紫外可见分光光度法测定侧柏叶中总黄酮的含量

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【摘 要】目的：利用紫外可见光光度法测定侧柏叶中总黄酮含量。方法：将侧柏叶粉碎后，放置索氏提取器中，使用石油醚加入回流1小时，移出石油醚，并使用100ml甲醇（50%），加入回流10h，直至提取液无色后，冷却，低温放置24h以上，经过滤出去绿叶素和杂质，得出提取液。以芦丁为标准，使用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色，并使用紫外线可见分光光度测定总黄酮含量。结果：芦丁线性范围在8-50μg・ml-1。样品黄酮含量为（6.10±0.26）mg/g，浓度（77.34±2.56）ρ/mg・L-1。结论：侧柏叶经甲醇提取后直接测定总黄酮含量，具有方便快捷、精确等方面优点，并利于侧柏叶质量的选定及中药治疗，值得推广应用。

【关键词】紫外可见分光光度法；侧柏叶；总黄酮；含量

【文章编号】1004-7484（2014）07-4112-01

侧柏叶为柏科植物侧柏（Platycladus orietalis Framco）中的干燥嫩枝叶，在中医治疗上常用作凉血、止血、止咳化痰的药物[1]。侧柏叶中含有重要的黄酮类化合物，其各种的槲皮甙类能达到止血之功效。然而侧柏叶的质量直接影响着治疗效果，故必须对侧柏叶中的黄酮类化合物进行检测，目前临床上检测方法主要包括紫外可见光光度法测定，紫外可见分光光度法主要是根据物质分子对波长为200-700nm范围内的电磁波的吸收特性，并建立其的一种定性或定量分析方法。其具有操作简单、准确度高、重现性好等方面优点，其中波长长显示光线能量小，波长短显示光线能量大。紫外-可见分光光度计辐射源、单色器、试样容器、检测器、显示装置5各部分组成的。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量，故该方法能准确反映出侧柏叶中黄酮类化合物的含量[2]。本研究主要以芦丁为对照物，对侧柏叶采取紫外可见分光光度法测定，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选用药材市场，并经本院实验室鉴定为Platycladus orietalis Framco。并选用芦丁（中国药品生物制品检定）、甲醇（上海瑞泉化工科技有限公司提供）、NaOH、HCL、乙酸作为分析纯。选用日本岛津生产的UF紫外可见分光光度测定仪，索氏提取器等。

1.2方法

1.2.1溶液制备

将侧柏叶磨成粉后，精密称取2g侧柏叶细分，并放置于索氏提取器中，使用石油醚加入回流1小时，移出石油醚，并100ml50%甲醇，加入回流10h，直至提取液无色后，冷却，并放置在100ml的量瓶当中，再使用少量甲醇洗涤容器，洗液并入量瓶，定容后进行低温放置24h，使用0.20μm滤膜过滤后备用。精密称取2g芦丁，加入甲醇定容，配置成对照溶液后静置。

1.2.2确定波长

量取芦丁和侧柏叶溶液各2ml，放置于25ml量瓶当中，并加入1ml5%的亚硝酸钠溶液中，摇匀后放置5min；加入10%1ml的硝酸铝溶液，摇匀后放置5min；加入4%10ml的氢氧化钠溶液，加水定容25ml，摇匀放置15min后，确定紫外光波长为300nm，在其范围内进行扫描。

1.2.3稳定性测试

精密吸取供试品溶液1ml，并按照上述方式重复操作，每10ml测量一次，根据检测结果显示，1h吸光度RSD为1.1%，这表明在30min内显色较为稳定。

1.2.4重复性测试

精密称取侧柏叶粉末2g，共5份，重复上述方式制得溶液，并按照上述方法重复测定，得出总黄酮含量。

3 讨论

紫外-可见分光光度计由5个部件组成：（1）辐射源必须具有稳定的、有足够输出功率的、并能提供连续稳定的广谱，如钨灯、卤钨灯，氘灯或氢灯等，亦可使用谐染料激光光源等。（2）单色器，由入射、出射狭缝、透镜系统和棱镜或光栅（色散元件）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光及单色光束。（3）吸收池，又称为试样容器，主要是盛放试液，并进行吸光度测量，目前主要分成石英池和玻璃池，石英池适用于紫外到可见区，玻璃池主要适用于可见区。容器的光程一般为0.5-1.0厘米。（4）光电转换器，又称检测器。主要包括有光电管或光电倍增管，光电管较前者更灵敏，光电倍增管适用于检测较弱的辐射。近年来还使用光导摄像管或光电二极管矩阵作检测器，具有快速扫描的特点。（5）显示装置。这部分装置发展较快。较高级的光度计，常备有微处理机、荧光屏显示和记录仪等，可将图谱、数据和操作条件都显示出来。

根据相关调查显示，黄酮含量多余芦丁为对照标准，通过使用亚硝酸钠―硝酸铝―氢氧化钠显示体系进行比色测定，该方法主要基于黄酮中B环成分中具有邻二羟基结构，该结构在显色体系中显色[3]，能准确反映植物中黄酮的含量。根据相关研究显示，芦丁为存在于国槐中的黄酮成分，其化合物种类与侧柏叶黄酮化合物种类基本相同，故本次研究主要以芦丁作为对照品，并选用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色体系对侧柏叶中黄酮含量进行考察[4]。

此外，根据钱彦丛，刘景东等人的研究发现，在要点中规定总黄酮的提取步骤为：（1）先使用乙醚提取绿叶素等干扰物质，并使用甲醇提取总黄酮，本研究主要先将将侧柏叶磨成粉后，精密称取2g侧柏叶细分，并放置于索氏提取器中，使用石油醚加入回流1小时，移出石油醚，并加入甲醇，直至提取液无色后，冷却，并放置在100ml的量瓶当中，再使用少量甲醇洗涤容器，洗液并入量瓶，定容后进行低温放置24h，使用0.20μm滤膜过滤后备用。精密称取2g芦丁，加入甲醇定容，配置成对照溶液后静置[5]。此外，由于淀粉及其它糖类化合物在甲醇中的溶解度较低，溶出量较少，亦可以有效降低杂质干扰[6]。

综上所述，通过对紫外可见分光光度法进行测定，能有效测量侧柏叶中总黄酮含量，经过测量，从而有效控制侧柏叶中的黄酮含量，更有利于侧柏叶质量的选定，有利于中药治疗，值得推广应用。

参考文献

[1] 王 憬，刘景东，勾凌燕，等.国槐槐叶中芦丁含量与生长时间关系的研究[J].现代中药研究与实践，2010，24（ 3） ： 65-66

[2] 赵艳波，施晓光.高效液相色谱法测定荷叶中总黄酮的含量[J].中国医院药学杂志，2010，30（ 20） ： 2795-2796

[3] 周红英，李同德，苏雪惠，等.紫外分光光度法测定三种槐叶中芦丁的含量[J].泰山医学院学报，2004，25（ 4） ： 280-281

[4] 钱彦丛，刘景东.薄层扫描法测定龙爪槐叶中的芦丁含量[J].基层中药杂志，2002，16（ 1） ： 26-27

[5] 郭亚健.对《中国药典》2005 年版槐花总黄酮含量测定的修订建议[J].中国药品标准，2008，9（ 5） ： 327-328

[6] 钱彦丛，刘景东，郝 勇，等.槐叶和龙爪槐叶中芦丁的薄层鉴别[J].黑龙江医药，2002，15（ 8） ： 435-436.

作者简介：

蓝永锋，主管药师，主攻方向：药品质量管理。

欧国灯， 主任中药师 。通信作者