榆黄菇产漆酶发酵条件研究
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摘要 采用单因素试验优化榆黄菇产漆酶发酵条件，筛选出最适宜产漆酶发酵条件为：接种量3%，温度30 ℃，初始pH值6.0～7.0，加入可溶性淀粉作为碳源，加入蛋白胨、酵母膏为氮源。
关键词 榆黄菇；漆酶；发酵条件
中图分类号 S646.1+9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）09-0079-01
榆黄菇是一种分解纤维素、木质素能力较强的木腐性食用菌，可在榆树等阔叶树、玉米芯、稻草培养基上生长发育。漆酶为一类多酚氧化酶[1]，是可降解纤维素、木质素的主要酶类之一。其在稻草秸秆的生物处理、生物除污[2]、高分子聚合[3]等方面的应用具有巨大的潜力。本文对榆黄菇产漆酶发酵条件进行了系统研究，以期为秸秆生物质工业化开发利用提供必要的理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试菌株为榆黄菇菌株，由吉林农业科技学院微生物实验室提供。其他供试材料有马铃薯、蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉、乳糖、玉米秸秆粉碎物、氨基乙酸、蛋白胨、酵母膏、酒石酸铵、豆饼粉。供试试剂有（NH4）2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O等。
1.2 试验方法
将活化的榆黄菇菌种接种于PDA培养基上，30 ℃培养，待培养基上长满菌落备用。
1.2.1 接种量对榆黄菇产漆酶的影响。各量取45.0 mL培养基放入6个150 mL的三角瓶中，接种量按1%～11%（按2个百分点递增），30 ℃，110 r/min摇床振荡培养，7 d后测酶活[4-5]。
1.2.2 温度对榆黄菇产漆酶的影响。在30 ℃条件下培养7 d后，分别在20、25、30、35、40 ℃的温度条件下再培养4 d后测酶活，其方法同上。
1.2.3 初始pH值对榆黄菇产漆酶的影响。用醋酸缓冲液把基础液体培养基的初始pH值分别调为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0，接种方法和培养方法同上，测酶活。
1.2.4 碳源对榆黄菇产漆酶的影响。在基础产酶培养基中分别添加浓度为20 g/L的蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉、乳糖和玉米秸秆粉碎物作为碳源。培养条件和酶活测定方法同上。
1.2.5 氮源对榆黄菇产漆酶的影响。在基础产酶培养基中分别加入浓度为1 g/L的硫酸铵、蛋白胨、酵母膏、酒石酸铵、豆饼粉作为氮源，培养条件和酶活测定方法同上。
1.3 漆酶活力测定
按照Rodort Bourbounais[6]方法，以ABTS为底物，酶的活力OD值定义为：1 min内反应的酶液在420 nm波长下吸光值的增加量。
2 结果与分析
2.1 接种量对榆黄菇产漆酶的影响
从图1可以看出，最好的接种量是3%。接种量太多，培养液粘度会增加，容易造成溶氧不足，菌丝营养不足，且产生大量的生物热，使产酶活力下降。
2.2 温度对榆黄菇产漆酶的影响
过高或过低的温度均会降低菌株代谢速率，温度较低时，菌体生长较慢，酶活力偏低；温度较高时，菌体过早老化，酶活也偏低。从图2可以看出，最适温度为30 ℃。
2.3 初始pH值对榆黄菇产漆酶的影响
从图3可以看出，pH值对榆黄菇产酶活力的影响较大，pH值在6.0～7.0时酶活力最大，过酸或过碱都会引起酶活的变化。
2.4 碳源对榆黄菇产漆酶的影响
从图4可以看出，榆黄菇产漆酶最适碳源为可溶性淀粉，其次是葡萄糖和玉米秸秆粉碎物。
2.5 氮源对榆黄菇产漆酶的影响
从图5可以看出，蛋白胨和酵母膏等有机氮源更适于榆黄菇菌丝生长和产酶活力的提高，可能是有机氮源富含各种氨基酸，可以直接被菌丝吸收利用。
3 结论与讨论
单因素试验结果表明，榆黄菇产漆酶的最佳发酵条件为：接种量3%，温度30 ℃，初始pH值6.0～7.0，加入可溶性淀粉作为碳源，加入蛋白胨、酵母膏作为氮源。这一结果为今后进一步研究稻草秸秆降解工艺条件奠定了良好的基础。
4 参考文献
[1] 王佳玲，余惠生.白腐菌漆酶的研究进展[J].微生物学通报，1998，25（4）：233-236.
[2] 周攀登，付时雨.漆酶催化对苯基苯酚的聚合[J].高分子学报，2004（4）：614-616.
[3] 邱卫华，陈洪章.红外光谱分析木质素在漆酶酶法改性中的反应性[J].光谱学与光谱分析，2008，28（7）：1501-1505.
[4] 赵爽，殷贝贝，刘宇，等.11种鸡腿菇液体发酵产漆酶的研究[J].江苏农业科学，2012，40（4）：231-233.
[5] 刘苹，唐志红，李梦玉，等.金针菇漆酶活性测定的最佳反应条件及液体培养胞外酶的研究[J].食品科技，2012（6）：14-17.
[6] ROBERT B，MICHAEL G.Verateyl alcohol oxidase from the ligin-degrading basidionycete pleurotus sajor-caju[J].Biochem，1988（255）：445-450.