HPLC法同时测定风寒感冒片中葛根素和橙皮苷的含量

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【摘要】 目的 建立风寒感冒片的含量测定方法。方法 采用hplc法，色谱柱为diamond c18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇?水（体积比25∶75），检测波长：葛根素250 nm，橙皮苷283 nm。结果 葛根素在进样量为 0.156～3.152 μg范围内，橙皮苷在进样量为 0.100～2.006 μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率：葛根素为99.0%，rsd=0.97%，橙皮苷为98.4％，rsd=1.27％（n=9）。结论 该法操作简便易行、准确可靠，可用于风寒感冒片的质量控制。

【关键词】 风寒感冒片 葛根素 橙皮苷 高效液相色谱法

风寒感冒片是由麻黄、葛根、紫苏叶、防风、陈皮、白芷等十一味中药经提取加工而成的片剂，具有解表发汗、疏风散寒的作用，临床用于感冒身热、头痛、咳嗽、鼻塞、流涕。本文采用hplc法同时测定本品所含葛根素、橙皮苷的含量，以此作为风寒感冒片的质量控制指标。

1 仪器、试剂与样品

waters2695高效液相色谱仪， waters2487紫外检测器（美国waters公司）;milli?pore纯水器（美国密里博公司）。葛根素对照品、橙皮苷对照品（ 中国 药品生物制品检定所，供含量测定用）；甲醇为色谱纯；水为高纯水；其他试剂均为分析纯；风寒感冒片样品（规格：每片重0.6 g）及缺葛根、陈皮的阴性对照样品由广西辉越制药有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 diamond c18色谱柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)；流动相为甲醇?水（体积比25∶75）；检测波长葛根素为250 nm，橙皮苷为283 nm；柱温：35 ℃；进样量：10 μl。理论板数按葛根素峰 计算 应不低于2 000。色谱图见图1。

2.2 供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，研细，取0.4 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入体积分数30％乙醇100 ml，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用体积分数30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

1.葛根素；2.橙皮苷

图1 对照品（a）、供试品（b）和阴性对照品的色谱图（略）

figure 1 hplc chromatograms of standard（a）, sample（b）and blank sample（c）

2.3 线性关系考察 精密称取葛根素对照品19.70 mg、橙皮苷对照品12.54 mg，置25 ml量瓶中，加体积分数30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液。精密吸取上述对照品贮备液0.5、1、2、3、5、10 ml，分别置25 ml量瓶中，加体积分数30％乙醇稀释至刻度，摇匀，进样10 μl测定。以对照品进样量为纵坐标，峰面积为横坐标绘制标准曲线，结果葛根素进样量在0.158～3.152 μg 范围内呈良好的线性关系，其回归方程为:y=2.159×105x+1. 164×105（r=0.999 8）；橙皮苷进样量在0.100～2. 006 μg 范围内呈良好的线性关系，其回归方程为:y=1.153×105x+1.435×105（r=0.999 9）。

2.4 精密度试验 取供试品溶液（批号050701），连续进样5次，测定色谱峰面积，结果葛根素rsd为0.5％，橙皮苷rsd为0.7％，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 对同一供试品溶液（批号050701），12 h内每隔2 h测定1次，结果葛根素的rsd为0.8%，橙皮苷的rsd为0.9％，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.6 重复性试验 取供试品（批号050701）6份，按“ 2.2”项下方法制成供试品溶液，进样测定。结果6份样品中葛根素平均含量为5.34 mg/片，rsd为0. 8％；橙皮苷平均含量为0.32 mg/片，rsd为1. 0％。表明重复性良好。

2.7 加样回收率试验 取本品（批号050701，葛根素含量5.34 mg/片、橙皮苷含量0.32 mg/片）0.2 g，共9份，精密称定，分别精密加入对照品溶液（精密称取橙皮苷对照品10.12 mg，置10 ml量瓶中，加体积分数30％乙醇使溶解并稀释至刻度，即得含橙皮苷1.012 mg·ml-1的对照品溶液，备用；另精密称取葛根素对照品33.68 mg，置500 ml量瓶中，精密加入上述橙皮苷对照品溶液2 ml，加体积分数30％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得含葛根素0.067 36 mg·ml-1、橙皮苷0.004 048 mg·ml-1的溶液）20、25、30 ml，按“ 2.2”项下方法制备并测定含量，计算回收率，结果见表1、表2。

2.8 样品测定 取3批样品按照“2.2”项下方法制成供试品溶液，进样测定，用峰面积按外标法计算含量，结果见表3。

3 讨论

3.1 取本品供试液适当稀释后，于紫外分光光度计上在200～400 nm范围内扫描，其最大吸收波长为250.4 nm与283.6 nm，与2种对照品的最大吸收波长基本一致，故采用250 nm作为葛根素测定波长，283 nm作为橙皮苷的测定波长。阴性样品色谱图表明，空白样品对测定无干扰。

3.2 对本品的提取溶剂进行了筛选，比较了甲醇、乙醇及不同比例的乙醇溶液，结果以体积分数30％乙醇溶液为溶剂提取的含量较高，故确定其为提取溶剂。

表1 葛根素加样回收率测定结果（略）

table 1 recovery test of puerarin

表2 橙皮苷加样回收率测定结果（略）

table 2 recovery test of hesperidin

表3 样品测定结果（略）

table 3 assay results of samples

3.3 提取方式 试验了超声处理、加热回流等方法，结果选定为加热回流1 h。

3.4 流动相的选择 参考 有关 文献 ［1～6］，比较了甲醇?水?醋酸（体积比30∶70∶4）、乙腈?0.1％磷酸（体积比20∶80）等多种比例的溶液，结果以甲醇?水（体积比25∶75）为流动相可使葛根素、橙皮苷与相邻的色谱峰达到基线分离，且峰形较好。

3.5 本文方法可同时测定葛根素、橙皮苷的含量，方法简便、快速、准确，可作为风寒感冒片的含量控制方法。

【参考文献】

［1］ 仲平，赵焕霞，张村，等.高效液相色谱法测定太子金颗粒中橙皮苷的含量［j］.