白杨派杨树组织培养技术研究
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摘要：研究结果表明：杨树再生的最适外植体为叶片，愈伤组织诱导最佳培养基为MS + 6-BA 0.1mg/L + NAA 0.1mg/L愈伤组织诱导率为34.8%；不定芽分化的最佳培养基为MS + 6-BA 0.3mg/L + NAA 0.06mg/L，不定芽分化率为44.4%。
Abstract: The result of the study indicates: leaves and petioles were selected as the optimal explants for plant regeneration of poplar ; leaf was optimal for the establishment of poplar regeneration system and the best callus induction medium MS + 6-BA 0.1mg / L + NAA 0.1mg / L callus induction rate was 34.8% ; the best medium for the adventitious bud differentiation was medium MS + 6-BA 0.3mg / L + NAA 0.06mg / L and adventitious bud differentiation rate was 44.4%.
Key words: white poplar group; tissue culture; reproduction of plants
中图分类号：S72 文献标识码：A文章编号：1006-4311（2010）36-0165-01
0引言
杨树属杨柳科（Salicacea）杨树（Populus L.），此树种具有巨大的经济价值和绿化效益。本研究以长春地区杨树为材料，以水培休眠芽得到的叶、叶柄及茎为外植体，系统研究了不同的杨树外植体、基本培养基以及植物激素浓度配比等因素对杨树外植体初代培养的影响，筛选出杨树组织培养的最适继代培养基及其不同植物激素浓度配比，为杨树的遗传改良以及将来雄性系的繁育奠定了基础。
1试验材料和方法
1.1 试验材料
植物材料：长春地区杨树，3月中旬剪取枝条在室温下进行水培，待腋芽萌发抽条后，取幼嫩叶片和萌条（将萌条切割成2cm左右的带芽茎段）为材料，用洗涤剂洗净并在自来水下冲洗2h，然后在超净工作台上进行消毒处理。
培养基：外植体接种的培养基为MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L。
1.2 试验方法
外植体消毒：叶片和叶柄用75%的酒精处理30s，再以3.0%NaClO为消毒试剂，消毒时间8min；带芽茎段用75%的酒精处理30s后，再分别用3.0%NaClO为消毒剂进行消毒处理8min。
接种：将叶片切成0.5cm×0.5cm大小的方块，并沿主脉横切数刀，叶柄切成1cm左右进行接种；一年生茎段切成1.2~1.5cm左右，每种处理接种8瓶，每瓶接种5个外植体。接种后每天观察外植体的变化，7天后统计污染率、褐化率，15天后统计成活率。根据统计后的结果选择最佳的消毒方案。
初代培养基的筛选：将消毒后的杨树片、叶柄和幼茎分别接种到MS、1/2MS、WPM三种基本培养基（各培养基中附加6-BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L）在暗处培养3天后转入光照培养。15d左右统计愈伤组织诱导和不定芽分化的情况。
诱导愈伤最佳激素组合筛选：采用完全随机设计试验，将不同浓度的6-BA（0.1，0.3，0.8mg/L）和NAA（0.01，0.06，0.1mg/L）组合，比较不同激素浓度配比对杨树愈伤组织诱导和不定芽分化的影响，统计指标为愈伤组织诱导率、愈伤组织的不定芽分化率、愈伤组织状态和不定芽的状态。
2结果与分析
2.1 外植体的选择
由表1可以看出：三种外植体均可诱导出愈伤组织，且诱导率差异不显著。但是由叶片诱导出愈伤组织为浅绿色，分化率高；叶柄得为淡黄色后呈绿色，紧实有光泽。这两种愈伤组织的不定芽的分化率均较高，且差异不显著。因此，选择叶片为杨树再生体系建立的最佳外植体。
2.2 不同基本培养基的筛选
从相关结果可以看出：在1/2MS培养基与MS培养基上，杨树的愈组织诱导率差异不显著，在1/2MS和WPM上差异也不显著，而在MS和WPM差异显著。同时经这三种培养基诱导出的愈伤组织状态差别较大，其中，在低盐WPM培养基上诱导的愈伤组织乳白色，无光泽，且这种愈伤组织分化能力最差。不定芽的分化率在三种培养基上两两之间差异显著，在高盐的MS培养基上诱导的愈伤组织的分化能力最强，不定芽的分化率为80.3%。综上所述，MS作为杨树初代培养的最佳基本培养基。
2.3 不同激素浓度配比对愈伤组织诱导的影响
不同的激素浓度配比对杨树再生过程影响不同。在试验过程中我们还发现，杨树叶片再生不定芽的途径以间接途径为主，即先产生组织，后在愈伤上分化不定芽。叶片在接种5d左右，表现出明显的膨大和增厚；叶柄的切口端在接种10d后形成明显可见的愈伤组织，15d后叶柄的愈伤组织长至黄大小，此时才开始在叶脉切口及叶边缘出现愈伤组织，这一现象在如上9种培中无明显差别，而在愈伤组织的形态和大小、不定芽的数目和生长状态方面差明显。
3结论
本研究以长春地区杨树为材料，以水培休眠芽得到的叶p叶柄及茎为外植体，系统比较的研究了不同的杨树外植体、基本培养基以及植物激素浓度配比等因素对杨树外植体初代培养的影响。研究结果表明：杨树再生的最适外植体为叶片，愈伤组织诱导最佳培养基为MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.1mg/L愈伤组织诱导率为34.8%；不定芽分化的最佳培养基为MS+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.06mg/L，不定芽分化率为44.4%。
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