道地药材建青黛组织培养技术研究
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摘要 以建青黛顶芽为外植体，MS为基本培养基，研究不同激素组合的培养基对顶芽诱导、增殖及生根的影响。试验结果表明：最佳顶芽诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L，最佳生根培养基为MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.05 mg/L。
中图分类号 S567.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）09-0070-01
青黛味淡、性寒，具清热解毒、凉血止血、定惊之功效，临床常用于时病热毒，发癍吐血、胸痛咯血。近年来，研究发现青黛的主要成分之一的靛玉红对白血病有一定的疗效，从而引起了国内外的极大关注[1]。青黛作为一种传统中药材，主产于福建、河南、河北、江苏和四川等地，其中福建产的品质最佳，称之为建青黛，为公认的名优道地药材。建青黛含靛蓝最高可达3.5%，含靛玉红最高可达0.35%，高于药典的要求（含靛蓝不低于2.0%，含靛玉红不低于0.13%）。目前福建唯仙游县书峰乡有生产，传统的繁殖方法为扦插繁殖，而常年无性繁殖会导致种源退化。植物组织培养具有繁殖系数大、脱病毒复壮等优点[2-5]，然而组织培养方法应用在青黛上却未见报道。本研究以青黛顶芽为外植体，建立青黛种苗工厂化生产的完整体系，为大量推广优质福建道地青黛种苗及建青黛种质资源保护奠定基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料
供试材料为福建省道地青黛，摘取幼嫩的顶芽和侧芽为外植体。
1.2 培养条件
本试验采用的诱导、增殖培养基本培养基为MS培养基，生根培养基本培养基为1/2MS（大量元素减半）培养基，附加不同浓度的6-BA、NAA、IBA（单位：mg/L，下同）。基本培养基中，蔗糖为3%，琼脂为0.7%，pH值为5.8～6.0。培养条件为（25±2）℃，每天光照12 h，光照强度为2 000～2 500 lx。
1.3 试验方法
选择健康的无病斑的顶芽，用流水冲洗2 h，用洗衣粉浸泡10 min，用刷子轻刷，然后用自来水冲洗干净。在超净工作台上用75%的酒精浸泡30 s，再用0.1%的升汞消毒8 min，无菌水冲洗4次后，接种在诱导培养基上。当青黛组培苗长至高约2.5 cm时切下接入8种生根培养基中，每瓶5株，每个处理10瓶。
2 结果与分析
2.1 不同激素组合对建青黛顶芽初代诱导的影响
建青黛顶芽接种15 d后，基部切口处开始膨大，随后慢慢出现许多绿色的小芽点，30 d左右开始分化出不定芽。
从表1可以看出，当NAA浓度不变时，随着6-BA浓度的增加，诱导率呈增加趋势；但当6-BA浓度为1.50 mg/L时，诱导出的苗有轻微的玻璃化；当6-BA浓度为2.00 mg/L时，诱导出的苗会玻璃化。当6-BA浓度都为1.00 mg/L时，随着NAA浓度（0.05～0.50 mg/L）的升高，诱导率呈先上升后下降的趋势。在NAA浓度为0.10 mg/L时，外植体的诱导率达到最高即93.33%，且苗长势正常；而NAA浓度超过0.10 mg/L时，随着NAA浓度的增加，诱导率却降低。
2.2 不同激素组合对建青黛增殖的影响
从表2可以看出，在6-BA浓度为0.8 mg/L或1.0 mg/L时，培养基中生长的苗叶色正常，未见玻璃化现象，而当培养基中6-BA浓度为1.2 mg/L时，IBA 3个不同浓度的培养基中生长的苗都表现为叶色较淡、有轻微玻璃化现象。当6-BA浓度为0.8、1.0或1.2 mg/L时，IBA浓度都是为0.1 mg/L时增殖倍数最高。从苗的质量和增殖倍数2个方面考虑，认为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L培养基作为继代增殖培养基较好。
2.3 不同激素组合对建青黛生根的影响
当建青黛组培苗长至高2～3 cm时切下接入生根培养基中。培养15 d后，根尖开始冒出。培养25 d时，组培苗的生根情况见表3。从表3可以看出，8种培养基都能促进生根，最佳的建青黛生根培养基为6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.05 mg/L，生根率可达100%。
2.4 炼苗与移栽
将已长根的组培苗小心地从培养瓶中取出，轻轻洗掉根部培养基，用多菌灵或甲基托布津浸泡30 min后，移栽到泥炭土∶珍珠岩体积比为3∶1的穴盘中，放入盖有薄膜和遮阳网的大棚中管理。棚内保持温度20～25 ℃，相对湿度 70%～80%，成活率可达95%以上。炼苗30 d左右，当幼苗长至7～10 cm即可移栽到大田中，一般选择春、秋季进行炼苗与移栽。
3 结论与讨论
试验通过建青黛顶芽诱导、增殖、生根等培养，建立了建青黛工厂化快速繁殖体系，解决了青黛种源退化的问题。张利英等[6]用草莓组培苗和自繁苗进行比较，结果表明：草莓组培苗在植物学性状、果实性状、丰产性及抗病性等方面均优于自繁苗，其中产量可比自繁苗增产30%以上。而建青黛为多年生草本植物，扦插繁殖每年收获产量不一样，一般3年扦插1次。组培苗种植后的生长势与扦插苗的比较、每年的产量、一次种植可维持高产量几年等问题还有待研究。
4 参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：185.
[2] 谢利娟，韩蕾，钱永强.爆仗竹组培快繁6-BA与NAA组合浓度配比优化分析[J].核农学报，2005，19（3）：181-185.
[3] 王小敏，梁呈元，李维林.留兰香组织培养及快速繁殖条件的优化[J].植物资源与环境学报，2007，16（4）：38-40.
[4] 林江波，戴艺民，邹晖，等.福建铁皮石斛人工繁育技术研究[J].福建农业学报，2010，25（5）：606-609.
[5] 肖哲丽，柳金风.植物组织培养的研究进展及新技术应用[J].宁夏农林科技，2011，52（1）：13-14.
[6] 张利英，李贺年，张鑫，等.草莓组培苗和自繁苗田间性状比较试验研究[J].安徽农业科学，2009，37（25）：11957-11958.