HPLC测定清洁验证中残留物硝酸益康唑的含量
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【摘要】 目的 建立清洁验证中硝酸益康唑含量测定的高效液相色谱法（hplc）。方法 检测波长：235 nm；柱温：30℃；流动相：乙酸铵溶液（2%）-乙腈-甲醇（38：30：32）；擦拭溶剂：乙醇。结果 硝酸益康唑在5.80～232.07 ?g/ml范围内线性关系良好， r=1.0000。平均回收率为99%， RSD为0.3%（n=6）。结论 本方法简便、快速、准确， 可以用于硝酸益康唑清洁验证中残留物硝酸益康唑的定量分析。
【关键词】 高效液相色谱法；清洁验证；残留物；硝酸益康唑
硝酸益康唑适用于皮肤念珠菌病的治疗， 亦可用于治疗体癣、股癣、足癣、花斑癣等， 其制剂硝酸益康唑乳膏是本公司生产的畅销品种， 由于其皮肤念珠菌病治疗中的显著疗效而受到患者的一致好评。本文参考药典方法[1]和HPLC对主活性成分硝酸益康唑的定量分析进行了研究和验证， 结果表明HPLC法简便快速， 准确， 可以用于硝酸益康唑的定量分析。
根据擦拭取样的残留量=设备中的总残留限度/设备总内表面积计算得出硝酸益康唑的残留量LD值为2.248 ?g/cm2， 试验中模拟设备材质的平板面积为100 cm2， 取样回收率为100%， 换算为理论取样量为224.8 ?g， 于10 ml量瓶中以流动相溶解并稀释至刻度， 得到浓度约为22.48 ?g/ml的溶液， 作者以此浓度开展相关研究和验证。
1 仪器与试药
美国Agilent1200高效液相色谱仪， 瑞士Mettler Toledo XS205 电子天平， 昆山KQ-500DE超声波仪等。
硝酸益康唑对照品（批号为：100214-200903）购于中国药品生物制品检定所， 试剂均为分析纯， 水为超纯水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱；流速：2.0 ml/min；检测波长：235 nm；柱温：30℃；进样体积：20 ?l；流动相：乙酸铵溶液（2%）-乙腈-甲醇（38：30：32）；擦拭溶剂：乙醇。
2. 2 对照品溶液的配制 精密称取硝酸益康唑对照品适量， 加流动相溶解制成每1 ml含224.90 ?g的对照品贮备液。
2. 3 线性关系试验 分别精密吸取上述对照品贮备液适量， 用流动相稀释制成浓度分别为：5.62、11.24、22.49 、56.22、112.45、224.90 ?g/ml的溶液， 分别以0.45 ?m×25 mm内径过滤器过滤至2 ml HPLC小瓶内， 取上述溶液各20 ?l， 分别注入液相色谱仪， 记录色谱图， 建立校正曲线， 硝酸益康唑浓度和其峰面积的相关系数r=1.0000。
结果表明， 硝酸益康唑在5.80～232.07 ?g/ml范围内， 硝酸益康唑对照品溶液浓度和其峰面积具有良好的线性关系。
2. 4 检测限（LOD）和定量限（LOQ） 检测限对应的信噪比为3：1；定量限对应的信噪比为10：1， HPLC法测定硝酸益康唑的LOD为6.96 ng， LOQ为23.21 ng。
2. 5 重复性试验 取浓度为225.8 ?g /ml的硝酸益康唑对照品溶液， 以0.45 ?m×25 mm内径过滤器过滤至2 ml HPLC小瓶内， 取此溶液20 ?l， 重复5次注入液相色谱仪， 记录色谱图， 计算5次所得硝酸益康唑峰面积的RSD值为0.8%， 表明该方法重复性良好。
2. 6 稳定性试验 取浓度为225.8 ?g /ml的硝酸益康唑对照品溶液， 以0.45 ?m×25 mm内径过滤器过滤至2 ml HPLC小瓶内， 将此溶液置于室温下放置0、2、4、6、8、12、16、24、32、40、48、56、64、72 h后分别精密量取20 ?l注入色谱仪， 记录色谱图， 测定14次峰面积的RSD值为0.6%， 表明供试品溶液在72 h内稳定。
2. 7 重复性试验 取批号为13070111的样品， 按照“2.9”项下方法制备6份供试液， 结果硝酸益康唑含量均值为100.40%， RSD为0.3%。
2. 8 加样回收率试验 采用加样回收法。计算得平均回收率为99.11%， RSD为0.3%， 结果见表1。
3 讨论
上述试验的验证结果表明， HPLC法测定清洁验证中的残留物硝酸益康唑的含量可行， 该方法可用于硝酸益康唑的定量分析。
分别选取不同种类的溶剂作为擦拭溶剂， 结果选择乙醇为擦拭溶剂较适宜， 因为乙醇为挥发性溶剂， 可以将残留物硝酸益康唑擦拭完全的同时还有效减少溶剂残留。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典（二部）. 北京：化学工业出版社， 2010.
[收稿日期：2014-07-23]