建瓴汤对肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝脏低密度脂蛋白受体mRNA表达的影响

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[摘 要] 目的 观察建瓴汤对肝肾阴虚型高脂血症大鼠低密度脂蛋白受体mrna的影响。方法 将 84只大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、建瓴汤低剂量组、中剂量组、高剂量组、辛伐他汀组、降脂灵片组7组，观察建瓴汤对肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体信使RNA（LDLRmRNA）表达的影响。结果 建瓴汤能显著上调肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝LDLR mRNA表达水平。结论 建瓴汤降脂作用机理可能是通过提高高脂血症大鼠低密度脂蛋白受体基因的表达，从而起到降脂作用。

关键词：高脂血症 肝肾阴虚 低密度脂蛋白受体mRNA 实验研究

中图分类号：R333.4 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2010）11-0008-03

建瓴汤出自张锡纯的《医学衷中参西录》，具有补益肝肾、滋阴潜阳之功，善疗肾阴虚于下，肝阳亢于上诸证，临床上常用于治疗高血压病、冠心病、脑血管意外等疾病。临床观察表明，建瓴汤治疗上述疾病同时，对患者合并的高脂血症及其合并症有较好疗效。前期的动物实验研究结果表明， 建瓴汤可以显著降低高脂血症大鼠血清TC、TG、LDL-C水平，升高血清HDL-C，具有较好的降脂作用[1]。为了从更深层次揭示建瓴汤降脂作用机理， 本实验采用原位杂交法测定研究该方对肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体信使 RNA（LDLRmRNA ）表达，旨从分子水平揭示该方的降脂作用机理。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 取体重为160～180g 雄性SD大鼠84只，180¬～210 g，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，许可证号：scxk（湘）2006-0001。大鼠分笼饲养，置于温度（25±2）℃，湿度50%～60%的饲养室。动物均自由饮水。

1.1.2 药品 建瓴汤所用中药饮片均购自广西区人民医院门诊，按照制生地黄、白芍、山药、柏子仁各30g，淮牛膝15g，生龙骨，生牡蛎、代赭石各30g（先煎）的比例，药材洗净后一煎加8倍水煎煮40分钟，过滤煎液，二煎加6倍水，煎煮40分钟，过滤煎液，将两次滤液合并，浓缩成每毫升生药含量1.2g，4℃冰箱保存备用；辛伐他汀片购自广西区人民医院门诊，由浙江海正药业股份有限公司生产；降脂灵片购自广西区人民医院门诊，系湖南德海制药有限公司生产；高胆固醇饲料由普通饲料88.7%、胆固醇1%、猪油10%和胆酸钠0.3%组成。由广西中医学院动物实验中心提供。LDLR原位杂交试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药

实验分组与处理取10周龄健康雄性SD大鼠84只，按随机数字表法进行完全随机分成空白对照组、模型对照组、建瓴汤低剂量组、中剂量组、高剂量组、辛伐他汀组、降脂灵片组7 组，每组12只，各组平均体重比较差异无显著性（见表1）。正常组大鼠喂饲普通饲料，其余组喂饲高胆固醇饲料（高胆固醇饲料由普通饲料88.7%、胆固醇1%、猪油10%和胆酸钠0.3%组成）。

1.2.2 动物模型制作

除空白对照组外，其余各组从实验第1天起同时采用长期激怒法[2]造成肝肾阴虚证。在模型复制成功的基础上每日上午模型组、建瓴汤组、降脂灵片组及辛伐他汀组继续给予高脂饮食喂饲并采用长期激怒法，每日下午各给药组按2 ml/100g体重折算。分别予建瓴汤3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg，降脂灵片混悬液0.108 g/kg，辛伐他汀混悬液0.0037 g/kg灌胃，其余两组给予同等剂量的蒸馏水，连续灌胃30天。

1.2.3 指标检测

按照原位杂交的取材操作规程将新鲜的肝组织切成不超过 4mm 的小块，及时固定、脱水、浸蜡、包埋，切片。按照试剂盒说明书操作进行脱蜡、 暴露mRNA核酸片段、后固定、预杂交、杂交等操作，DAB显色、苏木素复染，二甲苯透明，封片。

以细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性。每张切片随机取5个高倍镜视野（400倍）， 用北航医学图像分析系统（4.0版本）进行分析，测定原位杂交阳性率（%）。

1.3 统计学处理

数据以均数±标准差（ ）表示，多组间比较用单因素方差分析，组间比较用q检验，以P

2 实验结果

注：空白组与模型对照组比较 *P

表1可见，空白对照组 LDLRmRNA表达阳性肝细胞较多。模型对照组表达阳性肝细胞少见，与空白对照组、建瓴汤高剂量组、建瓴汤中剂量组、建瓴汤低剂量组、辛伐他汀组、降脂灵片组比较有显著差异（P

3 讨论

高脂血症是指血浆脂质的一种或多种成分的浓度超过正常高限时的病理表现，是一种发病率高、人群分布广和危害性大的代谢性疾病，它常是动脉硬化和冠心病的前奏。而心脑血管疾病又是当今人类健康危害最大的杀手，居所有疾病的死亡率之首，所以加强对高脂血症的防治研究就显得至关重要。

中医学无“高脂血症”这一名称，但对其早有认识，其内容散见于“痰浊”、“肥人”、“中风”、“眩晕”及“消瘅”等病。高脂血症病机可由肝肾阴亏，肝阴不足，阴不制阳，以致肝阳上亢；而肾水不足，水不涵木，也常致肝阳上亢。肝阳化火，煎熬津液而成痰浊，也能引发本病。建瓴汤有滋阴和肾、平肝潜阳之功，正切中病机。研究建瓴汤降脂作用机理尚处在起步阶段。

LDLR基因表达异常是体内血脂增高尤其是胆固醇升高的重要原因，也是动脉粥样硬化和冠心病的主要危险因素。人类的低密度脂蛋白受体基因全长超过46kb，由18个外显子和17个内含子组成，其中第18号外显子的长度为2535bp。LDLR功能缺陷是引起高胆固醇血症及动脉粥样硬化（Atheroscleros，AS，）的主要原因之一。LDLR是一种跨膜糖蛋白，在维持血浆胆固醇水平恒定中发挥重要作用， LDLR数量、结构及功能异常时，血浆胆固醇水平增高， 最终导致AS斑块形成，引发冠心病。血浆中LDL的浓度首先是由肝脏决定的，原因之一就是肝脏是受体介导的LDL胆固醇清除发生的主要场所。LDLR可以结合并摄取血浆中含有载脂蛋白B和载脂蛋白E的脂蛋白（特别是LDL），内吞后， LDLR与配体解离返回细胞膜再利用， LDL进入进一步的代谢。血液中70%的胆固醇由LDL和VLDL携带，而其中90% LDL是通过LDLR途径清除的，肝脏是降解LDL的主要器官，约50%的LDL在肝降解。因此肝脏LDL-R表达的高低能够决定并反映血中胆固醇的代谢水平[3]。

研究表明中药复方或单方可通过多部位、多靶点增强肝脏LDL-R基因表达，促进LDL-R蛋白合成，综合调节和纠正脂质代谢。金华等[4]应用调肝导浊中药观察体外培养肝细胞膜LDL-R-mRNA表达水平，发现肝细胞膜LDL受体增加，不仅超过未用药的高脂血清培养组，而且高于正常组，提示中药可能直接作用于肝细胞LDL受体基因或影响基因某个环节而使转录增加，提高肝细胞LDL受体的活性而降血脂；研究[5]黄连解毒汤降脂作用机制，发现黄连解毒汤可能是通过提高肝脏脂代谢酶的活性，促进肝脏LDLR mRNA的表达来调节脂质代谢紊乱的。李小玲[6]发现单味中药丝瓜络对实验性高脂血症小鼠有明显的降血脂效应，且能使实验性高脂血症小鼠肝组织的LDL-RmRNA表达增强。

本实验结果表明，建瓴汤能显著上调高脂血症大鼠肝脏 LDLR 基因表达水平，提示建瓴汤通过促进肝脏LDLR mRNA的表达调整脂质代谢紊乱，这与其他学者研究中药降脂作用机理类似 ，但是建瓴汤通过何种LDLR调节机制促进肝脏LDLR mRNA的表达，经过哪些信号分子或通路间的相互作用，转录及转录后水平的调节机制等，均有待进一步研究。

参考文献

[1] 俸道荣，韦斌.建瓴汤对实验性肝肾阴虚高脂血症大鼠血脂及脂质过氧化的影响[J].广西中医药，2009， 32（4）：51-54.

[2] 樊蔚虹，岳广欣，李素香，等.长期激怒致肝肾阴虚证动物模型研制[J].中国中医基础医学杂志，2001，7（9）：67-69.

[3] Stlning TM，KlockerH，Harwood HJ. In vivo LDL receptor and HMG-CoA reductase regulation in human lymphocytes and its alteration during aging[J]. JArteriosoclerThromb Vasc Bio，l 1995， 15： 872.

[4] 金华，陆一竹.调肝导浊中药对家兔实验性动脉粥样硬化脂质代谢的影响[J].中草药， 2002， 33（4）： 336-338.

[5] 金瑾，张扬，胡文祥，等.黄连解毒汤对高脂血症大鼠血脂代谢及其相关基因表达的影响[J].中西医结合学报，2010，8（3）：275-279.

[6] 李小玲，李菁，朱伟杰，等.丝瓜络对高脂血症小鼠LDL-R基因表达的影响[J].中国病理生理杂志，2009，25（6）：1156-1159.