关于《化妆品卫生规范》中微生物检验方法改进的探讨

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《化妆品卫生规范》（2002版）于2002 年9 月19日由卫生部正式颁布。其中的微生物检验方法较之以前的GB7918 - 1987《化妆品微生物标准检验方法》有许多改进,而且增加了新的检验内容，是一部较为科学、完善的规范。但是，由于化妆品的生产和检验条件的变化，《化妆品卫生规范》中的有些内容，还是似乎有改进的必要性。笔者结合多年从事化妆品微生物检验的实践经验，从具体检验操作和结果报告两方面提出一些改进的建议。

1检验过程中的具体操作

1.1粪大肠菌群检测

1.1.1是否必须加作靛基质试验《化妆品卫生规范》对粪大肠菌群的定义是:粪大肠菌群系指一群需氧或兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌,在44.5 ℃培养24～48 h 能发酵乳糖产酸、产气。但是在粪大肠菌群结果报告中却出现了与上述定义并不一致的提法：伊红美兰平板上有典型菌落生长,并经证实为革兰阴性短杆菌,靛基质试验阳性,方可报告检出粪大肠菌群。目前,国内外的粪大肠菌群检测均不作靛基质试验［1，2］。卫生部2003 年颁发的《食品卫生检验方法•微生物学部分》、2000 年颁发的《生活饮用水卫生规范》中粪大肠菌群的检测均不要求作靛基质试验。美国《饮用水及废水检验的标准方法》第20 版（1999年）中对粪大肠菌群检测的要求也仅是:乳糖发酵管产酸、产气者,转种EC 肉汤管,于（44.5 ±0.2 ）℃孵育（24±2） h ,若产气则为粪大肠菌群阳性,否则为阴性。加做靛基质试验,会使检测的目的(检测粪大肠菌群的阴性/ 阳性) 与检测的结果(大肠杆菌的阴性/ 阳性) 不相一致。所以，在粪大肠菌群检测中，没有必要加作靛基质试验。

1.1.2改进普通乳糖胆盐培养基化妆品中普遍含有防腐剂以抑制细菌生长，这些防腐剂在粪大肠菌群的检测过程中降低了检测的灵敏度。普通乳糖胆盐培养基中没有中和剂成分，化妆品中的防腐剂由于没有被中和剂有效中和，所以会影响粪大肠菌群的检出率。

吐温- 80 和卵磷脂配合,可以中和化妆品中常用的防腐剂，如尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚类等。粪大肠菌群在加有吐温- 80 和卵磷脂乳糖胆盐的培养基中,检测灵敏度有所提高,原因就是其中含防腐剂中和剂,能有效地中和化妆品中的防腐剂。建议在以后修改化妆品检验标准时, 能考虑在乳糖胆盐培养基中加一些防腐剂中和剂,以提高粪大肠菌群检出的灵敏度。

1.2细菌总数测定

《化妆品卫生规范》中规定，在进行细菌总数的测定时设置一个空白对照。但是，根据笔者多年的实践经验，在测定细菌总数时只设置一个空白对照是不够的。设置空白对照是为了减少系统误差，而增加空白对照的数量可以进一步减少随机误差［3］。经过实践，发现将空白对照的数量由1个增加到2个，使空白对照的数量与样品每个稀释度测定的平皿的数量一致。这样可以更好地反映出无检样时的细菌总数，从而提高检样细菌总数测定的准确率。

1.3霉菌和酵母菌总数的测定

1.3.1空白对照在霉菌和酵母菌总数的测定中，《化妆品卫生规范》没有规定设置空白对照。霉菌和酵母菌的测定(培养观察) 通常在真菌(霉菌) 专用培养箱或专用检验室内进行,这种环境通常有较多的霉菌孢子存在,加上霉菌和酵母菌的培养时间较长(72 h) ,因此,检样在检验过程中被霉菌污染的可能性较大。笔者认为，霉菌和酵母菌总数的测定应该同细菌总数的测定一样，不但要设置空白对照，而且也应该设置2个空白对照，以便考查实验器具和培养基的灭菌和检验的无菌操作情况,以及校正检验结果。

1.3.2培养基在进行化妆品霉菌和酵母菌计数时,规范中选用孟加拉红培养基。在使用该培养基时,往往发现霉菌和酵母菌的菌落会聚集，影响平板正常计数。有时还会出现几个稀释度的平板计数出现倒挂现象，即低浓度平板的菌落数比高浓度平板的菌落数要高。原因是样品中防腐剂的抑菌作用。建议在孟加拉红培养基中加入吐温-80。吐温-80作为中和剂可以起到中和防腐剂的作用，以提高霉菌和酵母菌的检出率和检测的准确率。同时，吐温-80是一种非离子型的表面活性剂,可有效加强液体的流动性从而使其中的物质更均匀分布。吐温-80能降低两相界面张力,使孢子在培养基中充分分散,减少菌落聚集,从而大大提高霉菌菌落检出率。

2检验结果报告

2.1菌落总数的结果报告

在日常检验工作中，经常会出现这样的情况：对1∶10 稀释的检样的2个平行的培养基上形成的菌落计数 (cfu/g(mL) ），在扣除空白对照的菌落数之后，发现上述2个平行的培养基上的菌落数分别为1和0，而在《化妆品卫生规范》中未规定其报告方式。上述情况发生在细菌菌落总数和霉菌、酵母菌菌落总数测定中，以概率来分析, 该检样的菌落总数 ( cfu/g(mL) ) 在0～10 之间,但不等于0 ,也不等于10 ,即0 < N（该检样的菌落总数） < 10。这种情况应该报告为< 10 cfu/ g (mL)。这种报告方式包含了该检样所含菌落总数的可能情况,又符合数字的修约规则，是比较科学、准确的。

2.2霉菌和酵母菌的计数和报告方式

在《化妆品卫生规范》中规定：“每g（或每mL）化妆品含霉菌和酵母菌数以cfu/g(mL)表示”。在食品等项目的日常检验工作中，是将霉菌和酵母菌分别计数和报告的。在化妆品的检验中，也可参照食品检验的报告方式，这样可以更加具体地分别反映化妆品中霉菌和酵母菌的污染情况。

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