HPLC法对于小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的检测结果分析

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【摘要】 目的 建立用高效液相色谱法测定小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法， 色谱柱ZORBAX SB C18， 流动相：0.1 mol/L磷酸-乙腈（96：4， pH调节至6.0），流速1 ml/min ，控制柱温为30℃，检测波长为205nm，定量方法为峰面积外标法。结果 盐酸麻黄碱线性范围为4.263～42.63μg/ml（r=0.9998）， 平均回收率为99.49%， RSD 为2.21%（n=10）， 盐酸伪麻黄碱线性范围为5.135～51.35μg/ml（r=0.9997）， 平均回收率96.97%， RSD为4.64%（n=10）。结论 高效液相色谱法测定小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱浓度简单快捷、定量结果准确、灵敏度高、重复性好， 可作为该制剂的质量控制方法推广。

【关键词】 盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；小儿清热止咳口服液；高效液相色谱法

小儿清热止咳口服液是由麻黄、苦杏仁、黄芩、甘草等7味药材组成[1]， 具有清热宣肺， 平喘， 利咽等功效。目前， 主要的测量方法有分光光度计法、固相萃取和高效液相色谱法， 本文拟采取高效液相色谱法测定小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量， 探讨此法的可行性及可靠程度。

1 仪器与试剂

1. 1 仪器 日本岛津高效液相色谱仪LC-2010AHT。

1. 2 试药与试剂 盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所， 批号： 741-5231）。盐酸伪麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所， 批号：535-4636）小儿清热止咳口服液（10 ml×6支/盒， 国药准字Z20054937， 生产企业：江西杏林白马药业有限公司）磷酸为分析纯， 甲醇及乙腈均为色谱纯。

2 方法与结果

2. 1 色谱分析条件：采用高效液相色谱紫外检测法， 色谱柱ZORBAX SB C18分析柱（250mm×4.6mm， 5μm），流动相：0.5%磷酸溶液， 乙腈（96：4）， pH6.0）， 流速1 ml/min， 控制柱温为30℃， 色谱可达到很好的分离， 对品峰进行紫外光谱 扫描， 并参照中国药典中伪麻黄碱测定条件， 检测波长为205nm， 定量方法为峰面积外标法。色谱柱的理论板数大于5000， 分离度大于1.5.

2. 2 提取条件及对照组、供试品溶剂的制备[2]：研究中， 本研究组实验了甲醇-盐酸和碱液蒸馏2种方法， 结果发现碱液蒸馏法的色谱中杂质峰干扰较大， 无法准确定量， 因此， 提取方法采用碱液蒸馏法。取对照品适量后精密称量， 加0.1 mol/L盐酸制成20 μg/ml的溶液。采用20NaOH对供试品进行蒸馏提取。

2. 3 线性关系考察：称取麻黄碱和伪麻黄碱对照品溶液（麻黄碱浓度42.63μg/ml， 伪麻黄碱浓度51.35μg/ml）， 分别稀释至1倍、2倍、3倍、4倍及5倍浓度， 进样量20 μl注入色谱仪， 记录麻黄碱及伪麻黄碱峰面积， 以浓度（μg/ml）为横坐标， 以相应的麻黄碱及伪麻黄碱峰面积为纵坐标进行回归， 得到线性方程：盐酸麻黄碱：Y=43.222X-23.42， r=0.998， 盐酸伪麻黄碱：Y=46.52X-36.74， r=0.997， 表明盐酸麻黄碱线性范围4.263～42.63 μg/ml， 盐酸伪麻黄碱线性范围为5.135～51.35 μg/ml。

2. 4 精密度试验[3]：取同一批样品按相同方法制备所需溶液， 平行测定6次的含量结果：说得峰面积的RSD麻黄碱为0.9%， 盐酸伪麻黄碱为1.1%。证明高效液相色谱法测定小儿清热止咳口服液中麻黄碱及伪麻黄碱浓度的方法得到的测定结果精密度较高。

2. 5 回收率试验：方法同线性关系试验， 以峰面积计算麻黄碱和伪麻黄碱含量， 根据含量结果计算回收率， 结果盐酸麻黄碱平均回收率为99.49%， RSD 为2.21%（n=10）， 盐酸伪麻黄碱的平均回收率96.97%， RSD为4.64%（n=10）。证明高效液相色谱法测定小儿清热止咳口服液中麻黄碱及伪麻黄碱浓度的方法得到的测定结果准确可靠。如表1， 表2所示。

3 讨论

研究的结果显示：采用高效液相色谱法， 色谱柱ZORBAX SB C18， 流动相：0.1mol/L磷酸-乙腈， 盐酸麻黄碱线性范围为4.263～42.63μg/ml（r=0.9998）， 平均回收率为99.49%， RSD 为2.21%（n=10）， 盐酸伪麻黄碱线性范围为5.135～51.35 μg/ml（r=0.9997）， 平均回收率96.97%， RSD为4.64%（n=10）。通过利用麻黄碱和伪麻黄碱的性质， 采用蒸馏法处理样品， 建立了专属性强的的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量测定；前处理简单方便， 方法重复性、准确度均满足要求。

综上所述， 高效液相色谱法测定小儿清热止咳口服液中麻黄碱及伪麻黄碱浓度简单快捷、结果准确、灵敏度高、重复性好， 样品溶液稳定， 可作为该品中麻黄碱及伪麻黄碱浓度的质控标准。

参考文献

[1] 宋翠淼， 牛丽颖. 小儿清肺止咳口服液的镇咳， 祛痰及平喘作用的实验研究. 河北中医药学报， 1998， 13（2）： 1-3.

[2] 国家药典委员会编.中国药典. 北京：中国医药科技出版社， 2010.

[3] 叶应妩， 王毓三， 申子瑜. 检验操作规程. 北京：中国科技出版社， 2010： 17.