HPLC法测定脑心清片浸膏中原儿茶酸的含量

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作者：王少妹 罗杰 利幼 梁敬仪 贝伟剑

【摘要】 目的 建立脑心清片浸膏中原儿茶酸含量的测定方法。方法 采用hplc方法，色谱柱为依力特 c18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)，以乙腈?甲醇?0.3%h3po4为流动相进行梯度洗脱，检测波长：260 nm，流速：1 ml/min，柱温：30 ℃。结果 回归方程为a=2508.6 m+63.241，r=0.999 1，线性范围为0.1548～2. 4768 μg；平均回收率为97.36%，rsd为1.21％。结论 该法可用于脑心清片浸膏的半成品质量控制。

【关键词】 脑心清片 原儿茶酸 高效液相色谱法

脑心清片是由单味柿叶提取物(以下简称脑心清片浸膏)制成的中成药，经临床验证，对冠心病心绞痛、脑动脉硬化疗效显著，对短暂脑缺血发作、脑栓塞、脑血栓形成、脑血栓形成后遗症、心肌梗死后遗症等伴有或不伴有高血压、高血压等多种心脑血管疾病有良好的 治疗 效果，并具有一定的降血压、降血脂作用，长期服用未发现有明显毒副作用［1, 2］。脑心清片浸膏中的黄酮类活性成分的含量控制已有 文献 报道［3］。脑心清片浸膏中的另一个重要活性成分原儿茶酸［4］，具有抗氧化、清除自由基和神经元保护等功能［1,5］，其质量控制是确保脑心清片高效安全的重要指标之一。本文以hplc法测定脑心清片浸膏中主要活性成分原儿茶酸的含量，为脑心清片浸膏提供更全面的质量控制方法。

1 实验材料

脑心清片浸膏（柿叶提取物,由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供)；甲醇（色谱纯）；原儿茶酸对照品( 中国 药品生物制品检验所，批号：110809?200503)。

agilent?1100高效液相色谱仪，dad?g1315b可见紫外检测器。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

色谱柱：依力特 c18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相:乙腈?甲醇?0.3%h3po4，按表1进行梯度洗脱；检测波长：260 nm；流速：1 ml/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。理论板数按原儿茶酸 计算 不低于2 500，拖尾因子1.03；对照品溶液主峰与供试品溶液中原儿茶酸峰保留时间的比值均应在0. 990；原儿茶酸与其他成分有效分离,分离度大于1. 97,见图1。

2.2 对照品溶液制备与线性关系考察

精密称取原儿茶酸对照品适量，加甲醇溶解并定容，分别配制各含原儿茶酸247.68、123.84、61. 92、30. 96、15.48 μg/ml的溶液，按“2.1”项色谱条件分别进样10 μl各2次，测定峰面积，以峰面积（a）为纵坐标，对照品进样量(m)为横坐标，进行线性回归,得回归方程为

a=2508.6m+63.241，r=0.999 1

结果表明原儿茶酸进样量在0.154 8～2. 476 8 μg的范围内线性关系良好。

表1 梯度洗脱溶剂系统（略）

table 1 slovent system

a.原儿茶酸对照品;b.脑心清片浸膏

图1 脑心清片浸膏中原儿茶酸hplc图谱（略）

figure 1 the hplc graph of protocatechuic acid in naoxinqing

2．3 供试品溶液制备

精密称取脑心清片浸膏约20 mg，加甲醇20 ml使其完全溶解后,转入50 ml容量瓶,用甲醇定容，制成质量浓度约0.4 mg/ml 的溶液，0.45 μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。

2．4 稳定性试验

取原儿茶酸对照品(质量浓度为61.92 μg/ml)甲醇溶液，分别在0、1、2、4、6、8、12、24 h进样10 μl，测定其峰面积。结果原儿茶酸的平均峰面积为2 021.5，rsd值为1.36%。

2．5 精密度试验

取原儿茶酸对照品溶液(质量浓度为61.92 μg/ml)，重复进样6次, 测定原儿茶酸的峰面积，得平均峰面积为2 038.6，rsd值为0.98%。

2.6 重复性试验

取脑心清片浸膏样品（批号c6a002）,按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，分别测定原儿茶酸含量，结果原儿茶酸含量的rsd值为2.16%。

2.7 回收率试验

取同一批已测定含量的脑心清片浸膏的供试品6份，每份约20 mg，分别精密加入200.82 μg/ml原儿茶酸对照品甲醇溶液4.5 ml（相当于20 mg浸膏所含原儿茶酸的量），按“2.3”项下方法制备，测定峰面积， 计算 原儿茶酸含量和回收率，结果平均回收率为97.36%,rsd为1.21%，见表2。

表2 原儿茶酸的回收率试验结果（略）

table 2 the recoveries of protocatechuic acid in hplc assay

2.8 样品测定

分别按“2.3”项方法制备3批脑心清片浸膏的供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果批号c6a001、c6a002、c7a001的样品中原儿茶酸的含量分别为44.5、45.9、44.7 μg/mg。

3 讨论

目前已报道的柿叶有机酸化合物有原儿茶酸、琥珀酸和糠酸等多种有机酸成分［1, 4］。原儿茶酸具有抗氧化、清除自由基和神经元保护等功能［1, 5］,是脑心清片浸膏中的一个重要活性成分。

本文将hplc法运用于脑心清片浸膏的原儿茶酸含量测定,结果表明方法可靠、可行，为脑心清片的半成品质量控制提供了一个新途径。

【 参考 文献 】

［1］ bei weijian，peng w l, xu a l,et al. neuroprotective effects of a standardized extract of diospyros kaki leaves on mcao transient focal cerebral ischemic rats and cultured neurons injured by glutamate or hypoxia［j］. planta medica, 2007，73:636-643.

［2］ 蔡越冬，杨少锋.脑心清片 治疗 脑动脉硬化症和冠心病心绞痛60例临床 总结 ［j］.中药新药与临床药理,2001，12(6)：414-416.

［3］ 罗杰，贝伟剑，徐腾，等.脑心清片质量标准的研究［j］.