加替沙星残留溶剂检测方法的改进

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【摘要】目的改进加替沙星残留溶剂检测方法。方法色谱柱：聚6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷为固定液的色谱柱（30m×530μm×3.0μm），载气为氮气，检测器为氢火焰离子化检测器。结果甲醇的质量浓度在24.86-74.58μg/ml范围内与峰面积之间的线性关系良好（r1=0.9996）；吡啶的质量浓度在5.15-15.44μg/ml范围内与峰面积之间的线性关系良好（r2=0.9996）；N，N-二甲基甲酰胺的质量浓度在9.77-29.31μg/ml范围内与峰面积之间的线性关系良好（r3=0.9995）。结论本方法简便、准确、灵敏度高，适用于加替沙星残留溶剂的检测。

【关键词】加替沙星；残留溶剂；毛细管柱；甲醇；吡啶N，N―二甲基甲酰胺

加替沙星（Gatifloxacin）是一种含甲氧基的第四代喹诺酮类合成抗菌药物，其抗菌生物机制与其他氟喹诺酮类药物一样，都是通过生成DNA、拓扑异构酶和氟喹酮类药物三元络合物而稳定拓扑异构酶-DNA反应中间体，从而抑制细菌DNA的复制和转录，达到抗菌目的。该品种检验采用卫生部标准WS-906（X-671）-2002，该标准中加替沙星残留溶剂的测定存在如下缺陷：以0.1mol/L氢氧化钠溶液为溶剂，检测吡啶与N，N-二甲基甲酰胺时响应值低，重复性差，不能有效检出，见图1。

为了提高响应值，使各溶剂能有效检出，通过不断实验确定以下方法：检测甲醇与吡啶采用顶空进样，以0.5mol/L氢氧化钠为溶剂，见图2；检测N，N―二甲基甲酰胺采用溶液直接进样，以二甲基亚砜作为溶剂，见图3。1仪器和试药

1.1仪器与试药XS105电子天平（梅特勒多伦多），Agilent7890A气相色谱仪，PE40顶空进样器，G4513A自动进样器。

无水甲醇，吡啶，N，N―二甲基甲酰胺（均为分析纯），二甲基亚砜（色谱纯），0.5mol/L氢氧化钠溶液

1.2样品加替沙星（江苏永达制药有限公司，批号JT-20130705，JT-20130707，JT-20130709）。2方法与结果

2.1甲醇与吡啶的测定

2.1.1对照品溶液的配制精密称取无水甲醇0.5g、吡啶0.1g加0.5mol/L氢氧化钠溶液定容稀释到100ml容量瓶中，精密量取1ml置100ml容量瓶中，加0.5mol/L氢氧化钠溶液定容稀释至刻度，精密量取10ml置20ml顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

2.1.2供试品溶液的配制精密称取0.5g样品置20ml顶空瓶中，精密加0.5mol/L氢氧化钠溶液10ml使溶解，作为供试品溶液。

2.1.3检验方法照残留溶剂测定法（附录ⅧP第二法）以聚6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷为固定液的色谱柱为色谱柱，柱温为40℃，维持8分钟，以30℃/min的速率升至150℃，维持5分钟，氢火焰离子化检测器，检测器温度为300℃，进样口温度为200℃。顶空平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，取对照品溶液和供试品溶液分别顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，均应符合规定。

2.1.4重复性实验精密量取对照品溶液1μl注入气相色谱仪，连续进样5次，记录色谱图，计算得甲醇峰面积的RSD值为1.4%，吡啶峰面积的RSD值为3.2%。

2.1.5线性关系①精密称取无水甲醇适量，加0.5mol/L氢氧化钠溶液制成每1ml中分别含甲醇24.86μg、37.29μg、49.72μg、62.15μg、74.58ug的溶液，分别精密量取10ml置20ml顶空瓶中，照上述方法顶空进样，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，以浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=0.0788x+0.04，r=0.9996，结果表明甲醇在24.86-74.58μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。②精密称取吡啶适量，加0.5mol/L氢氧化钠溶液制成每1ml中分别含吡啶5.15μg、7.72μg、10.29μg、12.86μg、15.44ug的溶液，分别精密量取10ml置20ml顶空瓶中，照上述方法顶空进样，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，以浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=0.2644x+0.0989，r=0.9996结果表明吡啶在5.15-15.44μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.1.6定量限精密称取无水甲醇适量，加0.5mol/L氢氧化钠溶液稀释至一定浓度，摇匀，精密量取10ml置20ml顶空瓶中，照上述方法顶空进样，使信噪比约为10：1，记录色谱图。计算出甲醇的定量限为33.15μg/ml。

精密称取吡啶适量，加0.5mol/L氢氧化钠溶液稀释至一定浓度，摇匀，精密量取10ml置20ml顶空瓶中，照上述方法顶空进样，使信噪比约为10：1，记录色谱图。计算出吡啶的定量限为10.29μg/ml。

2.1.7检测限取定量限项下的甲醇溶液，加0.5mol/L氢氧化钠溶液稀释至一定浓度，摇匀，精密量取10ml置20ml顶空瓶中，照上述方法顶空进样，使信噪比约为3：1，记录色谱图。计算出甲醇的检测限为9.94μg/ml。

取定量限项下的吡啶溶液，加0.5mol/L氢氧化钠溶液稀释至一定浓度，摇匀，精密量取10ml置20ml顶空瓶中，照上述方法顶空进样，使信噪比约为3：1，记录色谱图。计算出吡啶的检测限为3.09μg/ml。

2.1.8样品检测取3批样品，制备供试品溶液，按上述测定条件进样测定，加替沙星样品中甲醇与吡啶残留测定结果见表1：