分析探讨乙型肝炎两对半检测结果的影响因素

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[摘要] 酶联免疫吸附法（ELISA法）检测乙型肝炎免疫学标志物是目前最常用的实验室检验方法，但由于其自身方法学上的限制，测定中影响因素较多，存在少量的假性结果，对临床诊断和治疗有一定的影响。在实际工作中一定要排除各种影响因素的干扰，加以分析，排除干扰作用，更好为临床提供正确可靠的检测结果。

[关键词] ELISA法;乙型肝炎;影响因素;标准化流程操作

酶联免疫吸附法（ELISA法）检测乙型肝炎（下称乙肝）免疫学标志物是目前最常用的实验室检验方法，但由于ELISA法自身方法学上的限制，测定中影响因素较多，存在少量的假性结果（假阳性、假阴性），对临床诊断和治疗有一定的影响。笔者结合资料和临床实践，分析探讨乙肝两对半检测结果的影响因素，如下：

一、标本采集与处理的影响

1.标本严重溶血。标本严重溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性。在临床上常见的引起标本溶血的原因包括 [1]：由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血;由于抽血器具质量不合格如真空管负压不够或塑料试管质量较差导致的溶血;用干燥管采血为了尽快分离血清用竹签搅拌不当引起的溶血等。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血，严重溶血标本禁用，要求重新抽血检测。

2.采血试管不干净。采血试管洗涤不彻底、反复使用引起交叉污染。塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。因此，必须确保采集标本的容器干净，最好使用一次性真空采血管或玻璃试管，并使用非抗凝标本。

3.标本凝固不全。在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后30分钟～2小时开始凝固，18～24 h血块完全收缩。在检验工作中，有时为了快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块或附着在酶标板孔壁内使酶标记物不易洗掉，易造成假阳性或假阴性结果。这类情况于次日复查时因血凝已完全，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查结果变为阴性。因此血液标本采集后必须待血液完全凝固后再分离血清;或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂;凝血功能差或使用过抗凝药物的病人标本，应当延长时间以待其充分凝固。

二、试剂的影响

1.目前，ELISA法检测乙肝两对半试剂厂家较多，不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别。资料显示，不同厂家试剂的特异性和敏感性也不尽相同，有的厂家酶标板孔间A值差>15%，标记酶的活性及显色液的稳定比较差[2]。使用劣质试剂必然导致结果的假阳性或假阴性，选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。

2.不同方法学的检测试剂会使乙肝两对半结果出现一些不同。例如：在实际工作中常用ELISA法检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg）结果为阴性，而电化学发光检测为阳性。 3.所有试剂在用于操作检测标本之前必须室温平衡30分钟以

上，以保证反应时间的准确性和一致性。

三、操作技术的影响

1.加样。加样吸嘴的洁净与否和吸量的准确性，直接影响检测结果。由于吸嘴构造特殊，清洗困难，重复利用会加大交叉污染机会，建议使用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗，定期校准，保证加样的准确。

2.温育。干浴与水浴存在明显的差异，应尽可能使用水浴，把固相板放入水中，减少受热不均，贴密封膜，防止污物浸入。温育时间不够，弱阳性标本检测不出，出现假阴性结果。在温育时，反应板有时受到异常剧烈的震动，致使有的阳性标本板孔中的液体溅入阴性板孔中，尽管马上洗板，还会造成部分阴性标本的假阳性。一旦发生此情况，建议重做。

3.洗涤。ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术，洗板分手工洗板和机器洗板。（1）手工洗板一致性较差，对结果影响较大，洗液配制的浓度要够，加洗液后一定要至少停留十几秒钟，每次都要甩干，连续5次，否则会出现假阳性或假阴性的结果。（2）机器洗板较手工洗板效果要好，但半自动与全自动洗板机使用不当也会影响结果。洗板次数较少，造成残留，可引起假阳性结果;洗板次数过多，可造成抗原抗体结合物洗脱，造成假阴性结果。血清中残留的纤维蛋白丝或洗涤液析出结晶易使洗板机针孔全阻塞或半阻塞，造成未结合标记酶洗脱不彻底，导致“花板”造成HBsAg、HBsAb和HBeAg的假阳性或HBeAb和HBcAb的假阴性。加注洗涤液时冲力过大，将包被在固相载体表面的成分脱落导致HBsAg、HBsAb、HBeAg的假阴性或HBeAb和HBcAb的假阳性。所以操作洗板机过程中要随时观察洗板机针孔内洗液的通畅状况，及时排除故障，洗板机不用时应用去离子水清洗几遍。

4.显色。显色影响的关键是显色温度和显色时间，有的实验人员不按说明书操作，显色时间不到就加终止液终止显色结果，造成弱阳性标本不能显色导致假阴性结果的发生。

5.判读。肉眼判断结果时，显色浅不易观察，必须使用酶标仪判读结果，以保证结果的一致性和准确性。

四、干扰物质的影响

有学者认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、甲胎蛋白因子。标本中其它成分如血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等，均对ELISA测定结果有干扰作用。

五、药物的影响

1.高效价的乙肝免疫球蛋白会与HBsAg形成复合物，影响HBsAg的检出，所以一些HBsAg阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg检测会呈阴性反应，导致乙肝两对半少见模式的出现。

2.为预防乙肝，部分HBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗后的1～2周内，血清中可检出HBsAg成分，形成一过性HBsAg阳性，建议接种乙肝疫苗后1个月内不应作HBsAg检测。

总之，对临床检验ELISA法测定乙肝两对半中出现的假阳性或假阴性结果，必须排除各种影响因素的干扰，加以分析，并采取相应措施排除干扰作用，更好为临床提供正确可靠的检测结果。 【参考文献】1 张小洁，刘建芝.真空采血标本溶血原因分析及预防措施.护士

进修杂志，2001，16（3）：180.

2 许斌，朱虎定.ELISA检测HBsAg影响因素的探讨.临床检验杂志，2000，8（4）：231-234.