不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量测定

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作者：曲欢欢,李白雪,燕菲,孙文基

【摘要】 目的 考察不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量。方法 采用hplc-pda法,以diamonsil-c18(4.6 mm×250 mm,5 μm)为色谱柱,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为1 ml/min,检测波长270 nm。结果 连翘果实中连翘酯苷的含量远高于金钟花,金钟花果实中不含连翘苷。结论 不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量有较大差别,金钟花不应混作连翘使用。

【关键词】 连翘；金钟花；连翘酯苷；连翘苷；含量测定

key words：forsythia suspensa；forsythia viridissima lindl；forsythiaside；forsythin

连翘是历史悠久、使用广泛的一种中药,具有清热解毒、消肿散结的功效。我国药典收载的连翘为木犀科连翘属植物连翘forsythia suspense (thunb.)vahl的干燥果实,主产于山西、河南、陕西[1]。对全国大部分地区使用的商品连翘调查发现,在少数地区有将同属植物金钟花f.viridissima lindl.的果实混作连翘使用现象[2]。另外,近几年在连翘的主产区皆出现了“抢青”现象,产区“采青”时间过长,采收混乱,造成连翘品质差异较大,严重影响了连翘的质量和产量[3]。基于上述现象,本研究比较了不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量,为中药连翘的质量控制提供理论依据。

1 材料

1.1 仪器与试剂

美国beckman高效液相色谱仪,125型泵,168型pda检测器,32karat色谱工作站；hamilton微量进样器(hamilton公司)；微孔滤膜φ＝13 mm,0.45 μm(天津市色谱科学技术公司)；ycq-300型超声波清洗器(上海凯波超声设备有限公司)。甲醇为色谱纯,水为双蒸水并经0.45 μm水系滤膜过滤。

1.2 样品

连翘酯苷、连翘苷对照品均为自行分离精制,并经uv、ir、nmr鉴定结构,hplc检测,面积归一化法计算纯度,均大于99%。选西安医学院种植的连翘和金钟花为样株(经西北大学生命科学学院王亚洲副教授鉴定为forsythia suspensa(thumb.) vahl和f.viridissima lindl.,果实具体采收时间见表1。50 ℃干燥至恒重后,研成粉末,过2o目筛,备用。表1 连翘、金钟花果实样品采集情况(略)

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：diamonsil-c18(5 μm,4.6 mm×250 mm)。流动相：a-水,b-甲醇；b相洗脱梯度：0～14 min,34.6%；14～15 min, 34.6%～43.5%；15～23 min,43.5%；23～24 min,43.5%～45%；24～34 min,45%；34～36 min,45%～80%；36～40 min,80%；流速：1 ml/min。柱温：室温28 ℃；灵敏度0.02 aufs；检测波长270 nm。理论塔板数以连翘酯苷计应不低于3 300,以连翘苷计应不低于7 600。色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取连翘酯苷和连翘苷对照品9.86、4.40 mg置于10 ml量瓶中,用60%甲醇定容至刻度,置于冰箱中(4 ℃)保存备用。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取不同采收期连翘、金钟花果实的干燥粉末各约1.000 g置于具塞三角瓶中,精确加入甲醇30 ml,精密称质量,超声提取30 min后,用甲醇补足质量,加20 ml双蒸水,混匀,用微孔滤膜(4.5 μm)过滤,作为供试品溶液。

2.4 标准曲线及线性范围的考察

精密吸取上述混合对照品溶液3、5、10、20、40、50 μl,进样测定,按上述色谱条件测定峰面积,按外标法以进样量x(μg)对峰面积y进行回归,得连翘酯苷和连翘苷的回归方程,分别为：y＝582 121x－816 019,r＝0.999 7；y＝580 793x－33 182,r＝0.999 8。结果表明,连翘酯苷进样量在2.96～49.30 μg、连翘苷进样量在1.32～22.00 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 检测限和定量限测定

连翘酯苷的检测限(s/n＝3)为18.72 ng/mg,定量限(s/n＝10)为62.41 ng/ml；连翘苷的检测限(s/n＝3)为13.74 ng/ml,定量限(s/n＝10)为45.79 ng/ml。

2.6 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液20 μl,连续进样6次,测定峰面积,结果连翘酯苷、连翘苷的rsd分别为1.20%、1.04%。

2.7 重复性试验

取同一连翘果实(lq-1)样品6份,制备供试品溶液,各取20 μl进样,测定峰面积,计算,连翘酯苷、连翘苷的rsd分别为2.00%、0.68%。

2.8 稳定性试验

精密吸取混合对照品溶液20 μl分别于配制后的0、4、8、16、24、48 h内进样,测定峰面积。计算连翘酯苷、连翘苷的rsd分别为1.61%、1.96%。结果表明,对照品溶液在48 h内稳定。

2.9 加样回收率试验

准确称取同一连翘果实(lq-1)样品6份,其中5份分别定量加入连翘酯苷、连翘苷的混合对照品溶液,待自然挥干后,按供试品溶液制备方法操作,并按上述色谱条件测定峰面积,计算连翘酯苷、连翘苷的平均回收率分别为100.79%、 100.31%,rsd分别为0.33%、0.36%。

2.10 样品中连翘酯苷、连翘苷的含量测定

取连翘各部位的干燥粉末,按供试品溶液制备方法操作,按照色谱条件测定峰面积,以外标法计算含量,结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)

3 讨论

3.1 检测波长的选择

采用二极管阵列检测器对检测波长进行了考察,分别提取并观察230、254、270、280、324、365 nm波长处的色谱图[4]。结果发现230、254、280 nm处其他物质的吸收较强,干扰较大,324、365 nm波长处干扰较小,但连翘苷无吸收,而270 nm处4个待检测物质的吸收峰峰形较好且其他物质的吸收较弱,干扰较少,结果较为准确。故本试验中选择了270 nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择

试验先后选择了乙腈-水、甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸流动相体系,从分离情况、出峰时间以及对色谱柱的消耗程度等综合分析,最终选择甲醇-水梯度洗脱。

4 结论

试验结果表明,连翘和金钟花虽为同属植物,但金钟花果实中连翘酯苷的含量远低于连翘果实,而且不含有连翘苷,因此,将金钟花混作连翘使用是不合适

【参考文献】

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.117－118.

[2] 李晓燕.中药连翘及其几种类似品的鉴别[j].中草药,2000,(6)：463－466.

[3] 李卫健,李先恩.连翘果实干物质与有效成分积累规律研究[j].中草药, 2006,37(6)：921－924.

[4] 张 杲,李发荣,段 飞,等.不同采收期连翘叶中连翘苷、连翘酯苷和芦丁的含量测定[j].天然产物研究与开发,2005,17(6)：790－793.