不同果汁饮料对离体乳牙釉质表面超微结构及钙磷溶出量的影响

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【摘要】 目的 探不同果汁饮料对离体乳牙釉质形态学的改变及对乳牙釉质脱矿程度的影响。方法 60颗无龋坏离体乳牙， 分三组浸泡于3种不同的果汁饮料中（橙汁组、苹果汁组、葡萄汁组）， 每组20颗；另取10颗无龋坏离体乳牙浸泡于矿泉水中作为对照组， 四组均置于36.5 ℃恒温箱中， 浸泡25 h， 每5小时换1次浸泡液。采用pH计测量不同果汁饮料的pH值；扫描电镜（SEM）观察各组离体乳牙处理前后牙釉质表面超微结构的改变；并应用化学分析法测量各组处理乳牙后饮料中的钙、磷溶出含量。结果 橙汁组、苹果汁组和葡萄汁组经处理后乳牙表面均有不同程度的改变， 牙齿表面均有色素沉着， 颜色发生一定的改变， 且随着浸泡时间的延长， 牙齿变色加重。其中橙汁组变为橙黄色， 苹果汁组变为浅绿色， 葡萄汁组变为深紫色。对照组乳牙牙釉质表面结构光滑， 结构致密， 未见凹陷缺损。橙汁组处理后， 牙齿表层釉柱不均匀断裂， 局部区域断裂消失， 牙齿表面有零星的小凹陷；苹果汁组处理后， 牙釉质呈蜂窝状结构， 釉中心遭到严重破坏， 表面有比较深的小凹陷， 甚至加大连接成片；葡萄汁组处理后， 表面形态不规则， 组织结构疏松， 可见软质悬浮。对照组、橙汁组、苹果汁组、葡萄汁组初始pH值分别为（6.32±0.09）、（3.75±1.01）、（2.94±1.05）、（4.01±1.02）。对照组、葡萄汁组、橙汁组、苹果汁组的pH值依次降低（P

1.39）mmol/L较对照组的钙总溶出量（3.63±1.37）、磷总溶出量（5.46±1.39）mmol/L均显著升高（P

【关键词】 果汁饮料； 乳牙； 牙釉质； 脱矿； 超微结构； 钙； 磷； 溶出量

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.35.020

【Abstract】 Objective To investigate influence by different fruit drink on in vitro deciduous tooth enamel morphological changes and demineralization degree. Methods A total of 60 in vitro deciduous teeth without carious lesion were divided into three groups with different fruit drink （orange juice group， apple juice group and grape juice group）， with 20 teeth in each group. Another 10 teeth without carious lesion were taken into mineral water as control group. All the four groups were placed in calorstat 36.5℃ for 25 h， with soak solution changed each 5 hours. pH values of differenct fruit drinks were detected by pH paper. Tooth enamel ultrastructure change before and after processing of in vitro deciduous teeth in three groups was observed by scanning electron microscope（SEM）， and dissolving-out quantity of calcium and phosphorus after processing of deciduous teeth in three groups was measured by chemical analysis. Results After processing， orange juice group， apple juice group and grape juice group had different degrees of change in deciduous teeth surface， with hyperpigmentation and changed color in tooth surface， and tooth discoloration is aggravated as the extension of immersion time. The orange juice group changed for orange-yellow， apple juice group changed for reseda， and grape juice group changed for modena. The control group had smooth and dense structured enamel surface without fovea and defect. After processing， tooth surface enamel fiber had uneven fracture in orange juice group， with local fracture disappeared and sporadic small fovea could be seen； enamel fiber had honeycomb structure in apple juice group， and enamel center was heavily damaged with deep fovea and even connected into piece； irregular surface morphology， loose organization structure and soft suspension could be seen in grape juice group. The control group， orange juice group， apple juice group and grape juice group had pH value respectively as （6.32±0.09）， （3.75±1.01）， （2.94±1.05） and （4.01±1.02）. The control group， grape juice group， orange juice group and apple juice group had decreased pH value one after another （P

（15.65±1.47） and （6.73±1.45） mmol/L， and total dissolving-out quantity of phosphorus as （10.41±1.43）， （13.19±1.45） and （7.15±1.39） mmol/L， which were all higher than total dissolving-out quantity of calcium as （3.63±1.37） mmol/L and total dissolving-out quantity of phosphorus as （5.46±1.39） mmol/L in the control group （P

【Key words】 Fruit drink； Deciduous teeth； Tooth enamel； Demineralization； Ultrastructure； Calcium； Phosphorus； Dissolving-out quantity

龋病是儿童常见的多发病， 会引发口腔炎症、胃肠消化不良等。随着经济水平的提高， 人们对于果汁饮料的消耗量越来越大， 大多饮料均呈酸性， 当酸直接作用于牙釉质时， 使釉质中的羟磷灰石结晶溶解， 破坏牙釉质超微结构， 造成牙釉质酸蚀脱矿[1]。饮料的pH越低， 浸泡时间越长， 对牙釉质的损伤就越大， 脱矿效果越显著[2]。本研究主要探讨橙汁、苹果汁、葡萄汁3种不同果汁饮料对儿童离体乳牙釉质超微结构的改变及对乳牙釉质脱矿的影响， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 选取2015年7月～2016年6月本院口腔科拔除的无龋坏离体乳牙60颗， 分三组浸泡于3种不同的果汁饮料中（橙汁组、苹果汁组、葡萄汁组）， 每组20颗；另取10颗无龋坏离体乳牙浸泡于矿泉水中作为对照组。纳入标准：患儿年龄5～7岁， 全身健康状况良好；口腔卫生良好；均因替牙期乳牙松动或乳牙滞留就诊；肉眼观察牙冠完整、无龋坏、无龋坏脱矿；釉质发育良好；均截去牙根， 仅保留牙冠部分。选取市售橙汁、苹果汁、葡萄汁饮料以及矿泉水作为实验饮料， 均于本地超市购买。

1. 2 方法

1. 2. 1 牙齿标本的制备 用牙科手机去除牙根部， 牙冠进行超声清洗， 磨去釉质表面菌斑及色素。然后将牙齿标本在无水乙醇中浸泡48 h脱水， 超声清洗3 min， 去除标本表面的油脂和食物残渣， 用清水浸泡冲洗， 置于密闭干燥的无菌容器内烘干， 4 ℃保存备用（所有标本均在拔后1周内使用）。

1. 2. 2 实验分组及处理 将60颗无龋坏离体乳牙随机分为三组， 各20颗， 各组牙齿标本均用蒸馏水清洗， 每颗牙的冠根断面采用抗酸透明指甲油覆w。分别浸泡于3种不同的果汁饮料中（橙汁、苹果汁、葡萄汁）；另取10颗无龋坏离体乳牙浸泡于矿泉水中作为对照组， 均放置于（37.0±0.5 ）℃恒温箱内， 浸泡25 h， 每5小时换1次浸泡液。

1. 3 观察指标

1. 3. 1 不同饮料pH值的测定 所有果汁饮料均在常温下开瓶15 min内取50 ml， 采用HANNA pH计测量各浸泡液的pH值， 重复测量3次， 取平均值。

1. 3. 2 不同饮料处理后乳牙釉质SEM镜下超微结构观察 将牙齿标本清洗、梯度酒精脱水、干燥等处理后， 采用SEM观察不同种类果汁饮料处理后的牙釉质表面超微结构变化， 并保存影像资料。

1. 3. 3 不同饮料处理后钙磷溶出量的检测 收集各组不同时间段处理后的饮料各1 ml， 采用化学分析法测量不同果汁饮料浸泡乳牙不同时间后的钙、磷溶出量， 应用全自动生化测量仪检测。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P

2 结果

2. 1 肉眼观察 橙汁组、苹果汁组和葡萄汁组经处理后乳牙表面均有不同程度的改变， 牙齿表面均有色素沉着， 颜色发生一定的改变， 且随着浸泡时间的延长， 牙齿变色加重。其中橙汁组变为橙黄色， 苹果汁组变为浅绿色， 葡萄汁组变为深紫色。

2. 2 SEM观察 对照组乳牙牙釉质表面结构光滑， 结构致密， 未见凹陷缺损。橙汁组处理后， 牙齿表层釉柱不均匀断裂， 局部区域断裂消失， 牙齿表面有零星的小凹陷；苹果汁组处理后， 牙釉质呈蜂窝状结构， 釉中心遭到严重破坏， 表面有比较深的小凹陷， 甚至加大连接成片；葡萄汁组处理后， 表面形态不规则， 组织结构疏松， 可见软质悬浮。

2. 3 四组饮料pH值情况 对照组、橙汁组、苹果汁组、葡萄汁组初始pH值分别为：（6.32±0.09）、（3.75±1.01）、（2.94±

1.05）、（4.01±1.02）。对照组、葡萄汁组、橙汁组、苹果汁组的pH值依次降低（P

2. 4 四组饮料处理乳牙25 h后钙、磷总溶出量情况 果汁饮料处理乳牙25 h后， 橙汁组、苹果汁组、葡萄汁组的钙总溶出量及磷总溶出量较对照组均显著升高（P