Xpert MTB/RIF法和涂片法检测痰液结核分枝杆菌的比较

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[摘要] 目的 探讨痰液xpert mtb/rif法和涂片法检测结核分枝杆菌的结果及二者之间的符合程度。方法 对103例临床诊断为肺结核的痰标本做Xpert MTB/RIF法和涂片法检测，并将结果进行比较。结果103份痰液两种方法检测结核杆菌共有72例阳性，阳性率为69.9%，其中涂片法阳性65例，阳性率为63.1%，Xpert MTB/RIF法阳性61例，阳性率为59.2%；两种方法均阳性52例，均阴性30例，总的符合率达79.6%，有12例Xpert MTB/RIF法阴性涂片法阳性， 有9例涂片法阴性Xpert MTB/RIF法阳性。二者比较，差异无统计学意义（P0.05）。61例Xpert MTB/RIF法检测阳性对利福平耐药16例，耐药率为26.2%。结论 两法检测结核分枝杆菌结果基本一致，二者相互结合更能提高检测阳性率。

[关键词] Xpert MTB/RIF法；涂片法；结核分枝杆菌；利福平；耐药 痰液

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）05（a）-0186-03

Which MTB/RIF and Smear Method to Detect the Comparison of Sputum Mycobacterium Tuberculosis

CHEN Hai-qiang1，TANG Liu-sheng2

1.Guangxi Yulin City Tuberculosis Control， Yulin，Guangxi Province，537006 China； 2. Guangxi Longtan Hospital Central Laboratory， Liuzhou， Guangxi Province， 545005 China

[Abstract] Objective Explore the sputum which MTB/RIF and smear method the results of the detection of mycobacterium tuberculosis and conform to the degree between the two. Methods 103 cases of clinical diagnosis for tuberculosis sputum specimens which MTB/RIF and smear method detection， and the results were compared. Results 103sputum of two kinds of methods to detect mycobacterium tuberculosis a total of 72 cases with positive， positive rate was 69.9%， the method of smear positive cases61ositive rate was 63.1%， which MTB positive 61 RIF method， positive rate is 59.2%； Two methods are positive for 52ses， 12cases which MTB/RIF negatie smear method is positive， there are 9 cases of smear positive negative which MTB/RIF method. The two comparison， there was no significant difference （P0.05）. Test positive for 61 cases which MTB/RIF method of rifampin resistance in 16 cases， resistant rate of 26.2%. Conclusion Flow method to detect mycobacterium tuberculosis results are basically identical， the two together can improve the detection positive rate.

[Key words] Method of MTB/RIF；Smear method；Mycobacterium tuberculosis rifampicin；Drug resistance；Sputum

在发现结核病传染源、选择治疗方案及评价防治效果等方面痰涂片镜检起到了至关重要的作用，但其阳性率较低。近几年，结核病扩增检测技术（Xpert MTB/RIF系统）在Gene Xpert多重平台上得到了开发，也检测了结核杆菌对利福平的耐药性，为探讨痰液Xpert MTB/RIF法和涂片法检测结核分枝杆菌的结果及二者之间的符合程度，该研究整群选取该院2014年10―11月收治的103例临床诊断为肺结核的痰标本做Xpert MTB/RIF法和涂片法检测，并将结果进行比较。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 病例来源

整群选取103例标本均来自2014年10―11月到广西壮族自治区龙潭医院就诊的肺结核患者的痰液，其中男70例，女33例，年龄为13～81岁。

1.2 仪器及试剂

美国Cepheid公司的Gene Xpert检测系统及试剂；荧光染液由珠海贝索公司提供；荧光显微镜由舜宇公司提供。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片镜检 荧光抗酸染色，40倍镜下进行观察，发现1条以上/300视野报告阳性，全片300个视野无抗酸杆菌报告阴性。

1.3.2 Xpert MTB/RIF法 将1 mL痰标本放到有螺旋盖的前处理管内，将两倍痰标本体积的痰标本处理液添加到痰标本里。剧烈摇动前处理管大约10～20次或者将其置于涡旋振荡器震荡20 s左右，摇晃至没有可见块状痰标本为止。打开Cartridge反应盒，用试剂盒内的专用无菌吸管取出2 mL处理后的痰样本经过加样孔慢慢加入Cartridge反应盒里。并将Cartridge反应盒放置入Gene Xpert检测系统检测。约2 h后仪器会自动判读结果。MTB 检出极低： CT值28，阳性级别高，定义为4+；MTB 未检出： MTB检测阴性。RIF resistance 检出：利福平耐药（R）；RIF resistance 未检出：利福平敏感（S）。

1.4 统计方法

采用SPSS 13.0统计软件对所得数据进行分析，计数资料采用χ2检验。

2 结果

103份痰液两种方法检测结核杆菌共有72例阳性，阳性率为69.9%，其中涂片法阳性65例，阳性率为63.1%，Xpert MTB/RIF法阳性61例，阳性率为59.2%，其中有16例对利福平耐药，耐药率为26.2%；两种方法均阳性52例，均阴性30例，总的符合率达79.6%，有12例Xpert MTB/RIF法阴性涂片法阳性， 有9例涂片法阴性Xpert MTB/RIF法阳性。二者比较，差异无统计学意义（χ2=0.33，P>0.05），见表1。

表1 两种方法检测结核杆菌的情况

3 讨论

结核杆菌大部分存在于肺部的坏死病灶组织中，属于肺结核病人携带的一类传染性病菌，结核杆菌通过患者排痰将其排出体外，所以会有一定量的结核杆菌出现在痰液中，因此，研究者可以将痰液作为标本进行检验，并通过检测阳性结果来确定一个人是否为结核病患者。最早的检测方法是以痰涂片为主，此种检测方式检出率极低，所需时间约为一天，而Xpert MTB/RIF法只需要2 h就能将诊断和耐药性结果得出，大部分情况下痰涂片的阳性率为13.76%～40.4%[1-2]，而该报道的涂片阳性率高达63.1%，可能与所选病例有关，该文所选择的病例均为临床上已经确认为肺结核的病例，再加上作者所使用的是荧光染色法，阳性率要比传统的萋妮氏染色法高10%左右[3]。该文结果显示两种方法均阳性52例，均阴性30例，总的符合率达79.6%，Boehme应用Xpert MTB/RIF对阳性患者的痰液培养标本进行检测，检测一次的敏感性为90.3 %，但涂片镜检只有67.1%[4]，其报道的Xpert MTB/RIF法阳性率高于涂片法，该文报道的Xpert MTB/RIF法阳性率低于涂片法，可能是12例Xpert MTB/RIF法阴性涂片法阳性当中有非结核分枝杆菌的存在[5]，因为Gene Xpert检测系统只能检测结核杆菌，而不能检测非结核分枝杆菌，Helb等最早对Xpert MTB/RIF系统特异度检验，对20份不同的非结核分枝杆菌进行检测，全部被正确排除，特异度为100%，结核分枝杆菌菌体存在对检测结果不产生影响，高浓度的非结核分枝杆菌和低浓度的结核杆菌混合后，系统对其检测率仍然为100%[6]。

利福平耐药被作为耐多药的一个重要指标。Xpert MTB/RIF系统对利福平耐药菌株rpoB区的23个不同变异类型均能检测到。Xpert MTB/RIF对利福平耐药株的敏感性检测率为97.6%、对敏感菌株的敏感性检测率为98.1%[4]，特异度可达100%[7]。该文报道Xpert MTB/RIF系统检测出利福平耐药率为26.2%，杨景彬报道的结核杆菌绝对浓度法耐药试验显示利福平耐药率为21%[8]，低于该文报道的Xpert MTB/RIF法，另外也有报道指出此系统对利福平耐药检测时有假阳性出现，美国一项调查表明，表型检测呈敏感的130份标本，经过Xpert MTB/RIF系统检测其中3例对利福平耐药，假阳性率是2.9%。类似的假阳性现象在rpoB区基因序列检测中也曾出现[9]，由于该文未对所研究病例作结核杆菌培养及其耐药性试验，因此，该文研究无法表达该系统的敏感性、特异性和假阳性率，该文无法无天对相关文献报道的数据进行比较。尽管如此，但从相关资料报道我们得知Xpert MTB/RIF系统无论在特异性和敏感性方面均有较好的检测功效，即使检测到MTB阳性也并不确定为“涂阴”或“涂阳”，无法将病例报告系统的患者详细分类，也就无法制定感染控制干预的措施[10]。虽然有这类问题的存在，但该系统的使用前景依然乐观，全球范围内2012年快速诊断方法诊断出结核病患者超过40%[11]。如果将Xpert MTB/RIF法和涂片法相结合，更能提高分枝杆菌的检出率，对控制耐多药结核病疫情有着非常重要的意义。

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（收稿日期：）