冰冻切片的制作体会

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摘要：目的 ：探讨在冰冻切片过程中针对不同组织样本采取的相应对策，以达到最佳的切片效果。方法： 回顾分析我院自2011年以来148例术中快速冰冻切片的制作方法。针对不同的组织样本，选择的冰冻温度与时间不同，包埋与切片的也方法不同。结果： 切片厚薄均匀完整，无皱褶，核染色清晰，细胞形态完整，核浆对比鲜明。结论： 冰冻温度与时间、组织包埋、切片方法等是制作高质量冰冻切片的关键。

关键词：冰冻切片；样本；制作；效果

术中快速冰冻切片检查是病理科的一项常规工作，但同时又是一项非常重要和高风险的检查。它是在低温情况下将新鲜组织冷冻到一定硬度，然后再进行切片的一种方法【1】。它能对临床治疗提供积极的指导意义，为手术医生决定手术方式和范围提供依据。而高质量的冰冻切片又是这项检查的首要条件。所以，能否制作一张优质的冰冻切片就显得尤为重要。我科自2011年引进英国珊顿冰冻切片机以来，我共完成制作冰冻切片148例。

1 材料与方法

1.1材料

临床送检的各类手术中新鲜组织，不加任何固定液，直接送至病理科。其中甲状腺25例、子宫肿瘤24例、卵巢肿瘤22例、乳腺肿瘤51例、肺肿瘤4例、胃肠道肿瘤5例、其它17例。

1.2方法

采用手术切除后新鲜标本，取一块1.5*1.5*0.3cm左右【2】的有病变组织块，去除多余的脂肪组织、钙化物、坏死组织和骨组织。取材速度要快，避免取材器械和取材台上有水接触，用干纱布把组织上的血液和液体吸干，避免冰冻切片出现过多的冰晶现象【3】。然后直接放在冷冻托盘上，滴加OCT（聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物）或普通胶水。根据要切片的组织类型设定冰冻温度和冰冻时间。切片厚度以5微米为佳，然后迅速粘片，投入AF液（40%甲醛与95%酒精1：4的混合液）中固定1min左右。苏木素染色，水洗，分化，返蓝，伊红，梯度酒精（从低浓度到高浓度）脱水，透明，封固。

2. 结果

切片质量较好，厚薄均匀完整，无皱褶，核染色清晰，细胞形态完整，核浆对比明显，符合冰冻诊断要求。

3 讨论

随着现代临床外科技术的突飞猛进对术中快速冰冻切片的要求越来越高，病例也越来越多，送检的组织也是千差万别。快速、高质量的冰冻切片是确保术中诊断科学性和可靠性的重要保证【4】。这就要求病理科的医生和技术员具有过硬的技术，能在短时间内拿出令人满意的结果。因此我总结了一些在平时制片过程中对于温度与时间、包埋、切片的经验和体会，与大家共鉴。

3.1温度与时间

冰冻切片机的箱体应24h处于待机状态，我们平时一般设定在-25℃。温度过低时，组织变为酥脆，切片时容易破碎甚至粉末状。温度过高时，组织呈粘稠状，切片易卷曲甚至切不成片。因根据所需冰冻组织类型分别对待。作者经验甲状腺、淋巴结、肝、脾、肾等最佳温度控制在-20℃左右，冷冻1～2min。子宫、乳腺、胃肠等温度控制在-25℃左右，冷冻2min左右。含脂肪多的组织、软组织等温度控制在-30℃左右，冷冻3min以上。当然机器的新旧和环境温度的变化等也会带来一定的影响，应酌情对待。

3.2包埋

选择合适的包埋剂，现在常用的包埋剂是OCT，但也有单位用的是普通的胶水，作者单位使用胶水包埋效果很好，而且有资料也报道胶水与OCT有相识的物理特性【5】，可以替代OCT，节省成本。这就要求在包埋时要先冷冻胶水，等胶水快凝固时再加入组织块，可以防止组织因吸水而使细胞中有冰晶出现。对于小组织，我们要求先用适量包埋剂在标本托上做一个胶水的底托，然后把小组织根据切面放好，再滴加少量包埋剂在组织上，迅速冷冻。对于像囊壁样的长条组织，可以像卷纸一样，把组织盘起来，垂直放在标本托上，使囊壁的层次分明，利于切片和镜检。包埋时要根据组织的大小，选择大、中、小合适的标本托，组织块要包埋平整，尽量放在冷冻托的中央位置。总之，包埋的重要性和技术要领是每个技术员都必须心领神会的。

3.3切片

当冷冻包埋剂发白变硬后，就可以开始切片了，更换锋利的刀片，清洁防卷板和调整防卷板与切片刀的角度（作者的经验一般为5度），防止切片卷缩。切片时用力均匀，厚度5微米，过薄易造成组织皱缩和镜下核细胞碎裂【6】，过厚容易造成组织掉片。如遇到带有脂肪组织的或软组织等难以切片的，可以用冷冻锤再次冷冻组织延长冷冻时间或增加冷冻切片厚度到6-8微米。尽量修面暴露组织至最大面，有包膜的一定要切完整，小结节或重要病变部位要切到位，必要时可多切几个面【7】，防止因为没切到位而发生漏诊，也可以多粘几张玻片以便挑选备用。粘片时玻片要干净，防止掉片，容易掉片的组织可以使用涂胶片，动作要快，避免因动作慢而使切片有皱褶，粘不上片等情况发生。切片时还要注意组织的包埋方向，切片方向由易到难，由粘膜面向浆膜面，必要时可以转动冷冻的标本托，以利于制片。对于冷冻时间过长而使组织变脆的，可以用带乳胶手套的手指轻触组织，使其稍稍回温。

中华医学会中规定完成冰冻HE染色切片制备通常时间为20～25min【8】，在如此短的时间内拿出一张完美的冰冻切片，不仅要求技术员有精湛的技术，还要有高度的责任心和精益求精的态度。细节决定成败，多注意制片过程中的各个环节和不同组织成分的特性。理论联系实际，认真仔细的解决遇到的各种问题，在不断摸索中总结和改进，才能保证冰冻切片的完整、优良。

参考文献：

[1] 王伯云，李玉松，黄高升，等。病理学技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：88-89.

[2] Bancroft JD.组织学技术的理论与实践[M].6版.北京：北京大学医学出版社，2010：86.

[3] 许平.快速冰冻切片制备方法的改进[J].郑州大学学报（医学版），2010，3（2）：241.

[4] 邴鲁军，高英茂，郭雨霁，等.冰冻切片常遇到的问题及解决对策[J].医学信息，2006，19（9）：1631-1633.

[5] 高艳.冰冻切片的制作方法讨论[J].云南医药，2005，26（4）：363-364.

[6] 王永军，王珩，刘世正，等.不同组织冰冻切片的体会[J].临床与病理学杂志，2010，26（1）：114.

[7] 崔京淑.冰冻切片的制作及常见问题对策[J].吉林医学，2009，30（17）：120.

[8] 中华医学会.临床技术操作规范，病理学分册[M].京：人民军医出版社，2004：10-11.