高效液相色谱法测定人血浆中缬沙坦的药物浓度

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇高效液相色谱法测定人血浆中缬沙坦的药物浓度范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

摘要：目的：测定人血浆中缬沙坦的药物浓度。方法：采用液固萃取法提取，高效液相色谱法测定。色谱柱：HypersilODSC18（4?6nm×200nm，5μm）；流动相：乙腈－0?01mol/L的磷酸盐缓冲液（50∶50，pH2?8）；流速：1?5ml/min；荧光检测器：λex为265nm，λem为378nm。结果：缬沙坦的保留时间为5?4min，定量线性范围0?05～5μg/ml，方法回收率>90％（n=5），日内、日间RSD<10％（n=5）。结论：本法快速，定量准确，可用于血药浓度测定及人体药代动力学研究。

关键词：缬沙坦；血药浓度；高效液相色谱法

ABSTRACT：OBJECTIVE： To determine the valsartan concentration in human plasma? METHODS： The plasma sample was extracted with a liquid－ solid method and determined with HPLC， stationary phase was Hypensil ODS C18(4? 6nm× 200nm， 5μ m)， mobile phase consisted of acetonitrile and 0? 01mol/L KH2PO4 buffer(pH 2? 8)(50∶ 50)? The flow rate was 1? 5ml/min? Detection was performed with fluorescence detector at λ ex 265nm， λ em 378nm? RESULTS： The retention time of valsartan was about 5? 4 minutes， and the linear range of quantity was 0? 05～ 5μ g/ml? The recoveries of methodology were more than 90％ (n=5)? Inter－ day and intra－ day RSD were less then 10％ (n=5)? CONCLUSION： This method is rapid and accurate? It can be applied to determining the plasma valsartan concentration and studying on pharmacokinetics?

KEY WORDS： valsartan； plasma concentration of drug； HPLC

缬沙坦（valsartan）是新一代的血管紧张素受体拮抗剂，其作用机制是阻滞血管紧张素Ⅱ与其受体亚型AT1受体的结合而产生降压作用。研究表明，缬沙坦是一种高度选择性的AT1受体拮抗剂，具有良好的抗高血压作用，适用于各种类型的轻、中度高血压，尤其对血管紧张素转换酶抑制剂不能耐受的患者，且无致咳的不良反应[1]。本实验建立了一种灵敏、准确的高效液相色谱法，此方法可用于缬沙坦的血药浓度测定及人体药代动力学的研究。

1材料与方法

1．1仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，包括616泵，717自动进样器，447荧光检测器，Millennium2010色谱管理系统（美国Water公司）；XW－80型旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；80－1型离心机（上海手术器械厂）；Corning240酸度计（美国产）。SPEC8固相萃取柱（100mg，2?5ml）购于大连化学物理研究所。

缬沙坦对照品（哈尔滨宁宇药物研究所提供，含量99?6％）；缬沙坦胶囊（批号：060200，有效期：2001年8月，规格：80mg/粒，购于诺华制有限公司）；乙腈为色谱纯，盐酸、磷酸二氢钾均为分析纯，水为超纯水。

1．2各种试液的配制

磷酸盐缓冲液（0?01mol/L，pH2?8）：称取1?36g磷酸二氢钾定容于1000ml容量瓶中，用磷酸调pH即得。

稀盐酸（0?1mol/L）：量取9ml浓盐酸定容于1000ml容量瓶中，摇匀即得。

标准贮备液：精密称取缬沙坦对照品5?03mg，用流动相定容于50ml容量瓶中，使成100μg/ml的标准贮备液，置于?4℃冰箱保存。

1．3色谱条件

色谱柱：HpersilODSC18（5μm，4?6nm×200nm）；流动相∶乙腈－磷酸盐缓冲液（0?01mol/L，pH2?8）（50∶50）；流速：1?5ml/min；柱温：25℃。

1．4血样处理方法

SPEC8固相萃取小柱依次用甲醇、稀盐酸各2ml冲洗1次，取血浆1ml与稀盐酸1ml旋涡混匀后上柱，然后用磷酸盐缓冲液1ml冲洗1次，整个过程均在减压下进行，抽干后除去减压系统，加入0?5ml流动相洗脱，收集洗脱液，进样25μl，按上述色谱条件测定。

2结果

2．1色谱行为

在上述色谱条件下，缬沙坦与血浆内源性物质实现较好分离，色谱图见图1。缬沙坦的保留时间为5?4min。

2．2标准曲线

取空白血浆900μl，精密加入100μl不同浓度的标准液使成为0?05、0?1、0?25、0?5、1、2?5、5μg/ml的含药标准血浆。按“血样处理方法”项下操作，记录峰面积，以峰面积A对浓度C做回归，得回归方程：C=2?01×10－6

A＋0?0348，r=0?9999。

2．3回收率

于空白血浆中准确加入定量的缬沙坦标准液，配成低、中、高浓度分别为0?05、1、5μg/ml的含药标准血浆各5份。按“血样处理方法”项下操作，记录峰面积，代入标准曲线方程计算浓度，以计算浓度与配制浓度的比值计算方法回收率，结果见表1。

2．4精密度

配制浓度为0?05、1、5μg/ml的缬沙坦标准含药血浆各10份，按“血样处理方法”项下操作，于当日不同时间测定低、中、高浓度各5份，计算日内变异，另低、中、高浓度的样品各5份在连续的5日内测定，计算日间变异，结果见表2。

按色谱峰信噪比（S/N≥3）计，该方法的最低检测浓度为5ng/ml。

3方法应用

20名男性健康志愿者单剂量口服缬沙坦胶囊160mg，服药前采空白血，分别于服药后0?5、1、1．5、2、3、4、6、8、12、24h采静脉血3ml，用本法测定血浆缬沙坦浓度，其药－时曲线见图2。由图2可知，服药后约2h缬沙坦达血浆峰浓度1?6μg/ml。用梯型法计算该药的AUC0～24为10?8μg/（h／ml）。

表1缬沙坦测定的方法回收率（n=5）

表2缬沙坦测定的精密度结果（n=5）

4讨论

本文建立了一种灵敏、快速、准确的高效液相色谱法测定血浆中缬沙坦的药物浓度，且该方法适用于缬沙坦的药代动力学方面的研究。与文献相比[2]，该方法的改进之处在于提取方法，试验中发现用乙腈－磷酸盐缓冲液（30∶50）1ml洗脱小柱，在去掉血中杂质的同时有30％的药物损失，本试验中去掉这步，发现并不影响药物的分离。

本试验采用固相萃取技术处理血浆样品，该技术具有操作简便、快速、安全性高、重现性好等优点，且适合大批样品的预处理，但不同公司生产的同一类型的固相萃取剂的萃取性能并不完全相同，甚至同一公司的不同批号间的萃取回收率也可能不同。为确保试验的回收率和精密度，本试验用的固相萃取柱为同一公司同一批号的产品。