化妆品中腺苷的含量测定

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《日用化学工业》2014年第五期

1实验部分

1.1仪器与试剂Waterse2695高效液相色谱仪(配Waters2998二极管阵列检测器)，美国Waters公司;Milli－Q超纯水机，美国密理博公司;MettlerToledoMS105DU分析天平(十万分之一)，瑞士梅特勒－托利多公司;Universal320R高速冷冻离心机，德国Hettich公司;KQ－500DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。甲醇，色谱纯，德国默克公司;氯化钠，优级纯，天津科密欧化学试剂有限公司;磷酸二氢钾，分析纯，国药集团化学试剂有限公司;超纯水(电阻率为18.2MΩ•cm);腺苷标准物质(批号110879－200202，纯度100%)，中国食品药品检定研究院;生物营养修复护肤霜、生物营养修复眼霜、生物营养修复护肤露、生物营养修复精华露、生物营养修复护肤水，均为市售。

1.2色谱条件色谱柱为资生堂CAPCELLPAKMGC18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为体积比10∶90的甲醇－0.01mol•L－1磷酸二氢钾溶液，流速为1.0mL•min－1，柱温为30℃，二极管阵列检测器(检测波长260nm)，进样量10μL。

1.3样品前处理准确称取样品1g(精确至0.0001g)于25mL比色管中，加饱和氯化钠溶液定容至刻度。超声提取30min，每隔10min振摇数次，确保样品充分分散。取适量样品在10000r•min－1转速下离心10min，取上清液过0.45μm微孔滤膜，作为待测溶液。

1.4系列标准溶液配制准确称取腺苷标准物质16.18mg置于50mL容量瓶，用超纯水稀释至刻度，得标准储备液，质量浓度为323.6mg•L－1。分别准确移取标准储备液0.012，0.06，0.12，0.60和2.00mL于10mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，配成系列标准溶液，质量浓度分别为0.3883，1.942，3.883，19.42和64.72mg•L－1。

2结果与讨论

2.1色谱条件的优化

2.1.1检测波长的选择以腺苷标准溶液进样分析，采集三维图谱，提取紫外吸收光谱图，结果如图1所示。由图1可知，腺苷在260nm处有最大吸收，故选择腺苷的检测波长为260nm。

2.1.2流动相的选择核苷类含碱基化合物的极性较大，因此选用非极性基团封尾的B型色谱柱。实验比较了不同的流动相组成如甲醇－水、甲醇－0.01mol•L－1磷酸二氢钾溶液和甲醇－0.2mol•L－1磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠35.8g、磷酸二氢钾13.6g，加超纯水900mL溶解，用1mol•L－1氢氧化钠溶液调pH=7.0，加四丁基溴化铵1.61g，加超纯水至1000mL，摇匀)的分离情况。结果显示，体积比为10∶90的甲醇－0.01mol•L－1磷酸二氢钾溶液作为流动相时，腺苷出峰时间适中，峰型对称，且与基质中的其他成分能够良好分离(图2)。

2.2提取方法的选择与优化化妆品中待测成分提取关键在于破乳，常规的破乳方法有有机溶剂法、盐析法、超声法等，笔者对提取溶剂及超声提取时间进行了优化。首先分别考察了20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、饱和氯化钠溶液等作为提取溶剂的提取效率。结果表明饱和氯化钠溶液的破乳效果最好，对腺苷的提取效率最高，故选择饱和氯化钠溶液作为提取溶剂。其次对用饱和氯化钠溶液超声提取20，30，40，50和60min后提取溶液中腺苷的含量进行了比较，结果如图3所示。由图3可知，腺苷的峰面积随着超声时间的延长先快速增大后趋于平缓，在30min后不再明显增加，故选择超声提取时间为30min。

2.3标准工作曲线及检出限将系列标准溶液按照色谱条件依次进样分析，以腺苷的质量浓度(mg•L－1)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，曲线的线性回归方程为Y=26766.1X+513.02，相关系数r=1.0000。取霜类空白样品和空白加腺苷标准溶液的样品，按照确定的样品前处理方法处理后，进样分析，以3倍信噪比(S/N=3)计算其检出限为0.0001%，以10倍信噪比(S/N=10)计算其定量限为0.0003%。

2.4方法的回收率及精密度选取霜类和乳液样品分别制备低、中、高3个质量浓度的基质加标样品，每一质量浓度进行6次样品分析，根据标准曲线计算加标样品的质量浓度，结果如表1所示。由表1可知，腺苷在霜类和乳液2种基质中的加标回收率分别为92.3%～94.6%和95.4%～98.8%。选取一个加标水平连续6次测定，考察日内精密度，RSD为0.9%;连续5d测定，考察日间精密度，RSD为2.4%。

2.5样品测定结果对市售5批含腺苷成分的样品进行测定，检验结果如表2所示。由表2可知，5批样品中均检出腺苷，质量分数在0.029%～0.058%之间，均低于《已批准使用的化妆品原料名称目录(第一批)》中规定的0.1%的最大使用。

3结论

以饱和氯化钠溶液作为提取溶剂，超声提取化妆品中的极性组分腺苷。以体积比为10∶90的甲醇－0.01mol•L－1磷酸二氢钾溶液作为流动相进行高效液相色谱分析，腺苷的出峰时间适中，峰型对称，且与样品中的其他成分分离良好。回收率实验结果显示，腺苷的回收率在92.3%～98.8%。该方法简单、快速、准确，适用于化妆品中腺苷的定性定量分析。

作者：于海英黄萍李启艳董蓬李俊婕单位：山东省食品药品检验所