 ℃，5%CO2及饱和湿度环境下培养于含10%胎牛血清的完全培养基，细胞呈对数增长时铺板，调整细胞浓度至1×104个/mL接种200 μL于96孔培养板。待贴壁生长24 h后，加入检测样品及阳性对照药ADM（1 g・L-1，2 μL），阴性对照组和空白组同时加入等体积含1% DMSO的生理盐水，样品测试终浓度分别为50，10，2，0.4，0.08 mg・L-1。与细胞共同孵育72 h后吸弃上清，加入终浓度0.5 g・mL-1 MTT溶液，继续培养4 h。吸弃上清，每孔加入150 μL DMSO，置e床上振荡10 min，充分溶解后于酶标仪570 nm处测量吸光值A。细胞抑制率计算方法是：细胞抑制率=[（A对照-A空白）-（A样品-A空白）] /（A对照-A空白）×100%。

采用MTT法，对分离得到的化合物进行了抗肿瘤活性的测试。结果显示这些化合物对A549和MCF7细胞在所测试的终浓度范围内均无显著的抑制作用（细胞半抑制率IC50>50 mg・L-1）。

5 讨论

本文采用各种色谱分离方法，从玉蕊中得到11个三萜类化合物和1个甾醇类化合物，并经过化合物的理化性质与光谱数据鉴定了化学结构。由于玉蕊中的主要成分为三萜类化合物，课题组对这类化合物的肿瘤细胞毒活性进行了评价。五环三萜类化合物在抗炎、抗菌和抗病毒、抗肿瘤、护肝等方面具有广泛的药理活性[18]，但在本实验中，玉蕊中所分离到的三萜类化合物主要为齐墩果烷和乌苏烷型，它们对肿瘤细胞A549和MCF-7并未显示有显著的细胞毒抑制作用。有关玉蕊中三萜类化合物在其他方面的活性情况，有待于进一步研究。

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