婴幼儿喘息性疾病FeNO检测与sIgE、IgE的相关性分析
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[摘要] 目的 研究婴幼儿喘息性疾病呼出气一氧化氮（feno）水平及其与特异性免疫球蛋白E（sIgE）、IgE的相关性。 方法 选择2012年5月～2015年6月于东莞康华医院就诊的65例婴幼儿喘息患儿作为观察组，按照1∶1匹配原则选择同期体检的健康儿童65例作为对照组，测定FeNO水平，采集血清测定总IgE（tIgE）和尘螨、蛋清、牛奶sIgE以及白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、干扰素-γ（IFN-γ）含量。 结果 观察组FeNO水平均显著高于对照组（P < 0.01），血清tIgE以及尘螨、蛋清、牛奶sIgE含量均显著高于对照组（P < 0.01），血清IL-4、IL-10、IFN-γ含量均明显高于对照组（P < 0.01）。FeNO水平与血清tIgE和尘螨、蛋清、牛奶sIgE及IL-4、IL-10、IFN-γ含量呈正相关（r = 0.772、0.602、0.685、0.591、0.714、0.693、0.753，P < 0.05）。 结论 婴幼儿喘息性疾病的FeNO显著升高，接触变应原所引起的sIgE、IgE升高是造成FeNO升高的相关因素，而FeNO的升高又会促进炎症介质的分泌、加重气道炎性反应。
[关键词] 婴幼儿喘息；呼出气一氧化氮；特异性免疫球蛋白E；炎症介质
[中图分类号]R725 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）04（c）-0097-04
[Abstract] Objective To study correlation of exhaled nitric oxide （FeNO） detection and sIgE， IgE in infants with asthmatic disease. Methods 65 infantile with asthmatic disease in Dongguan Kanghua Hospital during May 2012 to June 2015 were enrolled as observation group， 65 cases healthy children received physical examination during the same period were enrolled as control group. FeNO level was determined. Serum was collected and total IgE and dust mite， egg white， milk sIgE and IL-4， IL-10， IFN-γ contents were determined. Results FeNO level of observation group was significantly higher than that of control group （P < 0.01）. Serum total IgE content and dust mites， egg white， milk sIgE contents in observation group were significantly higher than those in control group （P < 0.01）. Serum IL-4， IL-10， IFN-γ contents in observation group were significantly higher than those in control group （P < 0.01）. FeNO level was positively correlated with serum total IgE content and dust mites， egg white， milk sIgE contents， serum IL-4， IL-10， IFN-γ contents （r = 0.772， 0.602， 0.685， 0.591， 0.714， 0.693， 0.753， P < 0.05）. Conclusion FeNO of infants with asthmatic disease is significantly higher. Increase of sIgE， IgE contents caused by allergens is related factors with increase of FeNO level， and the increase of FeNO will promote the secretion of inflammatory mediators and aggravate airway inflammation.
[Key words] Infant wheezing； Exhaled nitric oxide； Specific IgE； Inflammatory mediators
婴幼儿喘息性疾病是一类异质性疾病，诱发因素众多，其中支气管哮喘是造成婴幼儿喘息重要的原因之一。IgE是机体接触变应原后由B淋巴细胞分泌的一类免疫球蛋白，主要介导Ⅰ型变态反应，在婴幼儿喘息性疾病的发生和发展中发挥重要作用[1]。近年来关于支气管哮喘的研究发现，内源性一氧化氮（NO）的产生与哮喘患者气道的慢性炎症密切相关，哮喘患者呼出气一氧化氮（FeNO）水平能够反映气道炎性反应程度[2-3]。但是，目前关于婴幼儿喘息性疾病的FeNO变化情况尚未完全明确。本研究主要分析婴幼儿喘息性疾病FeNO水平及其与SlgE、IgE的相关性，为临床早期诊断与治疗提供⒖肌
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2012年5月～2015年6月就诊的65例婴幼儿喘息患儿作为观察组，均符合《诸福棠实用儿科学》婴幼儿喘息性疾病的诊断标准[4]，排除心脏疾病、先天性呼吸道发育畸形、异物吸入等引起的喘息性疾病。男42例，女23例；年龄3个月～10岁，平均（5.58±0.78）岁；发病原因：喘息性支气管炎26例，支气管哮喘20例，毛细支气管炎13例，其他6例；喘息时间0～30 d，平均（16.25±2.14）d；发作程度： 0.05），具有可比性。
1.2 FeNO的测定方法
两组儿童均在安静状态下进行FeNO测定，根据美国胸科学会推荐儿童FeNO规范标准[5]，采用无锡尚沃生物科技有限公司Sunvou-D100纳库仑一氧化氮分析，儿童在自然睡眠或水合氯醛催眠情况下，先将肺内气体尽量全部呼出，而后用口唇包紧过滤器并用力吸入不含NO的气体（NO < 5×10-9mmol/L），立即以50 mL/s的速度呼出肺内气体、时间6～10 s，在仪器上读取FeNO数值，结果以ppb表示，1 ppb=1×109 mol/L。年龄小的儿童不能掌握单次呼气测定技术，选用离线潮气呼气测定技术，根据婴幼儿年龄选择不同型号潮气面罩，把潮气面罩通过潮气采样器与气体样袋连接好，平静呼吸状态下，面罩扣紧口鼻，潮气呼吸30～60 s至半袋，密封好气袋，通过干燥盒与仪器连接，测定离线FeNO数值。
1.3 血清指标检测方法
两组儿童均于清晨采集静脉外周血3 mL，3000 r/min离心10 min（离心半径3 cm）取血清，采用日立7600型全自动生化分析仪检测总免疫球蛋白E（tIgE）以及尘螨、蛋清、牛奶特异性免疫球蛋白E（sige）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、干扰素-γ（IFN-γ）的含量。检测方法：酶联免疫吸附法，所有试剂盒均购自北京晶美生物工程有限公司。
1.4 统计学方法
采用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Pearson检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患儿FeNO水平比较
观察组患儿FeNO水平为（32.59±5.52）×10-9mmol/L，对照组患儿FeNO水平为（16.33±2.18）×10-9mmol/L；观察组患儿FeNO水平均显著高于对照组（t = 22.088，P < 0.01）。
2.2 两组患儿血清tige及尘螨、蛋清、牛奶sIgE含量比较
观察组患儿血清tIgE及尘螨、蛋清、牛奶sIgE含量均显著高于对照组（P < 0.01）。见表1。
2.3 两组患儿血清炎症介质含量比较
观察组患儿血清IL-4、IL-10、IFN-γ含量均明显高于对照组（P < 0.01）。见表2。
2.4 FeNO水平与IgE、炎症介质含量的相关性
FeNO水平与血清tIgE及尘螨、蛋清、牛奶sIgE含量呈正相关，与血清IL-4、IL-10、IFN-γ含量呈正相关（P < 0.05）。见表3。
3 讨论
婴幼儿喘息性疾病是指具有喘息症状的呼吸道综合征，具体包括毛细支气管炎、喘息性支气管炎、支气管哮喘。气道炎性反应增强是婴幼儿喘息性疾病的突出特征，气道内多种炎症细胞被激活、多种炎症介质释放增多[6]。
在生理状态下，NO是人类气道中唯一具有舒张气道及血管平滑肌作用的神经递质。一氧化氮合酶（NOS）是催化产生NO的关I酶[7]，具有三种亚型，其中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在喘息性疾病中起关键作用。急性发作时，各种炎症因子和炎症介质均能刺激气道上皮细胞与巨噬细胞中的iNOS，合成大量NO，因此FeNO同时也是炎性反应的重要信号分子，反映了炎性反应的激活和级联放大。已有研究发现，FeNO与支气管哮喘患者气道内的炎性反应密切相关[8]，但是关于婴幼儿喘息性疾病的FeNO变化情况尚未完全明确。滑超等[9]通过对164例哮喘预测指数（API）阳性婴幼儿与78例API阴性儿的比较研究中，报道API阳性组儿FeNO[（32.41±4.41）×10-9mmol/L]明显高于API阴性组[（9.05±0.56）×10-9mmol/L]，认为气道内NO生成增多与婴幼儿喘息性疾病的发生有关，本文研究结果也支持这一观点。
IgE最早发现于过敏性疾病，一直以来都是检测人体是否为过敏体质的重要指标之一。血清中tIgE是由B淋巴细胞合成的一类免疫球蛋白，主要介导Ⅰ型变态反应，在气道慢性炎症和气道高反应性的发生、发展过程中，IgE与肥大细胞、嗜碱粒细胞表面的Feek I相结合并诱导炎症细胞发生脱颗粒、释放多种炎症介质，进而造成血管充血、组织炎症和气道痉挛[10-11]。与健康儿童相比，喘息性婴幼儿发生气道过敏的概率过高，常常出现反复哮喘，临床调查结果显示，约有1/3的此类患儿在9岁前出现过哮喘发作。同时，喘息性婴幼儿常具有高水平血清IgE，这主要是过敏原进入特应性体质的个体后刺激机体产生的，试验结果显示，88.89%喘息患儿吸入过敏原检测阳性。另有研究结果指出，血清IgE还能预测喘息性患儿的预后，IgE阴性的喘息性婴幼儿在学龄前期基本能停止发作，而IgE阳性者不然。本文研究中，观察组患儿血清中tIgE的含量显著高于对照组，且与FeNO水平呈正相关，国内外学者也有类似的文献报道[12-13]，提示婴幼儿喘息患儿血清中升高的tIgE含量与FeNO水平的升高有关，患儿接触外界变应原会增加tIgE含量，进而通过IgE与炎症细胞上相应受体Feek I结合来增加NO的释放。
婴幼儿喘息患儿长期接触变应原是造成B淋巴细胞激活、IgE合成增多的重要因素。吸入性和食入性过敏原在不同年龄阶段分布不同，3岁以下的患儿食入性过敏原偏多，然而，随着年龄的增长和外出活动的增加，食物性过敏源也可能转化为吸入性过敏原。只有明确过敏原，才能制订更有针对性的治疗和预防方案，提高诊治效率。尘螨、蛋清、牛奶是造成婴幼儿喘息最常见的三类变应原，刺激体内B淋巴细胞能产生相应的sIgE[14]。已有研究报道，婴幼儿喘息患儿血清尘螨、蛋清、牛奶sIgE的检出率显著高于对照组[15]。本文研究中，观察组患儿血清尘螨、蛋清、牛奶sIgE含量显著高于对照组，且与FeNO水平呈正相关。说明婴幼儿喘息患儿血清中升高的尘螨、蛋清、牛奶sIgE含量与FeNO水平的升高有关，患儿接触尘螨、蛋清、牛奶等变应原会激活B细胞、增加sIgE的分泌，进而通过激活肥大细胞、嗜碱粒细胞等炎症细胞来增加NO的产生。另外，在进行sIgE检测时，本研究发现相当一部分喘息性疾病患儿对2种及以上过敏原阳性，可能为多种过敏原混合致敏导致的结果，这与国内相关报道一致[16]，临床医师应格外注意。
NO是体内调节炎性反应的重要信号分子，气道内在IgE作用下大量产生的NO能够调控炎症介质的分泌、影响炎性反应[17]。IL-4、IL-10、IFN-γ是介导气道炎性反应重要的炎症介质，在婴幼儿喘息的病情发展过程中，IL-4、IL-10、IFN-γ的释放显著增多，局部浸润的炎症介质能够介导炎症细胞的募集及炎性反应的级联放大[18-19]。梁坤等[20]通过对53例难治性肺炎支原体肺炎患儿与30例支气管异物患儿肺泡灌洗液IL-6、IL-10以及T细胞亚群的比较，报道难治性肺炎支原体患儿肺泡灌洗液中IL-6、IL-10水平均明显高于支气管异物患儿，细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均明显低于支气管异物患儿。本文研究中，观察组患儿血清IL-4、IL-10、IFN-γ含量显著高于对照组，且与FeNO水平呈正相关。这就说明气道内过多产生的NO参与气道炎性反应的调控，NO能够增加炎症介质IL-4、IL-10、IFN-γ的释放、加重气道炎性反应。
本研究结果表明，婴幼儿喘息性疾病的FeNO显著升高，接触应原所引起的sIgE、IgE升高是造成升高的相关因素，而FeNO的升高又会促进炎症介质的分泌、加重气道炎性反应。需要指出的是，本文样本量相对较少，且均来自同一家医院，且观察指标相对较少，婴幼儿喘息性疾病FeNO与sIgE、IgE的相关性还有待于扩大样本量作进一步的研究。
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（收稿日期：2016-10-20 本文编辑：李亚聪）