阿莫西林/舒巴坦匹呋酯匹呋酯片剂生物等效性测定

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作者：郁继诚，张菁，曹国英，施耀国

【摘要】 目的 研究国产阿莫西林/舒巴坦匹呋酯（1：1）片剂在22名男性健康志愿者中的生物等效性。方法 22名健康志愿者分别双交叉空腹口服国产阿莫西林1000mg/舒巴坦匹呋酯1000m剂（国产品）和对照品进口阿莫西林1000mg/舒巴坦匹呋酯1000m剂（进口品）各一次。用高效液相色谱法测定血浆中的浓度。采用双向单侧t检验进行生物等效性评价。结果 22名受试者单剂空腹口服国产品和进口品后的体内过程均符合血管外一室模型。口服国产品和进口品后，阿莫西林实测平均高峰血药浓度(Cmax)分别为（12.48±3.05）mg/L和（10.86±2.75）mg/L，达峰中位时间（Tmax）分别为1.5（1.0，2.0）h和2.0（1.0，4.0）h，平均药时曲线下面积 (AUC0～∞) 分别为（33.42±7.58）h·mg/L和（32.71±7.18）h·mg/L；舒巴坦匹呋酯实测平均高峰血药浓度(Cmax)分别为（8.44±2.43）和（9.20±3.00）mg/L，达峰中位时间（Tmax）分别为2.0（1.0，5.0）h和2.0（0.75，5.0）h，平均药时曲线下面积 (AUC0～∞) 分别为（35.31±10.81）h·mg/L和（36.52±12.94）h·mg/L。对国产片剂与进口片剂中阿莫西林和舒巴坦匹呋酯的Cmax、AUC0～8和AUC0～∞对数值进行方差分析，结果除国产品与进口品中阿莫西林Cmax对数值在两制剂间差异具统计学意义外(P＜0.05)、其他参数在两制剂间、试验阶段间、服药顺序间的差异均无统计学意义(P＞0.05)。但在服药顺序组中受试者间差异具统计学意义(P＜0.05)，国产品与进口品相比，制剂中阿莫西林相对生物利用度为(102.47±9.70)％。 舒巴坦匹呋酯相对生物利用度为(98.61±14.91)％。结论 受试国产片剂与对照进口片剂具生物等效性。

【关键词】 阿莫西林/舒巴坦；生物等效性

The evaluation of bioequivalence of amoxycillin/sulbactum pivoxil

【Abstract】 Objective To study the bioequivalence of amoxycillin/sulbactum pivoxil.Methods Twenty two normal volunteers were enrolled in a randomized crossover study. Each volunteer was given orally a single dose of 1000mg domestic amoxycillin/sulbactum pivoxil (tested preparation) or 1000mg imported amoxycillin/sulbactum pivoxil (reference preparation) in empty. The plasma concentrations were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) . Two one-sided t-test was used to evaluate the bioequivalence.Results The concentration-versus-time data in both groups were fitted to a one-compartment model. The pharmacokinetic parameters of amoxycillin in domestic and imported tablets were : Cmax (12.48±3.05)mg/L and (10.86±2.75)mg/L; Tmax 1.5 (1.0～2.0 )h and 2.0 (1.0～4.0 )h ; AUC0∝ (33.42±7.58)h·mg/L and (32.71±7.18) h·mg/L，respectively. The pharmacokinetic parameters of sulbactum in domestic and imported tablets were:Cmax (8.44±2.43)mg/L and (9.20±3.00)mg／L ; Tmax 2.0 (1.0～5.0 )h and 2.0 (0.75～5.0 )h ; AUC0∝ (35.31±10.81)h·mg/L and (36.52±12.94) h·mg/L ，respectively. Analysis of variance (ANOVA) was used to analysed the logarithm of Cmax， AUC08， AUC0∝ of amoxycillin and sulbactum pivoxil in the two preparations . The difference of all the parameters between the two tablets， test phases， administration sequence had no statistical significance (P＞0.05) ，except the difference of Cmax between the two preparations (P＜0.05) . But there was statistical difference among the participants in administration sequence (P＜0.05). Compared with the imported!tablets ，the relative bioavailability of amoxycillin and sulbactum pivoxil in domestic tablets were (102.49±9.70)% and (98.61±14.91)%， respectively.Conclusion Domestic and imported amoxicilin/sulbactum pivoxil were bioequivalent.

【Key words】 amoxicilin/sulbactum；bioequivalence

阿莫西林/舒巴坦匹呋酯为阿莫西林加入β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦的衍生物（舒巴坦匹呋酯）复合制剂，舒巴坦匹呋酯改善了舒巴坦口服吸收差的缺点，但其必须在人体肠道酯酶的作用下分解成舒巴坦才能发挥作用［1～3］。国外仅有阿根廷Bago公司生产阿莫西林/舒巴坦匹呋酯复方口服制剂，上海四药有限公司研制了国产阿莫西林/舒巴坦匹呋酯（1：1配比）片剂，获药政部门批准进行人体生物等效性测定，其临床试验方案经华山医院伦理委员会批准后在我所进行了生物等效性测定。

1 资料与方法

1.1 受试者 健康男性志愿者按临床试验方案中入选标准及排除标准筛选受试者。所有志愿者于筛选时详细询问病史及用药史无殊后，进行全面体格检查、青霉素皮试以及血、尿常规，血生化等实验室检查。经筛选合格的22名受试者在详细了解受试药物的特性、药物试验的全过程、可能发生的不良事件以及受试者的各种权利与义务，并表示理解后签署书面知情同意书。受试者平均年龄（24.23±2.91）岁，平均体重（64.27±5.40）kg，平均身高（173.30±5.86）cm。

1.2 药品

1.2.1 受试者用药品 受试品：阿莫西林/舒巴坦匹呋酯片剂（1：1），每片含阿莫西林250mg及舒巴坦匹呋酯250 mg，（以下简称国产品)，批号010903。上海四药有限公司提供。对照品：阿莫西林/舒巴坦匹呋酯片剂（1：1），每片含阿莫西林250mg及舒巴坦匹呋酯250 mg，（以下简称进口品），批号300971－2。阿根廷拜克（Bago）公司产品。

1.2.2 药物浓度测试用标准品 (1)阿莫西林：批号：0409－9907，含量: 84.5%。(2)舒巴坦匹呋酯：批号：0430－200002，含量: 92.0%。中国药品生物制品检定所标定。

1.3 给药剂量及方法 22名受试者按随机表随机分为两组，分别接受两次给药，即每名受试者随机先后分别接受国产品和进口品各一次，均为单剂空腹口服阿莫西林1000mg/舒巴坦匹呋酯1000mg。受试者于受试前一日进入受试场所，当晚10时后禁食，受试当日晨经主要生命体征检查合格和青霉素皮试阴性后空腹口服国产品或进口品，每次服药后3h进统一早餐。服药时饮水200ml。两次试验交叉进行，间隔1周。

留取受试者服药前和服药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、7和8h血标本各6ml，置于含肝素的试管中，立即离心10min（4℃），取血浆分装3份，放置-80℃冰箱保存待测。

定时观察并记录受试者服药后8h内生命体征，观察受试者服药后出现的所有不良事件，记录于记录报告表（CRF）中作安全性评价。每次给药前及给药后24h留取血、尿标本进行实验室检查。所有结果均填入CRF中。

2 材料及方法

2.1 仪器设备 (1)Waters Alliance 2690型系列高效液相色谱仪，包括UV2487型紫外检测仪，Millennium32数据处理系统以及DELL微机等；(2)Millipore 纯水系统；(3)METTLER AE240 分析天平。

2.2 试剂 甲醇：高效液相色谱纯，Caledon实验有限公司；乙腈：高效液相色谱纯，飞世尔(Fisher)科学世界公司；四丁基氢氧化铵水溶液(10%)：分析纯， 上海试剂一厂；磷酸：分析纯，苏州振亚化工厂；磷酸二氢钾及磷酸氢二钾：分析纯，汕头金砂化工厂；二氯甲烷：分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司。

2.3 血药浓度测定及计算方法 以高效液相色谱法分别测定血浆标本中阿莫西林和舒巴坦浓度。阿莫西林测试条件为:(1)流动相 2％磷酸：乙腈(97:3)；(2)固定相 Hamilton PRP-1反相层析柱(5μm，150mm×4.1mm)；(3)检测波长:214nm；(4)流速：为0.6ml/min。舒巴坦测试条件为:(1)流动相：1％磷酸-四丁基氢氧化铵缓冲液（以10%四丁基氢氧化铵调pH至2.28）:甲醇(83:17)；(2)固定相：Waters Symmetry C18对称反相层析柱(5μm，150mm×4.6mm)；(3)检测波长: 210nm；(4)流速：为1.0ml/min。血浆标本分析前预处理：血浆标本0.8ml加入0.8ml乙腈混匀后10000r／min离心10min，取上清液1ml加入二氯甲烷溶液10ml混匀后20r／min旋转混匀20min，4000r／min和10000r／min离心2次、取上清液80μl（阿莫西林）和100μl（舒巴坦）100μl进样分析。由Millennium32数据处理系统根据阿莫西林和舒巴坦的峰面积制订标准曲线，以外标标准曲线法分别测读阿莫西林和舒巴坦血药浓度。

2.4 体液浓度测定方法学研究 阿莫西林和舒巴坦色谱峰分离良好，空白血浆中杂峰对阿莫西林和舒巴坦色谱峰无干扰。见图1。阿莫西林和舒巴坦血浆溶液浓度与峰面积间呈良好线性关系，阿莫西林血浆溶液标准曲线范围为(0.25～25)mg/L，线性回归方程为C=1.97×105PA－2.49×104 (PA为峰面积);回归系数R2=0.9994（权重因子为1／C）， 最低检测限为0.1mg/L（信噪比>3）。阿莫西林血浆溶液提取回收率(血浆高、中、低浓度/缓冲液高、中、低浓度×100)为（95.74±3.49）%。舒巴坦血浆溶液标准曲线范围为(0.25～25)mg/L，线性回归方程为C=5.44×104PA－9.97×103 (PA为峰面积);回归系数R2=0.9958（权重因子为1／C）， 最低检测限为0.1mg/L（信噪比>3）。舒巴坦血浆提取回收率(血浆高、中、低浓度/缓冲液高、中、低浓度×100)为（92.58±16.07）%。测定方法的精确性：阿莫西林和舒巴坦不同浓度血浆溶液标本进样间重复性测定结果的相对标准差（RSD）分别为≤3.92%和≤5.18%；阿莫西林和舒巴坦不同浓度血浆标本日内测定结果RSD分别为≤3.92%和≤5.18%，日间测定结果RSD分别为≤4.57% 和≤5.56%。测定方法准确性：阿莫西林和舒巴坦不同浓度血浆溶液测得浓度回收率分别为96.68%～105.70%和96.22%～101.22%。血浆样品稳定性：阿莫西林和舒巴坦高、中、低质控血浆浓度标本室温放置至24h后，24h时阿莫西林不同浓度药物回收率为91.11%～91.5%。12h时舒巴坦低质控浓度药物回收率仅为77.02％。24h时未检测到血浆标本中舒巴坦药物浓度。阿莫西林和舒巴坦高、中、低质控血浆浓度标本预处理后的标本室温放置24h，24h时不同浓度阿莫西林回收率为80.90%～87.88%；12h时不同浓度舒巴坦回收率为64.68%～93.19%。24h时亦未检测到血浆标本中舒巴坦药物浓度。结果显示，阿莫西林和舒巴坦HPLC测定方法特异性、精确性及准确性均符合卫生部有关药代动力学研究原则中生物样品的分析要求，阿莫西林／舒巴坦血浆标本室温放置时间不宜超过9h，预处理后标本室温放置时间不宜超过9h。

2.5 药代动力学参数计算及分析 血药浓度资料、药代动力学参数及统计学处理均在微机上进行，采用中国药理学会数学专业委员会编制的3P97程序包计算药代动力学各项参数。同时根据实测值以梯形法计算AUC，实测值计算血药高峰浓度（Cmax）。以进口品的药时曲线下面积为标准，计算国产品的相对生物利用度，用3P97程序包对国产品和进口品Cmax、AUC0-8和AUC0—∞对数值进行方差分析，统计各参数间的差异，方差分析包括国产品与进口品的两制剂间、试验周期间、服药顺序间和服药顺序组中受试者间。以SAS／STAT（VER.8.0）统计软件包对T1/2Ka、T1/2Ke、V/f和CLt等主要药代参数进行方差分析，检验制剂间差异，非连续性变量Tmax用中位数和范围表示，并经等级排序后用方差分析。以双单侧t检验和（1-2α）置信区间法检验国产品和进口品生物等效性。检验显著性水平为α=0.05。

图1 阿莫西林和舒巴坦的标准色谱

A：阿莫西林空白血浆 B：15mg/L阿莫西林标准血浆溶液

C：舒巴坦空白血浆 D：15mg/L舒巴坦标准血浆溶液

3 结果

3.1 药物浓度及药代动力学参数 受试者单剂空腹口服国产品和进口品后平均血药浓度（见图2、图3）和主要药代动力学参数（见表1、表2）。空腹口服国产品和进口品后的体内过程均符合血管外一室模型。国产品和进口品口服后阿莫西林实测平均高峰血药浓度(Cmax)分别为（12.48±3.05）和（10.86±2.75）mg/L，达峰中位时间（Tmax）分别为1.50（1.0，2.0）h和2.0（1.0，4.0）h，平均药时曲线下面积 (AUC0～∞) 分别为（33.42±7.58）h·mg/L和（32.71±7.18）h·mg/L。国产品和进口品口服后舒巴坦实测平均高峰血药浓度(Cmax)分别为（8.44±2.43）mg/L和（9.20±3.00）mg/L，达峰中位时间（Tmax）分别为2.0（1.0，5.0）h和2.0（0.75，5.0）h，平均药时曲线下面积 (AUC0～∞) 分别为（35.31±10.81）h·mg/L和（36.52±12.94）h·mg/L。

图2 受试者空腹口服国产和进口阿莫西林/舒巴坦匹呋酯片亮剂 后平均阿莫西林药-时曲线比较

图3 受试者空腹口服国产和进口阿莫西林/舒巴坦匹呋酯片剂后平均舒巴坦药时曲线

表1 受试者单剂空腹口服阿莫西林1000mg／舒巴坦匹呋酯1000m剂后阿莫西林平均药代动力学参数 （n＝22）

表2 受试者单剂空腹口服阿莫西林1000mg／舒巴坦匹呋酯1000m剂后舒巴坦平均药代动力学参数 (n=22)

3.2 生物利用度及生物等效性

3.2.1 受试品中阿莫西林生物利用度及生物等效性 以进口品中阿莫西林药时曲线下面积为标准，计算受试品国产阿莫西林相对生物利用度，结果为(102.47±9.70)％。方差分析结果表明，国产片剂与进口片剂相比，LogCmax在两制剂间差异具统计学意义(P＜0.05)，但在试验阶段间和服药顺序间的差异无显著性(P＞0.05)。LogAUC0-8和LogAUC0-∞在两制剂间、试验阶段间、服药顺序间的差异均无统计学意义(P＞0.05)。LogCmax、LogAUC0-8和LogAUC0-∞ 在服药顺序组中受试者间差异有显著性（P＜0.05），除T1/2Ka外，V/f、CLt/f、T1/2Ke等药代动力学参数在两制剂间差异均无统计学意义（P＞0.05）。国产品和进口品中阿莫西林Tmax中位数经等级排序后用方差分析结果两制剂间差异无统计学意义（P＞0.05）。

国产品和进口品中阿莫西林药代参数Cmax、AUC0～8及AUC0～∞经对数转换后以双单侧t检验分析，结果显示两制剂具有生物等效性；（1-2α）置信区间法分析结果表明，国产片剂中阿莫西林Cmax和AUC0～∞90%可信限分别在107.40％～124.40％和98.50％～105.70％，落在对照品进口片剂70％～143％和80％～125％范围内，此亦表明国产品和进口品中阿莫西林具有生物等效性。

3.2.2 受试品中舒巴坦生物利用度及生物等效性 以进口品中舒巴坦匹呋酯药时曲线下面积为标准，计算受试品国产舒巴坦相对生物利用度，结果为(98.61±14.91)％。方差分析结果表明，国产片剂与进口片剂相比，LogAUC0-8在两制剂间差异具统计学意义(P＜0.05)，但在试验阶段间和服药顺序间的差异无统计学意义(P＞0.05)。LogCmax和LogAUC0-∞在两制剂间、试验阶段间、服药顺序间的差异均无统计学意义(P＞0.05)。LogCmax、LogAUC0-8和LogAUC0-∞在服药顺序组中受试者间差异具统计学显著性（P＜0.05），V/f、CLt/f、T1/2Ka、T1/2Ke等药代动力学参数在两制剂间差异均无统计学意义（P＞0.05）。国产品和进口品中舒巴坦匹呋酯Tmax中位数经等级排序后用方差分析结果两制剂间差异无统计学意义（P＞0.05）。

国产品和进口品中舒巴坦药代参数Cmax、AUC0～8及AUC0～∞经对数转换后以双单侧t检验分析，结果显示两制剂具有生物等效性；（1-2α）置信区间法分析结果表明，国产片剂中舒巴坦Cmax和AUC0～∞90%可信限分别在85.10％～100.90％和92.60％～103.00％，落在对照品进口片剂70％～143％和80％～125％范围内，此亦表明国产品和进口品中舒巴坦具有生物等效性。

3.3 不良事件及安全性评价 22名受试者中单剂空腹口服国产品和进口品后分别有3名和2名出现轻度腹泻1～2次外，其余受试者均无不良事件发生。试验前后生命体征检查、心电图检查及各项实验室检查结果均未见异常。

4 讨论

从体外试验表明，阿莫西林与舒巴坦对β－内酰胺酶产酶菌的抗菌活性极弱，对产酶大肠杆菌、克氏肺炎杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、粘质沙雷菌、产气杆菌、伤寒杆菌、不动杆菌及流感嗜血杆菌的MIC50为16～>256mg/L。以阿莫西林与舒巴坦配伍则可发挥β-内酰胺酶产酶的抑制，从而提高对产酶菌在体外的抗菌活性，MIC50为0.25～16mg/L，提高了4～64倍以上。从获得血药浓度曲线看，受试者体内的阿莫西林浓度变化与舒巴坦的浓度变化类似，达峰时间、消除半衰期相当，说明两种药物之间具有同步性。同步性的结果说明药物可以发挥协同抗菌作用，有利于药物的治疗。

降低舒巴坦的用量，有利于降低药物成本和不良反应的发生率，保持复方制剂的有效性。本试验中，在给药后采血的时间段0～8h内，药物仍维持到给药后的6h，其平均血药浓度值均在1mg/L以上，有利于临床疾病的治疗。故用于上下呼吸道感染、泌尿道感染、妇科感染、皮肤和软组织感染等建议成人和12岁以上儿童，每日3次，每次1～2片。

【参考文献】

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