延冰片中延胡索乙素的含量测定

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【摘 要】 目的：延冰片是由延胡索、冰片以及辅料制成的片剂，临床用于冠心病、心绞痛的治疗。研究通过对流动相、峰形、分离度以及出峰时间等做比较，旨在制定延冰片中延胡索乙素的含量限度。方法：以延胡索乙素为延冰片的指标成分，利用高效液相色谱法测定其含量，以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值6.0）（55∶45）为流动相；检测波长为280nm。结果：延胡索乙素可以作为延冰片的定性鉴别；为本制剂制定了含量限定，而每克含胡索乙素不低于5.20mg。结论：采用高效液相色谱法测定延胡索乙素的含量，该方法精确、快速，可行性良好，适用于延冰片的质量控制。

【关键词】 延冰片；延胡索乙素；含量测定

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）22-0011-03

延胡索为罂粟科紫堇属多年生草本植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥块茎，民间又称为玄胡、元胡、玄胡索，主要分布于河北、山东、江苏、浙江、内蒙古等地[1]，与山芥、将离、浙贝等并称“浙八味”。延胡索是活血止痛、利气之良药，是活血化瘀，理气止痛，镇静和催眠之佳品，尤以止痛、镇痛之功效著称于世[2-3]。临床研究发现，中药制剂延胡索醇提物可以降低心肌耗氧量，同时可以有效地缓解心绞痛和刺激引起的疼痛、失眠、焦虑等[4]。依据延冰片处方中药材有效成分的化学性质研究[5]，采用高效液相色谱法测定三批延冰片试样中延胡索乙素的含量，同时制定延冰片片剂中延胡索乙素的含量限度。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪；EL-204十万分之一分析天平。

1.2 试剂 延胡索乙素对照品（批号：0726-200208，中国药品生物制品研究院）；延胡索药材均由长春宏检药材公司提供；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 吸收波长（λmax）的选择 精密移取延胡索乙素对照品溶液和供试品溶液，以无水乙醇溶液为空白，在190～350nm处进行波长扫描，结果见图1、2。

2.2 色谱条件的确定 参考相关文献及预试验，使用Agilent1260 高效液相色谱仪，以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）（55∶45）为流动相；检测波长为280nm。[1]

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含46μg的溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品粉末约0.5g（过三号筛），置锥形瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇（1∶20）混合溶液50ml，冷浸1h后加热回流1h，冷却至室温，摇匀，滤过。取续滤液25ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，取续滤液，过滤膜即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。结果见图3、4。

2.4 不同提取方法对延胡索乙素含量的影响 按照2010版《中国药典》一部中决明子含量测定项下供试品溶液的制备中，延胡索采用回流提取的方法，同时选择超声提取与其对比，提取时间为30min，后续分离纯化方法相同。将延胡索乙素对照品与两个不同方法处理的供试品溶液注入液相色谱仪10μl，结果见表1。

由表1可知，回流提取与超声提取延胡索乙素含量无较明显差异，为使提取方法简单省时，实验采用超声提取30min的方法对供试品粉末进行提取。

2.5 中试药材的延胡索乙素含量测定

2.5.1 药材的制备 取本品粉末约1g，过三号筛，电子天平精密称定，置烧瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇（1∶20）混合溶液50ml，超声处理30min后，冷却至室温，定容，摇匀，滤过。精密量取续滤液15ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，过滤膜即得[1]。

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，结果见图5、表2。

由表2可知，三批药材延胡索乙素的平均含量为0.65mg/g。按2010版《中国药典》延胡索含量的规定，本品按干燥品计算，含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于0.050%，所以三批药材均为合格药材。

2.6 方法学考察

2.6.1 线性范围的考察 分别精密吸取浓度为0.044mg/ml的延对照品溶液4、8、12、16、22、24μl，设定序列，注入液相色谱仪，横坐标以对照品进样量为参数，纵坐标以峰面积为参数绘制标准曲线，得到回归方程为：y=41.346x+2，1924，R2=1。表明进样量与峰面积呈良好的线性关系。见表3、图6。

2.6.2 精密度试验 取浓度为0.044mg/ml的对照品溶液，连续进样6次，进样量为10μl，测定其峰面积。计算相对标准偏差，由表4数据可知，精密度试验相对标准偏差为0.42%，符合药典标准。

2.6.5 加样回收率试验 取6份与重现性试验同批次的片剂，即已知含量为5.01mg/g，精密称定，分别精密加入浓度为0.044mg/ml的延胡索乙素对照品0.25g，按含量测定项下供试品溶液的制备方法进行操作，计算其加样回收率，结果片剂的回收率均在95%～105%之间，平均回收率是99.04%，均符合药典标准。见表7。

2.7 延冰片中延胡索乙素的含量测定 按延冰片的质量标准含量测定项下方法，制备三批供试品溶液。进样量为10μl，注入色谱仪，结果三批延冰片片剂样品中延胡索乙素的平均含量为5.435mg/g。见表8。

3 讨论

本试验对流动相的筛选做了大量尝试，试用了不同溶剂及不用比例、不同pH的溶液进行试验，结果以本文中所述的流动相为最佳，峰形、分离度、出峰时间等较好。

质量标准中有关含量测定成分的分析：考虑延胡索中延胡索乙素的含量、转移率、加速与长期稳定性均符合要求。参照2010版《中国药典》一部延胡索含量测定项，确定延冰片的检测成分为延胡索乙素。根据三批延冰片片剂样品中延胡索乙素的平均含量为5.435mg/g，在平均含量的基础上，总含量下浮20%制定本制剂含量限度，即本品每克中含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于5.20mg，为本品制定了含量限度。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 刘芳，罗跃娥.延胡索研究概况[J].天津中医学院学报，2005，24（4）：240-242.

[3] 黄云，陈华师.中药延胡索的研究进展[C]//中华中医药学会中药炮制分会.2011年学术年会论文集，2011.

[4] Corey E J， Cheng X M. The logic of chemical synthesis[M].New York： John Wiley&Sons， 1989.

[5] 张萍.延胡索提取物治疗冠心病室性心律失常的机理研究[D].北京：北京中医药大学，2012.

（收稿日期：2015.08.05）

2.6.3 稳定性试验 取浓度为0.044mg/ml的对照品溶液和供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h注入高效液相色谱仪，进样量10μl。结果表明，延胡索乙素对照品溶液和供试品溶液稳定性的相对标准偏差分别为1.46%和2.64%，说明二者在12h内稳定性较好，符合药典标准。

2.6.4 重现性试验 取批号为20131101的片剂样品，精密称量，平行处理6份作为供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为10μl，结果延冰片片剂中延胡索乙素的平均含量5.01mg/g，其相应的相对标准偏差为2.89%，符合药典标准。见表6。