复方枸橼酸喷托维林颗粒中薄荷脑和麝香草酚的定性鉴别和含量测定

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[摘要] 目的 建立复方枸橼酸喷托维林颗粒中薄荷脑和麝香草酚的定性鉴别和含量测定方法。方法 采用薄层色谱法对薄荷脑和麝香草酚进行定性鉴别，采用GC色谱法对薄荷脑和麝香草酚进行含量测定。色谱条件：使用DB-WAX（30 m×0.32 mm×0.25 μm）毛细柱，FID检测器，进样口温度230℃，检测器温度250℃。结果 薄层鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰。在选定的色谱条件下，两种物质分离良好，薄荷脑的回归方程为y = 2681.10x-10.81（r = 1.00），平均回收率为98.0%（n=6，RSD=2.3%），线性范围为：0.016～1.55 g/L；麝香草酚的回归方程为y =2762.00x-6.64（r = 1.00），平均回收率为100.4%（n=6，RSD=1.5%），线性范围为：0.010～1.00 g/L。三批样品中两种组分的含量分别为0.13 mg/g和0.096 mg/g。结论 该方法简单准确，可用于该制剂中的薄荷脑和麝香草酚的定性鉴别和含量测定。

[关键词] 复方枸橼酸喷托维林颗粒；薄荷脑；麝香草酚；薄层色谱法；气相色谱法

[中图分类号] R92 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）04（c）-0134-04

[Abstract] Objective To establish a method of qualitative identification and content determination of menthol and thymol in Compound Pentoxyverine Citrate Granules. Methods TLC was applied for qualitative of menthol and thymol； GC was used for quantitative determination of menthol and thymol. A DB-WAX column （30 m×0.32 mm×0.25 μm） was used. The inlet temperature was 230℃ and the FID detector temperature was 250℃. Results TLC spots were clear and well separated， there was no interference for negative sample. A good resolution was obtained by this method between the peaks of menthol and thymol. The linearity equation of menthol was y =2681.10x -10.81 （r = 1.00）， the average recovery was 98.0% （n=6， RSD =2.3%）， and the linear range was 0.016-1.55 g/L. The linearity equation of thymol was y = 2762.00x-6.64 （r =1.00）， the average recovery was 100.4% （n=6， RSD =1.5%）， and the linear range was 0.010-1.00 g/L. The average contents of 3 batches of samples were 0.13 mg/g and 0.096 mg/g. Conclusion The method was simple and accurate， which can be used for qualitative identification and content determination of menthol and thymol in Compound Pentoxyverine Citrate Granules.

[Key words] Compound Pentoxyverine Citrate Granules； Menthol； Thymol； TLC； GC

复方枸橼酸喷托维林颗粒是由枸橼酸喷托维林、盐酸麻黄碱、枸橼酸、薄荷脑（0.15 mg/g）、麝香草酚（0.10 mg/g）和一些辅料组成的复方制剂。临床用于上呼吸道感染等引起的咳嗽、咯痰。方中薄荷脑为薄荷油中提取的一种饱和环状醇，具有芳香性，主要用于皮肤或黏膜产生清凉感，以减轻不适及疼痛。麝香草酚具有杀菌作用，能促进气管纤毛运动，有利于气管黏液的分泌，易起祛痰作用。现行国家标准[1]202-203采用容量法只对制剂中枸橼酸喷托维林的量进行了控制，并未对薄荷脑和麝香草酚进行控制。本文参考相关文献[2-20]，采用TLC法对制剂中薄荷脑和麝香草酚进行定性鉴别，采用GC法进行定量分析，实验结果表明，本方法简便、准确，可用于该品种的质量控制。

1 仪器与试药

6890N型气相色谱仪（美国安捷伦公司），AE-240型电子分析天平（瑞士梅特勒公司）。复方枸橼酸喷托维林颗粒（陕西兴邦药业有限公司，批号：140401，140402，140403）；薄荷脑和麝香草酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110728-200506和100508-200902），无水乙醇，环己烷，乙酸乙酯，香草醛，硫酸均为分析纯，水为高纯水。

2 方法与结果

2.1 薄荷脑和麝香草酚鉴别

取本品20 g，加水200 mL，照挥发油测定法试（《中国药典》2015年版四部通则2204） ，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷3 mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸1 h，放冷，取环己烷层作为供试品溶液。另取薄荷脑和麝香草酚对照品适量，用无水乙醇制成每1 mL含薄荷脑1 mg、麝香草酚0.6 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（17U3）为展开剂，展开，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品溶液与对照品溶液在相同位置显示颜色一致的斑点。实验结果显示该方法分离效果良好，斑点清晰，阴性样品无干扰，结果见图1。

2.2 薄荷脑和麝香草酚含量测定

2.2.1 色谱条件

采用Aglient DB-WAX毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），程序升温：起始温度160℃，维持5 min，再以每分钟30℃的速率升温至220℃，维持10 min。进样口温度230℃，检测器温度250℃，分流比5U1，进样量1 μL。

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1 对照品溶液制备 精密称取薄荷脑对照品77.52 mg、麝香草酚50.24 mg同置50 mL量瓶中，用环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。再精密量取对照品贮备液5 mL，置50 mL量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2.2 供试品溶液制备 取供试品10 g，置500 mL烧瓶中，加水200 mL，照挥发油测定法（《中国药典》2015年版四部通则2204），自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷5 mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸1 h，放冷，置铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，以适量环己烷分次洗涤挥发油测定器及滤器，洗涤液并入同一10 mL量瓶中，加环己烷稀释至刻度，摇匀，即得。同法制备不含薄荷脑和麝香草酚的阴性对照品溶液。

2.2.3 专属性试验

分别精密量取上述3种溶液各1 μL，照“2.2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。结果显示在此条件下，薄荷脑和麝香草酚分离良好，方中其他组分和辅料无干扰。见图2。

2.2.4 线性及范围

精密量取对照品贮备液适量，用环己烷逐级稀释，得薄荷脑浓度分别为0.015 50、0.031 01、0.1550、0.3101、1.5504 g/L；麝香草酚浓度分别为：0.010 05、0.020 10、0.1005、0.2010、1.0048 g/L的混合对照品溶液。照“2.2.1”项下色谱条件测定，以峰面积y对质量浓度x作线性回归，薄荷脑和麝香草酚线性方程分别为：

y = 2681.10x-10.81（r =1.00），线性范围为0.016～1.55 g/L。

y = 2762.00x-6.64（r =1.00），线性范围为0.010～1.00 g/L。

2.2.5 精密度试验

取对照品溶液，照“2.2.1”项下色谱条件，重复进样6次，结果薄荷脑峰面积RSD为0.81%，麝香草酚峰面积RSD为1.18%。

2.2.6 重复性试验

取批号140403的供试品，按“2.2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定。薄荷脑含量均值为0.14 mg/g，RSD1.7%；麝香草酚含量均值为0.098 mg/g，RSD为1.1%。

2.2.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别于0、1、4、8、10 h，照“2.2.1”项下色谱条件下进样分析，结果表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.2.8 回收率试验

称取阴性样品约10 g，置500 mL烧瓶中，加水200 mL，再精密加入对照品贮备液1 mL，按“2.2.2.2”项下方法制备加样回收溶液，同法制备6份，依法测定，计算回收率，结果见表1和表2。

2.2.9 样品测定

取本品约10 g，精密称定，照“2.2.2.2”项下方法制备测定薄荷脑和麝香草酚的量。结果见表3。

3 讨论

3.1 TLC鉴别条件优化

供试品溶液提取方法考察了用石油醚（30～60℃）超声提取和用挥发油提取器提取2种方法，结果表明，用挥发油提取器制备的供试品溶液，无其他组分斑点干扰，斑点清晰，分离效果好，同时具有使用的有机溶剂少，对操作人员和环境影响小的优点。

3.2 GC色谱条件的优化

在实验中，比较了不同极性的色谱柱。如中等极性的DB-624和强极性的DB-WAX柱，结果DB-WAX柱分离效果最好。通过调整柱温，首先在较低的柱温160℃保持5 min，使薄荷脑和样品中未知物达到基线分离，然后以较高的升温速率使柱温达到220℃并保持10 min，使麝香草酚和其他物质尽快流出，缩短进样分析时间，以提高工作效率。

3.3 样品测定结果分析

从3批样品检测结果看，麝香草酚的含量在标示量的95%～98%之间，薄荷脑的含量在标示量的85%～91%之间。分析原因可能为：本品的生产工艺为将其他组分制粒后，再将薄荷脑与麝香草酚的乙醇溶液喷洒于上述颗粒上，混匀，分装，因薄荷脑和麝香草酚具有较强的挥发性，在此过程中有损失。目前现有标准未对薄荷脑与麝香草酚进行控制，因此有必要对标准进行提高。

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（收稿日期：2017-01-14 本文编辑：王 丽）