小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌实验的改良法

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作者:孙明洁，高燕，赵冬，王珂, 靖学芳

【摘要】 目的 探讨一种简便易行的小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌实验的改良法。 方法 在巨噬细胞吞噬鸡红细胞和巨噬细胞吞噬酵母菌实验基础上建立一种新的吞噬实验方法。 结果 实验组吞噬10min的结果吞噬百分率57％，吞噬20min的结果吞噬百分率86％，吞噬30min的结果吞噬百分率63％。 结论 结果显示小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌20min的吞噬百分率可高达86％，说明这种改良法简单而有效。

【关键词】 小鼠巨噬细胞；酵母菌；吞噬酵母菌实验改良法

The mice macrophage swallows the saccharomycetes experimental improvement method

【Abstract】 Objective Discusses one kind of simple macrophage to swallow the saccharomycetes method. Methods Swallows the chicken red blood cell by the macrophage and the macrophage swallows the saccharomycetes in the foundation newly to establish one kind to swallow experimental method. Results Experimental group，the phagocyte swallows saccharomycetes 10 minutes after to swallow the percentage to be possible to reach as high as 57%. The phagocyte swallows saccharomycetes 20 minutes after to swallow the percentage to be possible to reach as high as 86% . The phagocyte swallows saccharomycetes 30 minutes after to swallow the percentage to be possible to reach as high as 63%. Conclusion The result showed the mice macrophage swallows saccharomycetes 20 minutes after to swallow the percentage to be possible to reach as high as 86%，simply explains this kind of improvement method but to be effective.

【Key words】 mice macrophage；saccharomycete；swallows the saccharomycetes experimental improvement method

巨噬细胞对颗粒性抗原具有很强的吞噬功能，可用鸡红细胞、酵母菌等作为吞噬颗粒来观察其吞噬效果。多年来在实验课教学中，我们一直采用鸡红细胞作为吞噬颗粒，因为它具有个体大呈梭型，核明显并且着色清楚与其他细胞易区别的优点，但是也存在着一定的缺点，例如：费用高及血球制备比较麻烦等，再加上近年来高致病性禽流感的发生，在这种情况下，我们考虑到用酵母菌作为吞噬颗粒来观察其吞噬效果。经查阅有关资料，并结合我们的教学安排，考虑到整个实验所用的时间较长，以及所用的仪器设备对我们来讲在短期内解决都是个问题，面对这种情况，我们根据以往的实验课教学经验决定，在巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和巨噬细胞吞噬酵母菌实验这两个实验的基础上，探索一种时间短、简便易行的新方法来达到预期的效果，于是做了改良的小鼠巨噬细胞吞噬酵母细胞实验。

1 材料与方法

1.1 实验动物 ICR小白鼠，体重18 ～ 22g，雄性，由首都医科大学实验动物部提供，颗粒饲料喂养。分笼饲养于空调室内，室温（23±2）℃，相对湿度45%～65%，自由饮用自来水，自动控制昼夜各12h，自动换气通风。

1.2 实验材料 金黄色葡萄球菌、酵母菌均由首都医科大学病原生物学系提供。瑞氏染料、甲醇均由北京化学试剂厂提供。0.9％氯化钠注射液由石家庄四药有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 金黄色葡萄球菌的制备 将金黄色葡萄球菌接种到普通斜面培养基上，于37℃温箱培养后，每支培养基中加1ml的0.9 % 氯化钠注射液，反复吹打冲洗斜面培养物上的金黄色葡萄球菌，收集菌液，然后将收集到的菌液，参照标准比浊管用0.9％ 氯化钠注射液调至为3亿/ml菌的菌液，放4℃冰箱备用。

1.3.2 酵母菌菌液的制备 将酵母菌接种到沙氏斜面培养基上，于37℃温箱培养后，每支培养基中加1ml的0.9 % 氯化钠注射液反复吹打冲洗斜面培养物上的酵母菌，收集菌液，然后将收集到的菌液，参照标准比浊管用0.9 % 氯化钠注射液调至为10亿/ml菌的菌液，放4℃冰箱备用。

1.3.3 实验 将小白鼠分成6组，每组3只。第1、2、3组为对照组，经腹腔注射0.9 % 氯化钠注射液0.6ml/只，第4、5、6组为实验组，经腹腔注射3亿/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.6ml/只。48h后将所有的小白鼠腹腔均注射10亿/ml的酵母菌菌液1ml/只。注射10min后、20min后和30min后，取对照组、实验组各一组小白鼠，行颈椎脱臼处死，轻轻按摩腹部后，消毒小鼠腹部皮肤，持镊提起腹中部皮肤并剪开，暴露腹膜，避开血管剪开腹膜一小口。用毛细吸管取出腹腔液，并收集于试管中。每组的每只小鼠取腹腔液滴于3张玻片，每张一滴，推片，自然干燥，固定。滴加瑞氏染液30min后，加等量蒸馏水，染3min后，水冲，滤纸吸干，在显微镜油镜下观察结果。并且计算吞噬百分率［1～4］。

2 结果

2.1 对照组 见图1。吞噬10mim的结果吞噬百分率5.5％，吞噬20min的结果吞噬百分率10％，吞噬30min的结果吞噬百分率7％。

图1 吞噬细胞吞噬酵母菌的对照组结果

2.2 实验组 见图2。吞噬10min的结果吞噬百分率57％，吞噬20min的结果吞噬百分率86％，吞噬30min的结果吞噬百分率63％。

图2 吞噬细胞吞噬酵母菌的实验组结果

由图2所示，小鼠腹腔注射酵母菌液后20min的吞噬百分率是较高的。

3 讨论

机体的免疫系统是由非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫共同构成的防御系统，单核巨细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一。当细菌、异物等抗原性物质进入机体后，可迅速被单核巨噬细胞系统吞噬和清除，因而巨噬细胞吞噬百分率的多少可以反映其吞噬能力的高低，针对病原微生物侵袭和体内细胞变异，体液免疫和细胞免疫通过形成抗体或产生细胞因子等方式针对特异性抗原产生各种生物学效应［5］。

本实验利用免疫学和微生物学实验原理，在小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞和小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌实验的基础上加以改进，参照前一个实验利用注射金黄色葡萄球菌吸引巨噬细胞向腹腔趋化后再注射酵母菌让它在体内吞噬的优点，又避免了后一个实验在体外吞噬所利用的实验材料及仪器设备的烦琐过程，例如各种液体的配制和使用及37℃温箱培养等。另外，将后一个实验的酵母菌的制备加以简化把计数步骤改为用标准比浊管比浊的方法，即节省了时间又节省了实验材料等。

现将三个实验方法总结见表1。

表1 三个实验方法的比较

总之，小鼠巨噬细胞吞噬酵母菌实验的改良法简便而有效。

【参考文献】

1 朱正美，刘辉. 简明免疫学技术. 北京：科学出版社，2002，206-207.

2 张子康，何光泽. 医学微生物学与免疫学实验教程.成都：四川科学技术出版社，1989，162-164.

3 靖学芳，赵文明. 医学免疫学和微生物学实验指导.北京： 首都医科大学，2003，6-7.

4 吕世静，陈育民. 免疫学检验.北京：人民卫生出版社，2004，183.

5 刘春丽，张风林，李明凯，等. 山楂提取物对免疫功能的调节作用. 中华中西医杂志，2005，6（21）：2810-2811.